|
Testování protizánětlivého účinku bakterálních komponent na buňkách makrofágových a epitelových linií
Zákostelská, Zuzana
Testování protizánětlivého účinku bakteriálních složek na buněčných liniích RAW 264.7, J774,A1 a na makrofázích izolovaných z peritonea myši BALB/c Idiopatické střevní záněty (ISZ) zahrnující Crohnovu chorobu a ulcerozní kolitidu vznikají u geneticky predisponovaných jedinců v důsledku abnormální imunitní odpovědi na složky komenzální mikroflóry. Mechanizmus tohoto působení zůstává navzdory intenzivně probíhajícímu výzkumu neobjasněn. Naše předchozí studie potvrdily, že bakteriální lyzáty izolované z kmene Lactobacillus casei DN114001, Bacteroides distasonis a mykobakteriální proteiny tepelného šoku (HSP) zmírňují průběh kolitidy u experimentálních myších modelů ISZ. Cílem naší studie bylo objasnit vliv bakteriálních složek na makrofágy, jež hrají důležitou úlohu při vzniku chronického zánětu. Efekt bakteriálních komponent jsme testovali na makrofágových liniích RAW 264.7 a J774A.1 a na makrofázích izolovaných z peritonea myší BALB/c. Životnost makrofágů byla testována průtokovou cytometrií. Kvalitativní a kvantitativní zastoupení cytokinů v supernatantech bylo stanoveno proteinovými mikročipy a metodou ELISA. Dalším cílem bylo prokázat změny v aktivaci signální dráhy NFкB pomocí kitu TransAM. Zjistili jsme, že bakteriální komponenty neovlivňují životnost kultivovaných buněk. Prokázali jsme, že bakteriální...
|
|
Imigrace a nezaměstnanost ve Španělsku
Recinová, Kristýna ; Tichá, Milena (vedoucí práce) ; Havlík, Radomír (oponent)
Cílem této diplomové práce je analýza a vymezení vztahu mezi imigrací a nezaměstnaností ve Španělsku a jejich vliv na imigraci a nezaměstnanost v Evropské unii (EU). Zvláštní pozornost je věnována analýze předmětných fenoménů v kontextu španělského prostředí. Pomocí syntetického přístupu dochází k propojení těchto sfér na různých úrovních, především pak v oblasti volného pohybu osob a pracovních sil. Z teoretických a praktických hledisek jsou zkoumány jejich ekonomické projevy v azylové a (i)migrační politice země, integrace cizinců a sociální projevy legálního a nelegálního přistěhovalectví. Důraz je kladen na celkový dopad a důsledky ovlivňující migrační toky a na shrnutí vývoje nezaměstnanosti ve sledovaném regionu. Komparativním přístupem jsou zhodnoceny změny vyvolané v oblasti azylu a migrace v prostoru EU před a po přijetí Lisabonské smlouvy. Nastíněno je strategické směřování imigrační politiky Španělska a EU. Výsledky jsou posouzeny z hlediska prognostické metody a budoucího evropského demografického vývoje. V závěru jsou shrnuty hlavní myšlenky a uzlové body diplomové práce.
|
|
Význam aktivačních a inhibičních ligandů na leukemických blastech pro stimulaci NK buněk.
Imryšková, Zuzana ; Hromadníková, Ilona (vedoucí práce) ; Bezouška, Karel (oponent)
V posledních desetiletích se s rozvojem imunologických a molekulárně biologických metod vyvíjí nové diagnostické a léčebné postupy, které umožňují včasnou diagnostiku choroby, zajišťují stratifikaci pacientů do léčebných skupin a směřují k individuální terapii. Naprosto zřetelné jsou výsledky týkající se leukémií. Současné léčebné postupy umožňují nejen delší přežití pacientů, ale často i jejich trvalé vyléčení. Avšak věda jde ještě dále, v současné době probíhá intenzivní výzkum imunoterapie NK buňkami, která by mohla doléčit minimální reziduální nemoc po chemoterapeutické léčbě, způsobenou perzistentními maligními buňkami. Další výhodou tohoto léčebného postupu je eliminace systémového onemocnění v důsledku přesně cílené léčby. V této práci jsme se věnovali in vitro testování možnosti využití imunoterapeutické léčby NK buňkami u akutní a chronické myeloidní leukémie a akutní lymfoblastické leukémie. Metodou průtokové cytometrie jsme detekovali aktivační a inhibiční ligandy na leukemických blastech odvozené od molekul MHC I. třídy (MIC-A, MIC-B), molekuly MHC I. třídy (HLA- E) a UL-16 vazebné proteiny (ULBP-1, ULBP-2, ULBP-3 a ULBP-4). Dále jsme se věnovali detekci exprese inducibilního proteinu tepelného šoku Hsp70 na plazmatické membráně a v cytosolu monoklonální protilátkou cmHsp70.1 FITC...
