|
Panels of steroid receptor reporter cell lines for compound profiling and development of selective ligands for estrogen receptor alpha and beta
Sedlák, David ; Bartůněk, Petr (vedoucí práce) ; Anzenbacher, Pavel (oponent) ; Kasal, Alexander (oponent)
Obr 1. Porovnání odpovědí U2OS-ERα/3xERE (●), U2OS-ERαwt -LBD/9xGal4UAS (○) a U2OS- ERαG420C -LBD/9xGal4UAS ( ) z reportérových buněčných linií vystavených vzrůstající koncentraci vybraných látek. Agonistická odpověď reportérových buněčných linií v závislosti na E2 (A), DES (B) a PPT (C) je vyjádřena jako podíl naměřené luciferázové aktivity vyvolané testovanou látkou a luciferázovou aktivitou naměřenou maximální stimulací receptoru pomocí E2. V antagonistickém modu byly buňky inkubovány s různými koncentracemi ICI 182.780 (D), raloxifene hydrochloridu (E) and tamoxifen citrátu (F). Panel reportérových linií využívajících plnodélkových steroidních receptorů je zvláště vhodný pro detailní studium mechanizmů jakými látky dosahují biologických projevů vazbou na steroidní receptory. Tento systém totiž poskytuje biologicky více významnou informaci o aktivitě testované látky tím, že odráží například aktivitu jiných transkripčních faktorů, signálních drah, přítomnost různých kofaktorů v buňce atd. Užitečnost těchto buněčných linií jsme prokázali "screeningem" chemické knihovny obsahující 3700 látek a identifikací nových agonistů a antagonistů pro PR, MR a GR. Obr 3. Účinek E2 na růst myší mléčné žlázy u mladých myších samic. Prepubertálním mladým myším bylo po dobu 10 dnů podáváno subkutánně pouze olejové...
|
|
Využití separačních metod pro studium biologicky aktivních látek ve vodách
Vydrová, Lucie ; Friedl, Zdeněk (oponent) ; Opatřilová, Radka (oponent) ; Chýlková,, Jaromíra (oponent) ; Vávrová, Milada (vedoucí práce)
Léčiva patří mezi biologicky aktivní látky, které se odlišují různými funkčními skupinami, fyzikálně-chemickými a biologickými vlastnostmi. Tyto chemické látky, v současnosti zařazované mezi „nové“ kontaminanty, se kumulují v různých složkách životního prostředí. Do životního prostředí se dostávají v průběhu jejich průmyslové výroby, dále v důsledku používání v léčebných zařízeních nebo v domácnostech. Protože se jedná o látky biologicky aktivní, mohou v různých složkách životního prostředí negativně ovlivňovat zde probíhající procesy. Léčiva se vyznačují po chemické stránce vesměs odlišnou strukturou, a proto jsou často rozdělována nejen podle struktury, ale zejména podle jejich účinku na živé organismy. Na základě posouzení množství používaných léčiv v České republice lze konstatovat, že nejčastěji používanými léčivy jsou nesteroidní protizánětlivé léky patřící do skupiny analgetik. Důvodem jejich velkého rozšíření je především to, že téměř všechny si lze zajistit bez lékařského předpisu. Vybraná analgetika byla sledována nejen v odpadních vodách odebrané z velkokapacitní čistírny odpadních vod situované v Brně – Modřicích, ale také v povrchové vodě z povodí řeky Křetínky, kde byla odebírána ze dvou odběrových míst. Kontaminace povrchových vod léčivy typu analgetik byla hodnocena nejen v České Republice, ale také v povodí řeky Thurso ve Skotsku a na Taiwanu. Pro extrakci sledovaných reziduí z matrice byla ve všech případech použita extrakce pevnou fází (SPE). Jako analytická koncovka byla pro experimenty prováděné v České republice aplikována vysokoúčinná kapalinová chromatografie (HPLC) s detekcí diodovým polem (DAD) nebo hmotnostní spektrometrie (MS). Pro experimenty hodnocené ve Skotsku a na Taiwanu byla také použita kapalinová chromatografie s hmotnostní detekcí. Metoda HPLC/MS umožňuje zjišťovat hodnocené analyty i ve velmi nízkých koncentracích (ng ? l-1). V rámci prováděných experimentů byla většinou identifikována a následně kvantifikována všechna sledovaná analgetika, a to jak v odpadních vodách, tak také z povodí řeky Křetínky v České republice. Totéž lze konstatovat také pro nálezy zjištěné v povrchových vodách v povodí řeky Thurso ve Skotsku a v povodí tří řek na Taiwanu a zjištěné koncentrace analgetik v povrchových vodách z různých světových lokalit byly porovnány.
