|
| |
|
|
Interakce Borrelia sp. s buňkami HL-60 a monocyty a kultivace Anaplasma phagocytophilum na buňkách HL-60
Marková, Lucie ; Hulínská, Dagmar (vedoucí práce) ; Beranová, Jana (oponent)
Borrelia burgdorferi sensu lato a Anaplasma phagocytophilum jsou mikroorganismy způsobující onemocnění lymeskou borreliózu a lidskou granulomatózní anaplasmózu. Jejich společným vektorem v Evropě jsou klíšťata rodu Ixodes. V naší práci jsme se zaměřili na interakce buněk nespecifické imunitní odpovědi s původci lymeské borreliózy, které jsou svou funkcí v časné fázi onemocnění nezastupitelné. Anaplasma phagocytophilum je obtížně kultivovatelný mikroorganizmus, který je možno kultivovat pouze na buněčných kulturách. Úspěšná kultivace Anaplasma phagocytophilum z pacientů z naší geografické oblasti je klíčová pro další experimenty a také důležitá z diagnostického hlediska. V našich experimentech jsme používali ověřené tkáňové kultury buněk HL-60, psích monocytů DH82 a myších monocytů P388D1. Při studiu interakcí původců lymeské borreliózy s buňkami jsme používali dva kmeny odlišných druhů Borrelia. Borrelia garinii M192 a Borrelia burgdorferi sensu stricto B31. Tyto dva kmeny se liší virulencí. Kmen M192 je virulentní, kdežto kmen B31 již pasážováním svou virulenci ztratil. Zaměřili jsme se na studium morfologických změn pomocí světelné mikroskopie (pozorování barevných fixovaných preparátů a pozorování v temném poli), případně transmisní elektronové mikroskopie. Během našich experimentů jsme došli k závěru,...
|
|
|
Kmenové buňky zubní pulpy
Suchánek, Jakub ; Koberová Ivančaková, Romana (vedoucí práce) ; Kukletová, Martina (oponent) ; Hampl, Aleš (oponent)
Tématem této disertační práce je optimalizace vybavení zubní pulpy z cavum pulpae, izolace kmenových buněk zubní pulpy stálé dentice (KBZP) a standardizace kultivačních podmínek pro jejich dlouhodobou kultivaci. Postupy vyhodnocené jako optimální na liniích KBZP byly dále použity pro izolaci a kultivaci kmenových buněk zubní pulpy dočasné dentice (SHED). Dalším cílem bylo charakterizovat KBZP/SHED a ověřit schopnost těchto buněk diferencovat se v jiné buněčné linie (osteogenní, chondrogenní, adipogenní). Porovnávali jsme postupy extrakce zubní pulpy a metody izolace KBZP. Ke kultivačním experimentům byla použita tři média s rozdílným množstvím fetálního telecího séra (FCS) ve snaze optimalizovat nejnižší hladinu tohoto xenogenního suplementu v médiu při zachování běžné proliferační aktivity a cytogenetické stability KBZP. Standardizované postupy a vybrané kultivační médiu byly použity také při izolaci a kultivaci kmenových buněk zubní pulpy z dočasných zubů (SHED). KBZP a SHED jsme charakterizovali pomocí základních biologických vlastností (morfologie, viabilita, velikost buněk, proliferační aktivita). Byl studován vliv jednotlivých médií na biologické vlastnosti (viz výše), fenotyp a stabilitu karyotypu KBZP po dosažení Hayflickova limitu. Optimálním postupem extrakce zubní pulpy se ukázala být...