|
|
Funkční analýza kvality spermií po působení vybraných endokrinních disruptorů
Linhartová, Zuzana ; Liberda, Jiří (vedoucí práce) ; Ryšlavá, Helena (oponent)
Cíl Cílem mé práce bylo zjistit, zda vybrané endokrinní disruptory (EDs) mají vliv na reprodukční parametry spermií. Moje práce se díky dvěma experimentálním modelům, na kterých byl zkoumán vliv vybraných ED, dělí na dvě části: A) pokusy na praseti divokém (Sus scrofa), B) pokusy na okounu říčním (Perca fluviatilis L.). A) Na kančím modelu byl testován vliv vybraných EDs (zearalenone (ZEN), di(2-ethylhexyl) ftalát (DEHP), vinklozolin (VIN) na průběh kapacitace, akrosomální reakce in vitro a změny v detekci a lokalizaci vybraných proteinů. B) Na rybím modelu byl zkoumán vliv vybraného ED bisfenol A (BPA) na motilitu a rychlost pohybu rybích spermií Výsledky Savčí model U savčího modelu zkoumané EDs průkazně ovlivňovaly průběh kapacitace i akrosomální reakci ve srovnání s kontrolními vzorky. Metodou průtoková cytometrie jsem prokázala nárůst počtu značených buněk v průběhu kapacitace a snížení počtu značených buňek po AR a porovnala rozdíly mezi experimentálními vzorky a kontrolními. Ve vyšších koncentracích EDs jednoznačně potlačovaly akrosomální reakci a tudíž snižovaly počet spermií schopných oplození. Vypovídací schopnost výsledků detekce akrosomální reakce byla potvrzena využitím různých metodických přístupů (imunofluorescence, imunodetekce, SDS elektroforéza, chlotetracyklinová analýza). Rybí model U...
|
|
Role proteinů tepelného šoku v patogenezi leukémie
Kopřivová, Olga ; Hromadníková, Ilona (vedoucí práce) ; Černá, Marie (oponent)
(Abstrakt) Některé z proteinů tepelného šoku (Hsp), např. inducibilní forma Hsp70, jsou exprimovány na povrchu nádorových buněk. Vysoká exprese Hsp se odráží ve vlastnostech nádorových buněk, jako je schopnost progrese, metastazování a odolnost vůči apoptóze. Otázkou zůstává, zda genová exprese Hsp koreluje s expresí povrchovou. Cílem mé práce bylo porovnat povrchovou a genovou expresi Hsp70 a sledovat genovou expresi některých dalších Hsp proteinů (Hsp27, Hsp60, Hsp90 a HspBP1) u leukémie. Výzkum byl proveden na buněčných liniích získaných z leukemických blastů pacientů s akutní myeloidní leukémií: UoC-M1, HL-60, OCI/AML3, THP-1, HU-3 a TF-1, které byly kultivovány in vitro. Povrchová exprese Hsp70 byla zjišť ována pomocí průtokové cytometrie a genová exprese jednotlivých Hsp byla studována pomocí RT-PCR v reálném čase. Bylo zjištěno, že vysoká povrchová exprese Hsp70 nekoreluje s expresí genovou v důsledku negativní zpětné vazby, uplatňující se při regulaci exprese Hsp. Genová exprese Hsp27 byla zvýšena oproti hodnotám kontrolního souboru u všech nádorových linií, nejvíce pak u linie THP-1. Genová exprese Hsp60 byla zvýšena oproti hodnotám kontrolního souboru u všech nádorových linií, mezi jednotlivými liniemi nebyly výrazné rozdíly v expresi. Genová exprese Hsp90 byla nejméně zvýšená oproti...