|
|
Molecular Study of Intracellular Changes as Response of Microorganisms to Environment
Čarnecká, Martina ; Kráčmar, Stanislav (oponent) ; Márová, Ivana (vedoucí práce)
In nature yeast cells live in a rapidly changing environment. In order to survive constant fluctuations in their external surroundings cells quickly and effectively adapt their internal systems to meet the challenges of each new environment. One aspect of this cellular adaptation is the reorganization of genomic expression to the program required for growth in each environment. This genomic reorganization results in altered cell’s metabolome and physiology. The molecular responses elicited by the cells dictate whether the organism adapts, survives or, if injured beyond repair, undergoes death. In this work, genomic, proteomic and metabolic profiles of some carotenogenic yeasts grown in optimal and stress conditions were compared. To increase the yield of carotenoid pigments, several types of environmental changes as well as nutrition stress were applied. Yeasts were cultivated under osmotic, oxidative and metal stress, on different carbon sources or on various waste materials (whey, potato extract). Some chemical and UV mutants were also prepared and tested. Changes on yeast metabolome level were studied by RP-HPLC/MS technique used to carotenoid analysis. Another possibility to study stress response is preparation of transformed cells with deletion of definite genes. For setup, the method was first optimized for fission yeasts Schizosaccharomyces pombe. Technique is based on knockout constructs that contain regions homologous to the target gene cloned into vectors carrying dominant drug-resistance markers. As transformation vector plasmid pCloneKanmx confering resistance to geneticine was used. The vector and constructs were digested by relevant restriction endonucleases, ligated, amplified in E.coli and transformed into the yeast Schizosaccharomyces pombe sp286. Positive transformants were selected according to resistance to geneticine and checking PCR products. By analysis of transformants proteins required for meiotic chromosome segregation were identified.
|
|
Vliv vybraných kardiovaskulárních léčiv nalézaných ve vodním prostředí na ryby
STEINBACH, Christoph Antonius
Kardiovaskulární léčiva patří v České republice k nejvíce předepisovaným. V důsledku jejich vysoké spotřeby jsou jejich rezidua často detekována v odpadních a povrchových vodách. Verapamil, diltiazem a atenolol jsou významnými zástupci kardiovaskulárních léčiv, proto jsem se ve své dizertační práci zaměřil na studium jejich akutních i subchronických účinků na ryby, především na schopnost jejich kumulace v těle ryb, metabolizmus a biologický poločas. S cílem zlepšit metodiku posuzování histopatologických změn rybího srdce jsem vypracoval jednotný protokol pro kvantitativní hodnocení výsledků histologického vyšetření srdeční komory a koronárních cév, včetně výpočtu srdečního indexu. Kvalitní a systematická vyšetření histopatologických změn srdce jsou velmi důležitá, neboť srdce přestavuje jeden z cílů působení kardiovaskulárních léčiv a dalších chemických látek. Verapamil, diltiazem a atenolol vyvolaly při expozici ryb vysokým koncentracím těchto látek změny, které jsou známy jako terapeutické a vedlejší účinky u lidí. Akutní expozice embryí a larev kapra obecného verapamilu v koncentraci, v níž se vyskytuje v krevní plazmě lidí léčených touto látkou, vyvolala u pokusných organizmů snížení tepové frekvence srdce. Akutní i chronická expozice kaprů této látce u nich navíc způsobila periferní otok a tvorbu krvácenin v trávicím traktu. U pstruhů duhových exponovaných diltiazemu bylo při histopatologickém vyšetření zjištěno rozšíření srdečních a jaterních cév. To znamená, že i tento prostředek má obdobný farmakologický účinek na