|
|
Analýzy struktury kolagenních vláken ve stěně tepny pomocí moderních metod světelné mikroskopie
Turčanová, Michaela ; Kochová, Petra (oponent) ; Hampl, Aleš (oponent) ; Burša, Jiří (vedoucí práce)
Disertační práce se zabývá analýzou uspořádání kolagenních vláken v tepnách a jejich správným vyhodnocením a použitím ve strukturně motivovaných konstitutivních modelech materiálu. První část práce je zaměřená na rešerši mechanických vlastností tepen a na přehled dostupných metod pro detekci vlnitosti, orientace a rozptylu vláken. Většina prací identifikuje úhly vláken jako další parametr z mechanických zkoušek a tím degraduje strukturní podstatu modelu. Druhá část práce popisuje automatický algoritmus, který dokáže vyhodnotit lokální směry vláken a jejich rozptyl ze snímků z polarizačního mikroskopu a strukturní hyperelastické konstitutivní modely. Dále je zde kladen důraz na vybrání nejvhodnější zobrazovací metody založené na fluorescenční mikroskopii, která nám pomůže rozlišit vlnitost a rozptyl vláken. V další části práce jsou prezentovány dva experimenty na prasečích tepnách za účelem zjištění vlivu různé velikosti biaxiální deformace na orientaci a rozptyl vláken. Poslední část práce uvádí vyhodnocené strukturní parametry pro prasečí a lidské aorty, které byly analyzovány nejen pod polarizovaným světlem, ale i pod laserovým skenovacím konfokálním mikroskopem, díky kterému byla získána vlnitost vláken a jejich globální směr.
|
|
|
Neuroprotective effects of novel anorexigenic analogs of prolactin-releasing peptide (PrRP) in models of neurodegeneration in vitro and in vivo
Mengr, Anna ; Maletínská, Lenka (vedoucí práce) ; Sumová, Alena (oponent) ; Hampl, Aleš (oponent)
Alzheimerova choroba (AD) je progresivní mozková porucha charakterizovaná extracelulárními beta amyloidními (Aβ) plaky, intracelulárními neurofibrilárními klubky tvořenými hyperfosforylovaným proteinem Tau a zánětem. Vzhledem k tomu, že obezita a diabetes mellitus 2. typu (T2DM) byly stanoveny jako rizikové faktory pro rozvoj neurologických poruch, anorexigenní a antidiabetické peptidy, jako je peptid uvolňující prolaktin (PrRP), se zdají být potenciálními neuroprotektivními látkami. V první části práce byly studovány molekulární mechanismy účinku přirozeného PrRP31 a jeho lipidovaného analogu palm11 -PrRP31 v buněčné linii lidského neuroblastomu SH-SY5Y. Oba peptidy významně aktivovaly signální dráhy typické pro insulin podporující přežití a růst buněk. Kromě toho PrRP31 a palm11 -PrRP31 zvýšily životaschopnost buněk a potlačily apoptózu v buňkách SH-SY5Y stresovaných methylglyoxalem. Druhá část práce byla zaměřena na neuroprotektivní a protizánětlivé účinky v mozku APP/PS1 myší, modelu Aβ patologie, po subkutánním podávání palm11 -PrRP31 po dobu 2 měsíců. Palm11 -PrRP31 signifikantně snížil množství Aβ plaků a mikrogliózu v hipokampech, kortexech a mozečku. Kromě toho palm11 -PrRP31 zvýšil synaptogenezi a zmírnil centrální zánět a apoptózu v hipokampu myší APP/PS1. Ve třetí části práce byl...