|
|
|
Clostridium difficile - Význam a současné možnosti laboratrní diagnostiky
Partlová, Simona ; Nyč, Otakar (vedoucí práce) ; Bártová, Markyta (oponent)
Práce se zabývá převážně problematikou diagnostiky kmenů Clostridium difficile. V úvodu je tato bakterie stručně charakterizována a v dalším textu jsou pak uvedené její obecné vlastnosti, příčiny a projevy onemocnění, které způsobuje a současné možnosti laboratorní diagnostiky v lékařské mikrobiologii. Praktická část se zabývá vyšetřením průkazu toxinů C.difficile ve stolici, které bylo v případě pozitivního výsledku doplněno kultivací. Kultivace a následné stanovení citlivosti na antibiotika není prováděna rutinně v každé laboratoři. Relativně novou metodou, dostupnou zatím jen na některých pracovištích, se stala PCR ribotypizace kmenů. Celkem bylo v laboratoři Ústavu lékařské mikrobiologie FN Motol vyšetřeno 195 pacientů s cílem prokázat přítomnost toxinů C.difficile ve stolici. Z tohoto počtu bylo 30 vzorků stanoveno jako pozitivní na přítomnost těchto toxinů. Vzorky s pozitivním nálezem byly následně kultivovány na speciálních půdách určených pro kultivaci C.difficile. Po získání čisté kultury kmene byla stanovena citlivost k metronidazolu. Powered by TCPDF (www.tcpdf.org)
|
|
|
Vliv enterální výživy na mikrobiotu dětí s Crohnovou nemocí
Halbrštátová, Eliška ; Bunešová, Věra (vedoucí práce) ; Salmonová, Hana (oponent)
Každým rokem je objeveno mnoho skutečností podporujících neoddiskutovatelný význam střevní mikrobioty na lidské zdraví. Jednou z oblastí je významná role mikrobioty u idiopatických střevních zánětů vznikajících v důsledku narušení její rovnováhy. Tato práce se zabývá jedním z idiopatických střevních zánětů, a to Crohnovou chorobou, jejíž výskyt se v ČR zvyšuje nejen u dětí, ale i dospělých. Jelikož na Crohnovu chorobu nebyl doposud nalezen účinný lék, je cílem léčby pouze potlačení zánětu, zkrácení akutní fáze onemocnění a dosažení dlouhodobě bezpříznakového období. Jednou z možností léčby je enterální výživa, jejíž vliv na mikrobiotu bude tato studie zkoumat. Výzkum je zaměřen na vliv výživy u dětských pacientů, jež se svými specifiky odlišuje od léčby dospělých.
Vzhledem k náročnosti studie bylo z 50 původně zařazených pacientů do studie selektováno 15 dětských pacientů Fakultní nemocnice v Motole, kteří byli podrobeni léčbě enterální výživou po dobu 6 týdnů, během níž byly odebírány vzorky stolice. Čerstvé vzorky stolice pacientů byly použity pro kultivaci a biochemický test.
Kultivovány a kvantifikovány byly skupiny gramnegativních bakterií, koliformních bakterií a Escherichia coli, celkový počet anaerobních bakterií a bakterie rodů Bifidobacterium, Lactobacillus a Enterococcus. Dále byly provedeny biochemické testy, které byly cíleny na detekci a identifikaci rodu Bifidobacterium ve stolici pacienta. K identifikaci byl použit komerční diagnostický systém API ZYM. Aby byla podpořena průkaznost studie, byly vzorky stolice pacientů uchovány pro izolaci bakteriální DNA a další výzkum.
Z literárního přehledu dané problematiky vyplývá, že při Crohnově chorobě dochází k redukci některých prospěšných bakteriálních skupin, a naopak zvýšení počtu některých bakteriálních skupin, což přemění jinak prospěšné a běžně osídlující skupiny střevní mikrobioty na patogenní. Léčba enterální výživou by tak měla podpořit zvýšení počtu redukovaných skupin a patogenní skupiny redukovat v jejich prospěch.
Shrneme-li výsledky studie, dojdeme k závěru, že bylo dosaženo očekávaného zvýšení bakterií rodů Enterococcus a Lactobacillus, potvrzující účinnost léčby enterální výživou. Nárůst bakterií rodu E. coli a skupiny koliformních bakterií spolu s poklesem rodu Bifidobacterium naopak účinnost léčby vyvrací.
|
|
|
Faktory ovlivňující kvalitu červeného vína
Zechmeisterová, Lucie ; Vránová, Dana (oponent) ; Omelková, Jiřina (vedoucí práce)
V rámci diplomové práce byly monitorovány přítomné mikroorganismy ve vzorku hroznové šťávy červeného vína a vzájemné vztahy mezi kvasinkami, bakteriemi a plísněmi. Na kultivaci mikroorganismů byly použity tři různé média, speciálně pro sledování celkového počtu mikroorganismů, pro kvasinky a pro mléčné bakterie. Na stanovení počtu životaschopných buněk byla použita nepřímá metoda. Jedná se o počítání viditelných makroskopických kolonií vyrostlých na agarových plotnách. Po nárůstu buněk byly vizuálně hodnoceny tvary kolonií a mikroskopicky byla zjištěna morfologie buněk mikroorganismů. Po aplikaci komerčního enzymatického preparátu byla monitorována doba jeho působení v hroznové šťávě při výrobě červeného vína. Aktivita komerčního preparátu enzymu v hroznové šťávě byla sledována na základě průběhu degradace vysokomolekulového substrátu enzymy pomocí Ubbelohdeho viskozimetru. Získané výsledky poskytly řadu poznatků ohledně výskytu mikroflóry v průběhu výroby červeného vína. Významnou úlohu hrály komerční preparáty přidané do hroznové šťávy.
