|
|
Regulace exprese biotransformačních enzymů a transportérů placentární bariéry
Stejskalová, Lucie ; Pávek, Petr (vedoucí práce) ; Modrianský, Martin (oponent) ; Vondráček, Jan (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra Farmakologie a toxikologie Kandidát Mgr. Lucie Stejskalová Školitel Doc. PharmDr. Petr Pávek, Ph.D. Název disertační práce Regulace exprese biotransformačních enzymů a transportérů placentární bariéry Placenta je jedinečný orgán komunikace mezi matkou a plodem. Je nezbytná pro udržení těhotenství, vývoj plodu, ochranu plodu a zajišťuje řadu funkcí, především pak výměnu látek a plynů mezi matkou a plodem. Významná je také její endokrinní a metabolická funkce. Klíčovou roli v ochraně plodu hraje vrstva syncytiotrofoblastu, která funguje nejen jako fyziologická bariéra, ale také jako metabolická bariéra díky expresi mnoha biotransformačních enzymů a transportérů. Hladina jednotlivých biotransformačních enzymů se v průběhu těhotenství mění. Většina enzymů má velmi nízké množství mRNA a v některých případech nebyla zjištěna ani jejich významná hladina proteinu či enzymová aktivita. Cytochrom CYP1A1 je jediný placentární enzym metabolizující xenobiotika, jehož exprese a aktivita je signifikantní po celou dobu těhotenství. Navíc se zjistilo, že exprese a aktivita placentárního CYP1A1 je silně indukována u matek kuřaček a v choriokarcinomových buněčných liniích BeWo a JEG-3 při jejich kultivaci s ligandy arylhydrokarbonového...
|
|
|
Polimeric nanoparticles stabilised by surfactants
Pánek, Jiří ; Štěpánek, Petr (vedoucí práce) ; Pleštil, Josef (oponent) ; Sedlák, Marián (oponent)
Polymeric nanoparticles stabilised by surfactants Doctoral Thesis Abstract Jiří Pánek Supervisor: RNDr. Petr Štěpánek, DrSc. PRAGUE 2010 CHARLES UNIVERSITY IN PRAGUE Faculty of Science Department of Physical and Macromolecular Chemistry INSTITUTE OF MACROMOLECULAR CHEMISTRY AS CR, v. v. i. Department of Supramolecular Polymer Systems Polymerní nanočástice stabilizované surfaktanty Souhrn disertační práce Jiří Pánek Školitel: RNDr. Petr Štěpánek, DrSc. PRAHA 2010 UNIVERZITA KARLOVA V PRAZE Přírodovědecká fakulta Katedra fyzikální a makromolekulární chemie ÚSTAV MAKROMOLEKULÁRNÍ CHEMIE AV ČR, v. v. i. Oddělení nadmolekulárních polymerních soustav 14 15 ÚVOD V současnosti se nanotechnologie stává hybnou silou vývoje nových materiálů, jak v oblasti materiálové vědy tak v biomedicínckých aplikacích. Nanomateriály mohou být konstruovány "seshora" , tj. vytvářením nových struktur v již existujících materiálech, nebo "zespodu", tedy spontánním uspořádáváním stavebních kamenů na molekulární úrovni s využitím různých fyzikálně chemických interakcí. Pro konstrukci spontánně uspořádaných nanomateriálů jsou vhodnými stavebními kameny polymery a kopolymery, protože umožňují velké množství kombinací základních jednotek a jejich vzájemných interakcí. Cíle mé disertace sledují současný vývoj a jsou orientovány na přípravu...