|
|
Infekce makrofágové linie J774.2 bakterií Francisella tularensis - změny membránových a nitrobuněčných molekul
Novosad, Jakub ; Krčmová, Irena (vedoucí práce) ; Raška, Milan (oponent) ; Kročová, Zuzana (oponent)
Souhrn: Úvod: Francisella tularensis (F.t.) je fakultativně intracelulárně rostoucí, gram negativní bakterie, způsobující onemocnění tularémie. Díky svým ojedinělým biologickým vlastnostem byla Centrem pro kontrolu chorob (CDC) v USA zařazena v souvislosti s nebezpečím jejího zneužití při vývoji biologických zbraní a bioterorismu mezi vysoce rizikové infekční agens (kategorie A). I přes intenzivní výzkum na poli imunobiologie infekce F.t. zůstává stále mnoho nezodpovězených otázek. Naše práce byla zaměřena na analýzu povrchové exprese molekul CD54, CD86 a CD16/32 a produkce oxidu dusnatého (NO) myší monocyto-makrofágovou linií J774.2 v průběhu primární infekce F.t. kmenem LVS in vitro a při předchozí či následné stimulaci lipopolysacharidem (LPS) a/nebo interferonem gama (IFNγ). Metodika: Exprese povrchových molekul byla měřena pomocí průtokového cytometru 3, 6, 9, 12 a 24 hodin po zahájení infekce a stimulace a byla hodnocena absolutní hodnota průměrné fluorescence (MFI) a její změny v čase (∆MFI). Produkce NO v buněčném supernatantu byla analyzována Griessovou metodou, ve stejných časových intervalech. Myší monocyto-makrofágová linie J774.2 byla kultivována v kultivačních lahvích v přítomnosti média Dulbecco's MEM s obsahem glutamátu a 10% fetálního bovinního séra (FBS) (2x106 buněk/10ml média). Buňky...
|
|
Self-excited oscillations of elastic tubes induced by fluid-structure interactin
Štembera, Vítězslav ; Maršík, František (vedoucí práce) ; Okrouhlík, Miloslav (oponent) ; Žitný, Rudolf (oponent)
Samobuzené oscilace elastických trubic indukované interakcí mezi tekutinou a stěnou V práci je zkoumán jev samobuzených oscilací elastických trubic indukovaný interakcí mezi tekutinou a stěnou. Práce je motivována kolapsem a jevem samobuzených oscilací cévních stěn, pozorovaným v lidském těle. Pro popis stěny trubice je použita smíšená formulace konečných prvků. Model stěny je pros- torově třídimenzionální, zahrnující velké deformace a popisující stěnu jako nelineární hyperela- stický materiál. Jsou implementovány tři materiálové modely : Neo-Hookeův model, isotropní Gentův model a anisotropní Gentův model. Poslední dva zmíněné modely obsahují jev tzv. omezené roztažnosti vláken, vyskytující se v reálných cévách. Anisotropní verze Gentova mod- elu umožňuje popsat dvě nezávislá vinutí kolagenních vláken ve stěně trubice. Pro časovou inte- graci je použita Hilber-Hughes-Taylorova metoda. Tekutina je považována za Newtonovskou, modelovanou pomocí metody umělé stlačitelnosti. Model proudění tekutiny je založen na prostorově jednodimenzionálním přiblížení a používá metodu přímek. Oba typy řešičů jsou testovány pomocí příkladů s analytickým řešením. Řešiče pro tekutinu a stěnu jsou tzv....
|
|
Ocenění společnosti Blatenská ryba, spol. s r.o.
Bláhová, Jana ; Sieber, Patrik (vedoucí práce) ; Štamfestová, Petra (oponent)
Diplomová práce se věnuje tématu oceňování podniku. Cílem práce je stanovení hodnoty společnosti Blatenská ryba, spol. s r.o. pro vlastníky. Práce se dělí na dvě části -- teoretickou a praktickou. V teoretické části je popsán nezbytný metodologický aparát a následně je aplikován v praktické části. V rámci ocenění podniku je představena strategická analýza a finanční analýza, které identifikují kritické faktory, jež by mohly ovlivnit hodnotu vybrané společnosti. Poté jsou prognózovány generátory hodnoty a sestaven finanční plán. Pro ocenění Blatenské ryby, spol. s r.o. byla zvolena metoda diskontovaných volných peněžních toků pro vlastníky a věřitele (FCFF).