ryby jako na lidi. Také subchronická expozice pstruha duhového atenololu v koncentraci, v níž se vyskytuje v krevní plazmě lidí léčených touto látkou, vyvolala histopatologické změny kardiovaskulárního systému. Verapamil, diltiazem a atenolol můžeme klasifikovat jako látky s malou schopností biokoncentrace v rybách. Biokoncentrační faktor (BCF) verapamilu v homogenátech celého kapřího těla se pohyboval v rozmezí od 6,6 do 16,6. BCF diltiazemu v tkáních pstruha byl také relativně nízký (0,5 - 194), přičemž nejvyšší hodnota BCF byla prokázána u ledvin a v dalších tkáních klesala v následujícím pořadí: játra > svalovina > krevní plazma. BCF atenololu v tkáních pstruha duhového byl z testovaných látek nejnižší a pohyboval se v rozmezí 0,002 - 0,27. Nevyšší hodnoty BFC byly zjištěny v játrech, následovaly ledviny a nejnižší ve svalovině. V plasmě byla koncentrace atenololu pod mezí kvantifikace. Verapamil vykazoval delší biologický poločas u ryb (10,6 dne) než u lidí, což indikuje nízkou rychlost biotransformace anebo eliminace verapamilu u ryb. Odhadovaný biologický poločas diltiazemu v játrech (1,5 hodiny) a v ledvinách (6,2 hodiny) byl řádově shodný s hodnotou zjištěnou v krevní plazmě lidí. Biologický poločas atenololu u pstruha studován nebyl, neboť u této látky byla prokázána velmi nízká schopnost biokoncentrace. U ryb exponovaných diltiazemu bylo pomocí kapalinové chromatografie s hmotnostní detekcí s vysokým rozlišením (LC/HRMS) identifikováno osm metabolitů této látky se 17 různými izoformami. Bylo zjištěno, že diltiazem v rybách podléhá biotransformaci zahrnující demethylaci, deacetylaci a hydroxylaci, což potvrzuje, že diltiazem byl v rybách metabolizován podobným způsobem jako v lidském těle, tedy převážně demethylací a deacetylací. Na druhou stranu, hydroxylace, která se na biotransformaci podílela v nejmenší míře, se jeví jako druhově specifická. Při studiu vlivu verapamilu na raná vývojová stádia kapra obecného, která byla vystavena environmentálně relevantním koncentracím tohoto léčiva, po dobu jednoho měsíce, nebyly u pokusných organismů prokázány žádné negativní účinky. Ale u pstruha duhového, který byl vystaven po dobu 42 dnů atenololu a diltiazemu v koncentracích, které jsou detekovány v životním prostředí, byly zjištěny některé fyziologické změny. V případě atenololu se jednalo o změny hematologických a biochemických ukazatelů v krvi a u diltiazemu o změny v aktivitě antioxidačních enzymů v j
|
|
Derivatives of Rhodanine as Potential Antifungal Drugs
El Zein, Mariana ; Opletalová, Veronika (vedoucí práce) ; Kopecký, Kamil (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutické chemie kontroly léčiv Student: Mariana El-Zein Vedoucí diplomové práce: doc. RNDr. Veronika Opletalová, Ph.D. Název: Deriváty rhodaninu jako potenciální antifungální léčiva Rhodanin (2-thioxo-1,3-thiazolidin-4-on) je strukturálním základem mnoha biologicky aktivních sloučenin a potenciálních léčiv. Antifungální vlastnosti derivátů rhodaninu byly studovány od počátku 50. let 20. století. Teoretická část práce pojednává o mykózách a léčivech používaných v současnosti k jejich léčbě. Cílem experimentální práce bylo nalézt vhodné reakční podmínky pro Mannichovu reakci (5Z)-5-(subst.)benzyliden-2-thioxo-1,3-thiazolidin-4-onů s různými aminy Pokusy připravit Mannichovy báze za použití diethylaminu jako bazické složky byly neúspěšné. (5Z)-5-benzyliden-3-(morfolin-4-yl-methyl)-2-thioxo-1,3-thiazolidin-4-on byl získán reakcí (5Z)-5-benzyliden-2-thioxo-1,3-thiazolidin-4-onu s formaldehydem a morfolinem v dimethylformamidu. Tato sloučenina byla již dříve popsána v literatuře a vykazovala antibakteriální aktivitu a přijatelnou toxicitu. Mannichovy báze odvozené od (5Z)-5-arylalkyliden-2-thioxo-1,3-thiazolidin-4-onů si zaslouží další studium jako potenciální antimikrobiální léčiva.