|
|
|
Produkce a sekrece faktorů virulence Bordetella pertussis
Držmíšek, Jakub ; Večerek, Branislav (vedoucí práce) ; Petráčková, Denisa (oponent)
Bordetella pertussis je lidský patogen, který způsobuje infekční onemocnění nazývané černý či dávivý kašel. K úspěšné infekci a kolonizaci hostitele využívá řadu faktorů virulence, jako jsou toxiny (adenylát cyklázový toxin, pertuzový toxin) a adheziny (filamentózní hemaglutinin, pertaktin, fimbrie). Kromě těchto hlavních faktorů byl u rodu Bordetella nalezen také sekreční systém typu 3 (T3SS), který má schopnost dopravit efektorové proteiny přímo do cytoplazmy hostitelské buňky. V návaznosti na naší předchozí charakterizaci delečního mutanta genu kódujícího RNA chaperonu Hfq (Δhfq), která prokázala, že protein Hfq je nezbytný pro řádnou funkci T3SS, byly připraveny a purifikovány rekombinantní proteiny BopB, BopD, BopC, BopN. Jejich pomocí byly získány specifické protilátky potřebné ke studiu funkčnosti sekrečního systému a buněčné lokalizace těchto proteinů. Pomocí získaných protilátek byla poprvé detekována in vitro sekrece proteinu BopC kmenem B. pertussis po pasáži v lidských makrofázích. Rovněž byly využity izolované rekombinantní translokátory BopB a BopD k testování jejich pórotvorné aktivity. Dále byla porovnána produkce proteinů v divokém a Δhfq kmenu před i po pasáži v lidských makrofázích. Byly zjištěny rozdíly v množství sekretovaných a membránových proteinů a některé z těchto proteinů...
|
|
|
Efektivita kognitivního tréninku u osob po traumatickém poranění mozku nebo cévní mozkové příhodě
Kozáková, Eva ; Kulišťák, Petr (vedoucí práce) ; Stehlík, Luděk (oponent)
Téma kognitivního tréninku a jeho efektivity je v posledních letech živě diskutováno. Navzdory velkému množství literatury věnující se této oblasti výzkumu stále není zřejmé, jak široký je dosah kognitivního tréninku a jaké jsou možnosti uplatnění transferového efektu. Cílem této práce bylo ověřit efektivitu počítačového tréninku N-back (n=11) ve srovnání se skupinovým tréninkem v rehabilitačním zařízení (n=9) a aktivní kontrolní skupinou (n=5), která trénovala v jednoduché počítačové hře. Výzkumný design sestává z kombinace meziskupinového srovnání těchto tří intervencí a vnitroskupinového srovnání kontrolní skupiny, která později absolvovala také trénink N-back. Předpokládali jsme, že se po třítýdenním tréninkovém plánu projeví signifikantně větší zlepšení u kognitivního tréninku oproti kontrolní intervenci. Dále jsme očekávali výraznější zlepšení výkonu v úlohách vyžadujících exekutivní kontrolu u N-back tréninku oproti obecněji zaměřenému skupinovému tréninku. Z kognitivních funkcí byly výkonovými testy zkoumány pozornost, exekutivní kontrola, fluidní inteligence, krátkodobá a pracovní paměť. Sledovali jsme také psychické rozpoložení pomocí sebeposuzovacího dotazníku. Nenašli jsme statisticky signifikantní rozdíl v účinnosti N-back a skupinové terapie. N-back se ve srovnání s kontrolním...
|
|
|
Vyprávění příběhů podle TAT ve stavu mírné zátěže: Vliv obranných mechanismů na zvládání mírné zátěže.
Míčková, Martina ; Šípek, Jiří (vedoucí práce) ; Čáp, David (oponent)
Tato diplomová práce je zaměřena na vyprávění příběhů ve stavu mírné zátěže. V teoretické části shrnuje základní informace o stresu, obranných mechanismech, Tematicko-apercepčním testu a podrobněji se pak věnuje teorii obranných mechanismů Phebe Cramerové a metodě Defense Mechanism Manual, která slouží k vyhodnocování obran z TAT. Cílem empirické části této práce pak je zjistit, jestli má mírná bolest, způsobená tím, že zkoumané osoby drží ruku napnutou před sebou v pozici výdrže, vliv na množství obranných mechanismů v příbězích, které při tom vypráví na základě TAT. Druhým cílem bylo ověřit, jestli má množství a kvalita používaných obran vliv na délku této výdrže. Regresní analýzou bylo zjištěno, že množství používaných obranných mechanismů nemá žádnou signifikantní souvislost s mírou pociťované bolesti. Podařilo se ovšem prokázat, že vyšší používání obranných mechanismů ovlivňuje pozitivně délku výdrže. Tento efekt je ještě silnější, když jsou do modelu zahrnuty pouze vyspělejší obranné mechanismy, tedy projekce a identifikace.