|
|
Využití technik enkapsulace k přípravě výrobků určených pro dětskou výživu
Hoová, Julie ; Čarnecká, Martina (oponent) ; Skoumalová, Petra (vedoucí práce)
Tato diplomová práce se zabývá použitím různých forem zvolených probiotických bakterií Lactobacillus acidophilus a Bifidobacterium breve za účelem aplikace do dětských výrobků. Teoretická část je zaměřena na popis probiotických bakterií, metod enkapsulace a složení střevní mikroflóry u dětí. Dále byly popsány období dětské stravy a výrobky k tomu určené. V experimentální části byla testována především možnost enkapsulace a lyofilizace probiotických buněk. Buňky byly enkapsulovány do alginátových částic. Částice byly připraveny pomocí enkapsulátoru a jako nejvhodnější byly zvoleny částice připravené pomocí trysky o velikosti 300 µm. Dále byla pomocí průtokového cytometru, fluorescenční mikroskopie a kultivačně (metodou KTJ) sledována viabilita buněk. Viabilita buněk byla sledována při dlouhodobém skladování ve vybraných dětských výrobcích. Vhodná doba skladování nelyofilizovaných alginátových částic v reálných potravinách byla stanovena na 1 až 2 měsíce. Lyofilizované alginátové částice bylo možné skladovat déle jak 3 měsíce. Na závěr byla sledována také stabilita alginátových částic a především viabilita enkapsulovaných i neenkapsulovaných buněk v podmínkách gastrointestinálního traktu. Rovněž byla srovnána viabilita lyofilizovaných buněk a buněk enkapsulovaných do lyofilizovaných částic. Z dosažených výsledků lze konstatovat, že neenkapsulované buňky probiotických bakterií jsou náchylnější k negativnímu působení trávicích šťáv, kdy po simulaci lidského trávení došlo k usmrcení přibližně 80 % probiotických buněk. Naopak alginátové částice prokázaly ochranu buněk před trávicími šťávami, kdy po neúplném uvolnění buněk z částic nepřesáhlo zastoupení mrtvých buněk po skončení trávení 20 %. Po dostatečné rehydrataci bylo obdobných výsledků dosaženo také u lyofilizovaných alginátových částic. Lyofilizované alginátové částice tak byly stanoveny jako nejvhodnější aplikační forma do dětských výrobků.
|
|
Změny metabolismu mozku v léčbě psychiatrických onemocnění sledované pomocí kvantitativní encefalografie a pozitronové emisní tomografie
Kohútová, Barbora ; Horáček, Jiří (vedoucí práce) ; Libiger, Jan (oponent) ; Syka, Josef (oponent)
Elektromagnetická mozková tomografie s nízkým rozlišením (Low Resolution Brain Elecromagnetic Tomography, LORETA) je metoda kvantitativní analýzy EEG (QEEG) umožňující aktuální, 3D zobrazení distribuce elektrické aktivity mozku. Pozitronová emisní tomografie (PET) zobrazuje změny metabolizmu a prokrvení jednotlivých mozkových oblastí. Cílem práce bylo hodnocení neurobiologického korelátu změny psychopatologie v průběhu terapie schizofrenie a deprese pomocí metod QEEG a PET, zhodnocení využitelnosti těchto dvou metod ve výzkumu a porovnání mechanismu účinku dvou léčebných intervencí, antipsychotik a nízkofrekvenční repetitivní transkraniální magnetické stimulace (NF-rTMS), z hlediska QEEG. Úvod je tvořen teoretickými informacemi o výše uvedených onemocněních a jejich léčbě a přehledem QEEG a PET nálezů. Empirická část práce je souborem čtyřech původních publikací (Tislerova et al., 2008; Horacek et al., 2007; Kopecek et al., 2011; Kopecek et al., 2008), závěrem je pak společná diskuze a zhodnocení cílů práce. Ve studii 1 byly u schizofrenních pacientů léčených monoterapií olanzapinem nebo klozapinem v porovnání s pacienty dosud neléčenými nalezeny změny v elektrické aktivitě v předním cingulu, ve frontálních a temporo-limbických oblastech. Ve studii 2 došlo u schizofrenních pacientů se sluchovými...
|
host ::