|
|
Oligoestery větvené dipentaerythritolem jako adhezivní nosiče léčiv
Doležalová, Kateřina ; Šnejdrová, Eva (vedoucí práce) ; Dittrich, Milan (oponent)
Cílem této diplomové práce bylo studium disolučních a liberačních charakteristik oligoesterových nosičů kyseliny D, L mléčné a kyseliny glykolové. Teoretická část popisuje biomateriály a bioadhezivitu. Oligoesterové nosiče větvené dipentaerytritolem byly plastifikovány 20% triethylcitrátu. Adhezivní vlastnosti byly měřeny na materiálovém testovacím stroji Zwick/Roel T1-FR050TH.A1. Studována byla maximální síla nutná k odtržení vzorku od substrátu. Jako substrát byl zvolen roztok mucinu.Všechny studované oligoestery měly dostatečné adhezivní vlastnosti, přítomnost léčiva neměla významný vliv. Byl studován průběh liberace léčiv acikloviru a flukonazolu z plastifikovaných nosičů. Liberace probíhala za teploty 37řC, do fosfát-citrátového pufru. Obsah léčiva v liberačním mediu se hodnotil spektofotometricky. S klesající molární hmotností Mw rostla rychlost liberace obou léčiv. Výhodné vlastnosti prokázal oligoester 3D, který uvolňoval aciklovir 21 dní kinetikou 0. řádu
|
|
Umělecká výchova jako součást prevence drogové závislosti u dětí MŠ
Vohradská, Dana ; Jebavá, Jana (vedoucí práce) ; Bednář, Miloš (oponent)
Název práce: Umělecká výchova jako součást prevence drogové závislosti u dětí v mateřské škole Cíle práce: Cílem diplomové práce je zhodnotit míru důležitosti výchovy dětí předškolního věku prostřednictvím uměleckých aktivit. Touto formou lze předcházet drogové závislosti. Připravit a realizovat krátký projekt na téma - Pohádkou a hrou proti drogové závislosti. Výstupem je metodický list pro učitelky v mateřských školách. Metoda: Studium odborné literatury, literární rešerše, kompilace, analýza, konzultace v centru primární prevence Filia, vypracování projektu primární prevence, jeho realizace, zhodnocení a příprava metodického materiálu pro učitelky v mateřských školách. Výsledky: S prevencí drogové závislosti je nutné začít již u dětí v předškolním věku. Umělecké výchovy, jako jsou výtvarná, literární, dramatická, hudební a taneční, tvoří hlavní osu primární prevence. Hodnotícím měřítkem je pozornost, míra soustředěnosti, reakce dětí a jejich artefakty. Klíčová slova: Droga, předškolní věk a jeho specifika, hry a rituály v mateřské škole, soubor uměleckých výchov, primární prevence.