|
|
|
Site-directed mutagenesis of human cytochromes P450 family 1 and their interacting partners
Milichovský, Jan ; Martínek, Václav (vedoucí práce) ; Befekadu, Asfaw (oponent) ; Souček, Pavel (oponent)
Cytochromy P450 jsou rozsáhlou skupinou proteinů metabolizujících široké množství substrátů. Řada z nich se významně podílí na metabolismu léčiv či jiných xenobiotik včetně řady chemických karcinogenů. Hemoprotein cytochrom b5 je jedno-elektronový přenašeč elektronů spolupracující s NADPH:cytochrom P450 reduktasou a NADH:cytochrom b5 reduktasou 3, který je spjatý s metabolismem zprostředkovaným cytochromy P450. Cytochrom b5 je schopen prostřednictvím modulace aktivity cytochromů P450 ovlivňovat metabolismus řady látek. Cílem disertační práce bylo využít místně cílenou mutagenezi cytochromů P450 rodiny 1 k lepšímu porozumění mechanismu jejich nitroreduktasové aktivity. Dále byla studována interakce cytochromu b5 s cytochromy P450 podrodiny 1A pomocí místně cílené mutageneze jejich předpokládaného kontaktního rozhraní. V rámci práce byly také, za použití kombinace experimentu a teoretických přístupů, studovány rozdíly v redukci lidských cytochromů P450 v intaktních bakteriálních buňkách během jejich heterologní exprese. Z výsledků vyplývá, že nitroreduktasová aktivita CYP1A1, CYP1A2 a CYP1B1 je zprostředkována hydroxylovou skupinou v aktivním místě a jejím zavedením lze u CYP1B1 artificiálně vyvolat nitroreduktasovou aktivitu. Pomocí mutageneze byly také identifikovány aminokyseliny, které se...
|
|
|
Mitochondrial uncoupling and mitochondrial morphology in relation to type-2 diabetes
Špaček, Tomáš ; Ježek, Petr (vedoucí práce) ; Kalous, Martin (oponent) ; Vařecha, Miroslav (oponent)
2 1 SOUHRN Hlavním faktorem řídícím glukózou stimulovanou inzulínovou sekreci (GSIS) v buňkách je pravděpodobně zvýšení ATP/ADP poměru následkem zvýšené glykolýzy a následně i oxidativní fosforylace. Bioenergetika INS-1E buněk, představujících platný model pro studium insulinové sekrece in vitro, byla kvantifikována pomocí respirometrie a současného snímání mitochondriálního membránového potenciálu ( m). Ukázali jsme, že přidání glukózy k buňkám, které ji vypotřebovaly, má za následek skokové zvýšení jak respirace, tak m během GSIS. Současně s tím se také zvýšil endogenní respirační poměr stavu 3/4, jehož závislost na glukóze byla hyperbolická. Maximální hodnoty dosahoval tento poměr při maximální GSIS. Zároveň jsme se pokusili postihnout "toxický" efekt mastných kyselin na inzulínovou sekreci tím, že byla studována GSIS za přídavku linoleové kyseliny. Tento přídavek způsobil podstatné zmenšení skoku respirace i m po přídavku glukózy, současně s tím snížil závislost poměru stavu 3/4 na glukóze a také množství sekretovaného inzulínu, což bylo způsobeno mitochondriálním odpřažením. Energetický stav mitochondrií, a tím i míra oxidativní fosforylace může být popsána bioenergetickými parametry. Kromě nich se tento stav také odráží ve struktuře mitochondriální sítě. Patologické změny diabetických buněk by se tedy...
|
|
|
Mechanizmy regulace signální transdukce povrchovými proteiny leukocytu*.