|
|
|
Vliv modifikace extracelulární matrix na změnu struktury a regeneraci nervové tkáně
Vallová, Jana ; Machová Urdzíková, Lucia (vedoucí práce) ; Hampl, Aleš (oponent) ; Hubálek Kalbáčová, Marie (oponent)
Vliv modifikace extracelulární matrix na změnu struktury a regeneraci nervové tkáně Abstrakt Extralelulární matrix (ECM) je nebuněčná 3D struktura, která se nachází ve všech typech tkání a podílí se nejen na tvorbě struktury a fyzikální podpory tkání, ale aktivně vstupuje do biologických dějů a homeostázy. Modifikace ECM může přispět k změnám plasticity nervové tkáně. Proto je v naší studii použit 4-Methylumbelliferone (4-MU) který narušil strukturu perineuronálních sítí, obklopující některé typy neuronů, které jsou zodpovědné za tvorbu paměťových stop. Myši byly po dobu 6 měsíců krmena krmivem s příměsí 4-MU (6,7mg/g/den), což zlepšilo jejich paměťové schopnosti, testované v testu spontánní rekognice, bez výraznějšího negativního vlivu na ledviny, játra či klouby. V další časti naší studie byl vytvořen biomimetický hydrogel pomocí decelularizace extracelulární matrix derivované z fetální lidské pupečníkové tkáně. Vzhledem k nízké stabilitě vytvořené UC-ECM a její rychlé degradaci byla struktura stabilizována kovalentní genipinovou vazbou (ECM/G). Stabilizace při použití 1mM genipinu zvýšila biologickou stabilitu materiálu. UC-ECM tak jako ECM/G neprokazoval toxicitu v testech in vitro, kdy nebyla negativně ovlivněna proliferace mezenchymálních kmenových buněk, axonální pučení nebo růst a diferenciace...
|
|
| |
|
|
Manipulating the mammalian oocyte and embryo - Biological and epigenetic aspects
Fulková, Helena ; Hozák, Pavel (vedoucí práce) ; Hampl, Aleš (oponent) ; Motlík, Jan (oponent)
CONCLUSIONS . By antibodies against ďfferent covalent histone modifications and 5-methylcytosine, we have partialty characterised the epigenetic changes taking place during the oocyte mauration and in early mammalian embryogenesis in the mouse and pig, respectively. o We have also characterised thc epigenetic repogramming activities of cytoplasts derived from oocytes at different stages of maturation after somatic cell nuclear transfer. . We have evaluated the epigenetic effec$ of selected procedures that are currently used for embryo production. . Finally, we have developed a new cryopreservation scheme for oocyte nuclear material storage. orrr research is engaged in the development ofnew bíotechniques as well as elucidating and characterising the epigenetic pÍocesses that take place during normal and abnormal embryogenesis. Abnormal embryonic development is for example often observed in somatic cell nuclear transfer embryos. These techniques can also be potentially used not only in human medicine but also for valuable livestock and endangered species preservation Oy e.g. interspecies nuclear transfer). Especially in human meďcine, attention to the ethical issues associated with these techniques must be paid. It is also clear tbat many biological problems still do exist and these should not be...
|
|
|
Differentiation of Human Embryonic Stem Cells into Endothelial and Smooth Muscle Cells as a Model for Vascular Development
Obrtlíková, Petra ; Trněný, Marek (vedoucí práce) ; Mokrý, Jaroslav (oponent) ; Hampl, Aleš (oponent)
Aims of the study: We hypothesized that the optimal source of cell for vascular regeneration will be the progenitor cells derived from human embryonic stem cells (ESCs) which can differentiate both into endothelial cells (ECs) as well as vascular smooth muscle cells (SMCs). We propose to test if the population of human ESCs, H9 cell line, can serve this role. Material and methods: Human ESCs were cocultured with stromal cells S17, M2-10B4 or Wnt1 expressing M2-10B4 cell line to generate a CD34+ cell population. After that, CD34+ cells were sorted and cultured in media containing specific cytokines to generate ECs. To induce SMC differentiation from ECs, culture conditions were changed to media containing platelet-derived growth factor-BB (PDGF-BB) and transforming growth factor-beta 1 (TGF-b1). Phenotypic and functional characteristics of these populations were demonstrated by flow cytometry, immunohistochemistry, QRT- PCR, tube formation assay, and response to calcium signaling agonists. Results: CD34+ vascular progenitor cells derived from human ESCs give rise to ECs and SMCs. These two populations express cell specific transcripts and proteins, exhibit intracellular calcium in response to various agonists, and form robust tube-like structures when cocultured in Matrigel. Wnt1 overexpressing stromal cells...