|
|
Studium vlastností tablet z přímo lisovatelného sorbitolu
Zemanová, Eva ; Mužíková, Jitka (vedoucí práce) ; Šnejdrová, Eva (oponent)
Diplomová práce 2009 - Eva Zemanová Studium vlastností tablet z přímo lisovatelného sorbitolu. SOUHRN : Práce se zabývá studiem vlastností výlisků ze dvou typů přímo lisovatelného sorbitolu, a to SorbitabuTM SD 250 a SorbitabuTM SD 500. Studovala se pevnost v tahu a doba rozpadu tablet v závislosti na lisovací síle, přídavku mazadel stearanu hořečnatého a stearylfumarátu sodného ( Pruvu ) ve dvou koncentracích 0,5% a 1% a 50% přídavku modelových účinných látek kyseliny acetylsalicylové a kyseliny askorbové. Použité lisovací síly byly 3, 4,5 a 6 kN, výlisky s léčivy byly lisovány jen silou 6 kN. Pevnost výlisků z čistého SorbitabuTM SD 500 byla vyšší než ze SorbitabuTM SD 250. SorbitabTM SD 500 prokázal citlivost na přídavek obou mazadel v obou koncentracích na rozdíl od SorbitabuTM SD 250, kdy poklesla pevnost tablet pouze s 1% přídavkem stearanu hořečnatého. Doba rozpadu výlisků z obou látek byla prodloužena vlivem mazadel, v případě SorbitabuTM SD 500 nejvýrazněji 1%přídavkem stearanu hořečnatého a to u všech lisovacích sil. Pevnost tablet s léčivy byla vyšší v případě kyseliny acetylsalicylové a u obou léčiv se SorbitabemTM SD 250. U tablet s kyselinou acetylsalicylovou snížil více pevnost stearan hořečnatý, u kyseliny askorbové nebyl statisticky významný rozdíl v rámci typu mazadla. Doba rozpadu tablet...
|
|
Liberace acikloviru z plastifikovaných větvených polyesterů
Černohousová, Lenka ; Šnejdrová, Eva (vedoucí práce) ; Dittrich, Milan (oponent)
Diplomová práce se zaměřuje na studium profilu liberace acikloviru z plastifikovaných větvených polyesterových nosičů. Byly zkoumány polyestery kyseliny D, L - mléčné a glykolové, větvené pentaerythritolem, dipentaerythritolem nebo tripentaerythritolem v různých koncentracích, plastifikované 30% trietylcitrátu. V teoretické části je shrnuta liberace léčiv z různých modifikovaných lékových systémů a vlastnosti přírodních a syntetických degradabilních polymerů. V experimentální části práce byl proveden statický disoluční test při 37řC do fosfát citrátového pufru pH 7,0. U nosičů větvených dipentaerythritolem s nízkou molární hmotností došlo k uvolnění acikloviru za 24 hodin. Proto se hodí pro krátkodobou liberaci. Pro prodloužené uvolňování se ukázaly optimální nosiče větvené pentaerythritolem nebo tripentaerythritolem, které mají vyšší molární hmotnost. Klíčová slova: uvolňování léčiva, aciklovir, větvené oligoestery, plastifikátory
|
|
Studium chirálních aspektů biotransformace léčiv instrumentálními analytickými metodami
Holmanová, Veronika ; Nobilis, Milan (vedoucí práce) ; Kovaříková, Petra (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutické chemie a kontroly léčiv Kandidát: Bc. Veronika Holmanová Školitel: Doc. PharmDr. Milan Nobilis, CSc. Název diplomové práce: Studium chirálních aspektů biotransformace léčiv instrumentálními analytickými metodami Byla vyvinuta nová chirální chromatografická metoda pro zhodnocení stereospecifity lidských a potkaních cytosolických karbonylreduktas a mikrosomálních oxidas zapojených do biotransformace nabumetonu. Vzniklá LLE-HPLC-PDA metoda umožňovala extrakci, separaci a UV detekci prochirálního nabumetonu a jeho metabolitů I.fáze biotransformace, včetně enantiomerů dvou chirálních produktů karbonylové redukce. Jako vnitřní standard sloužil methylester naproxenu. Pro liquid-liquid extrakci byl použit diethylether. Dostatečnou separaci 9 analytů zajišťovala za isokratických podmínek mobilní fáze o složení MeOH 1M NaClO4 pH 3 (75:25, v/v) ve spojení s Chiralcel OD-R 250mm×4.6 mm kolonou. Při průtoku 0,5 ml/min trvala jedna analýza 60 min. Efluent z kolony byl monitorován photodiode-array detektorem (zaznamenávající celé spektrum nebo vybrané vlnové délky - 225 a 265 nm). Výsledky biotransformace nabumetonu in vitro s cytosolickými a mikrosomálními frakcemi hepatocytů byly porovnány u dvou živočišných druhů (potkan,...
|
host ::