Štěpánek, Ondřej ; Brdička, Tomáš (vedoucí práce) ; Brábek, Jan (oponent) ; Vomastek, Tomáš (oponent)
Jádro dizertační práce "Mechanizmy regulace signální transdukce povrchovými proteiny leukocytů" tvoří tři publikace v zahraničních impaktovaných časopisech, které se zabývají leukocytární signalizací jak na úrovni jednotlivých signálních drah tak v kontextu mnohobuněčného organizmu. Největší pozornost je věnována signalizaci přes T buněčný receptor, která hraje ústřední roli ve vývoji a funkci T buněk a je tedy zásadní signální drahou pro správnou funkci specifické složky imunitního systému. Transmembránová proteinová tyrozin fosfatáza CD148 byla považována za negativní regulátor T receptorové signalizace prostřednictvím defosforylace proteinů LAT a PLCγ1. Součástí této práce je studie ukazující, že CD148 je schopna ovlivňovat signalizaci i na úrovni Lck, a to jak pozitivně tak negativně. O tom, který směr regulace T receptorové signalizace převáží, pravděpodobně rozhoduje biochemická situace v buňce např. aktivita jiné fosfatázy CD45. Druhý projekt, který je součástí dizertační práce, se týká charakterizace transmembránového adaptorového proteinu PRR7. Tento adaptor inhibuje signalizaci T buněčného receptoru tím, že negativně reguluje množství Lck v buňce a T buněčného receptoru na buněčném povrchu. Studium signalizace z hlediska mnohobuněčného organizmu je reprezentováno expresní analýzou CD148 v...
|
|
|
Titaniun Dioxide - Phosphonate Assemblies as Medical Nanoprobes
Řehoř, Ivan ; Lukeš, Ivan (vedoucí práce) ; Lang, Kamil (oponent) ; Peters, Joop (oponent)
Využití částic oxidu titaničitého s fosfonáty v medicíně Ivan Řehoř Doktorská Práce Abstrakt: Multimodální diagnosticko-terapeutická nanosonda TiO2@RhdGd byla připravena a úspěšně použita pro sledování a zobrazování buněk za podmínek in-vitro a in-vivo. Dále byla použita pro zabíjení rakovinných buněk za podmínek in-vitro. Nanočástice TiO2 o průměru 12 nm tvoří jádro pro fosfonáty modifikované molekuly, zodpovědné za kontrast v tomografii magnetické rezonance (MRI) a v optickém zobrazování. Deriváty fosfonových kyselin, použité pro povrchovou modifikaci umožňují ireverzibilní zakotvení vysokých množství obou molekul v jediném kroku. Připravená sonda vykazuje vysokou 1 H r1 relaxivitu, stejně jako hustotu relaxivity, klíčové parametry pro její použití v MRI. Přítomnost fluorescenční značky ve struktuře umožňuje její vizualizaci pomocí fluorescenční mikroskopie. Použitelnost sondy pro medicínské zobrazování byla studována na třech živých modelech - mesenchymálních kmenových buňkách, rakovinných HeLa buňkách a T-lymfocytech. Sonda nevykazovala toxicitu v žádném z uvedených modelů a bylo zjištěno její dlouhodobé skladování v lyzozomálním kompartmentu. Označené buňky byly úspěšně vizualizovány in-vitro pomocí fluorescenční mikroskopie a MRI. Následně bylo dosaženo úspěšného zobrazení označených buněk in- vivo....
|
|
|
Formulace tekutých pediatrických přípravků v podmínkách nemocniční lékárny
Klovrzová, Sylva ; Šklubalová, Zdeňka (vedoucí práce) ; Dittrich, Milan (oponent) ; Masteiková, Ruta (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra: Farmaceutické technologie Kandidát: PharmDr. Sylva Klovrzová Školitel: doc. PharmDr. Zdeňka Šklubalová, Ph.D. Název disertační práce: Formulace tekutých pediatrických přípravků v podmínkách nemocniční lékárny Perorální roztoky nebo suspenze jsou pro pediatrickou populaci vhodnou alternativou k přípravě tvrdých tobolek v lékárně. Práce se zabývá formulací stabilních tekutých perorálních přípravků s obsahem kardiologických léčiv propranol-hydrochloridu, sotalol-hydrochloridu a furosemidu určených pro děti od narození do cca 6 let věku. Při tvorbě receptur byl kladen důraz na jednoduchost rutinní přípravy v lékárně a použití pomocných látek, u nichž byla hlavním kritériem výběru bezpečnost pro dětskou populaci, v minimálním nezbytném množství. U všech formulací byla ve stanovených časových intervalech po dobu minimálně 180 dnů při dvou různých teplotách sledována současně chemická stabilita účinné látky a protimikrobní přísady pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie. Za tímto účelem byly na katedře Analytické chemie Farmaceutické fakulty Univerzity Karlovy vyvinuty a validovány specifické analytické metody. Současně bylo sledováno pH a změny organoleptických vlastností. Kritériem chemické stability přípravku bylo snížení...
|
host ::
RSS.