|
|
|
Salmonelové infekce, jejich zdroj a diagnostika
Valkus, Martin ; Veselá, Mária (oponent) ; Vránová, Dana (vedoucí práce)
Tato bakalářská práce se zabývá salmonelovými infekcemi, jejich zdroji, prevencí a diagnostikou. Teoretická část zahrnuje základní seznámení s rodem Salmonella, jeho morfologií. Popisuje patogenezi, klinické projevy vzniklé infekce, léčbu a dietní doporučení. Rozebírá zdroje salmonelózy. Statisticky zpracovává počet případů infekcí na území ČR. Věnuje se prevenci vzniku infekcí na školách, informovanosti obyvatelstva a klimatickým vlivům. V experimentální části byla optimalizovaná metoda identifikace Enterobakterií úpravou pH připravovaného média MIU.
|
|
|
Nožnosti kultivace komerčních zón v okrajových částech sídel
Šabata, Ondřej
Zpracování tématu možností kultivace komerčních zón v okrajových částech sídel se skládá ze dvou základních částí. Teoretického průzkumu, pomocí kterého dochází k vymezení řešené problematiky, objasnění jejího vzniku, vývoje a souvislostí a praktického zpracování návrhu konkrétní modelové situace demonstrující poznatky vyplývající z teoretické části. Práce na základě literárního přehledu uvádí základní historické momenty při vzniku a vývoji okrajových částí sídel až po jejich masivní přerůstání do krajiny. V této souvislosti je zmíněn i vznik územního plánování a jeho souvislosti, které se pak promítají do problematiky plánování a typologie. Ta je popsána a demonstrována pomocí vybraných příkladů v poslední části literárního přehledu. Další část práce se zabývá výběrem lokality a aplikováním získaných poznatků na konkrétním území nákupního centra Černá Pole v městské části Brno-sever. Postup vypracování je popsán v metodice práce, na kterou navazuje analýza území, východiska a popis řešení. Text je doprovázen fotografiemi území, případně inspiračními zdroji při utváření navrhovaných řešení. V závěru práce je shrnuta celá problematika výstavby a kultivace komerčních zón a jejich začlenění do kontextu sídla a krajiny, včetně navrhnutí konkrétních řešení eliminujících soudobé problémy. V přílohové části práce jsou uvedeny výkresy, týkající se vlastního návrhu.
|
|
|
In vitro expanze a aktivace NK buněk pro účely buněčné terapie.
BENEŠOVÁ, Monika
NK buňky jsou součástí nespecifické imunitní odpovědi a jsou jednou z hlavních složek protinádorové imunity. Ke své aktivaci nepotřebují antigenní stimul, ale rozeznávají poškozené (transformované) buňky podle snížené exprese MHC I molekul. Tito přirození zabíječi se stávají náplní mnoha klinických studií zabývající se využitím protinádorové aktivity NK buněk jak u solidních nádorů, tak u hemato-onkologických onemocnění. Cílem této práce bylo najít optimální podmínky pro in vitro expanzi a aktivaci NK buněk. NK buňky byly izolovány pomocí magnetické separace z frakce mononukleárních buněk a kultivovány ve dvou typech médií SCGM a X-VIVO 10 s přidáním interleukinu 2 popř. OKT3 protilátky. Dále byl sledován vliv přítomnosti podpůrných mononukleárních buněk na proliferaci NK buněk. Po 6-ti denní kultivaci byly buňky pasážovány a byl stanoven nárůst NK buněk a průtokovou cytometrií sledovány aktivační markery CD25 a CD336 (NKp44). Všechny experimenty probíhaly v podmínkách správné výrobní praxe. Mírně větší výtěžek NK buněk byl pozorován u SCGM média bez výrazného rozdílu v ostatních aditivech. Mezi kulturami s/bez přidání podpůrných buněk byl pozorován značný rozdíl ve prospěch kultury s podpůrnými ozářenými mononukleárními buňkami. Nebyl zaznamenán rozdíl v kulturách s autologními nebo alogenními buňkami. Pomocí průtokové cytometrie jsme zjistili, že NK buňky,které mají vyšší proliferační potenciál, exprimují ve větší míře CD25, na rozdíl od buněk s nižší proliferací, které měly zvýšenou expresi znaku CD336. Práce vedla k definici optimálních kultivačních podmínek pro NK buňky a stala se základem pro další vývoj léčivého přípravku z in vitro aktivovaných NK buněk.
|
|
| |
host ::
RSS.