|
|
|
Cytokine expression in chemically-induced senescence
Nováková, Zora ; Hodný, Zdeněk (vedoucí práce) ; Hampl, Aleš (oponent) ; Dvořák, Michal (oponent)
Souhrn Buněčná senescence, kerá dokáže potlačit nádorové bujení, představuje odpověď buněk na stres a poškození DNA a způsobuje zástavu proliferace. Na tomto ději se zřejmě podílejí i produkované cytokiny. V současné době se mnoho vědeckých skupin snaží stanovit povahu a funkci sekrečního fenotypu spojeného se senescencí. Bylo zjištěno, že prozánětlivé látky sekretované senescentními buňkami ovlivňují okolní buňky i své vlastní producenty. Tyto poznatky byly získány především na modelech replikativní a onkogenem indukované senescence. Úkol této práce spočíval v definování cytokinové produkce senescentními buňkami indukovanými genotoxickými látkami bromodeoxyuridinem a distamycinem A. V tomto modelu jsme zjistili trvale aktivovanou interferonovou signalizaci spojenou se zvýšením interferonových cílových genů zahrnujících PML, STAT1 a IRF1. Při testování více než 160 cytokinů a jejich receptorů jsme nalezli zvýšenou hladinu u více než dvaceti cytokinů zahrnující prozánětlivé faktory IL-1, IL-6 and IL-8. Domníváme se, že cytokinová signalizace spojená se senescencí vyvolavou chemikáliemi představuje složitý a robustní děj, který je udržován pozitivními zpětnými vazbami. Charles University in Prague Faculty of Sciences PML (promyelocytární leukemický protein) a PML tělíska hrají roli v potlačování...
|
|
|
Nové markery vývoje kolorektálního karcinomu u ulcerózní kolitidy
Švec, Jiří ; Kment, Milan (vedoucí práce) ; Keil, Radan (oponent) ; Hampl, Aleš (oponent)
SOUHRN Úvod: Dlouhotrvající ulcerozní kolitida (UC) je spojena se zvýšeným rizikem vývoje kolorektálního karcinomu (CRC) a zvýsená exprese cyklooxygenázy 2 (COX-2), inducibilní NO syntázy (iNOS), survivinu, telomerázové katalytické podjednotky (TERT), integrinové kinázy (ILK) a transkripčních faktorů c-MYB a TCF-4 byla prokázána během sporadické kolorektální tumorigeneze. Nicméně změny v expresi těchto proliferačních a antiapoptotických genů během neoplastické transformace u ulcerozní kolitidy nejsou dostatečně popsány. Metody: Analyzovali jsem genovou expresi těchto markerů během přechodu epitelu tlustého střeva od chronickým zánětem iritované mukozy k epiteliální neoplasii v biopsiích pacientů s UC pomocí kvantitativní RT-PCR a imunohistochemie a porovnali jsme změny genové exprese studovaných markerů také ve vzorcích získaných od pacientů operovaných pro sporadický kolorektální karcinom a v xenograftových vzorcích odvozených od nádorové linie SW620. Dále jsme studovali expresi mRNA těchto genů také s využitím laserové mikrodisekce u myšího modelu s kolitidou asociované (kmen ICR) i sporadické kolorektální karcinogeneze (kmen A/J). Výsledky: Hladiny mRNA pro survivin, c-MYB, COX-2, iNOS a TCF-4 byly signifikantně zvýšeny během neoplastické transformace epitelu u pacientů s ulcerozní kolitidou, naopak TERT...
|
|
|
Messenger RNA stability and microRNA activity in mouse oocytes
Flemr, Matyáš ; Svoboda, Petr (vedoucí práce) ; Motlík, Jan (oponent) ; Hampl, Aleš (oponent)
SOUHRN Přerod oocytu v zygotu představuje jediný fyziologický děj během životního cyklu savců, při kterém se z diferenciované buňky stává buňka pluripotentní. Toto buněčné přeprogramování je z velké většiny závislé na bezchybné post-transkripční regulaci maternálních mRNA. Porozumění mechanismům post-transkripční regulace v oocytech proto povede k významnému rozšíření našeho poznání v otázce buněčného přeprogramování. Mezi důležité post-transkripční regulátory v širokém spektru buněčných a vývojových procesů patří nedávno objevené krátké nekódující mikroRNA. Jejich funkce spočívá v represi cílených mRNA za pomoci proteinových komplexů, které spouštějí deadenylaci a odstranění ochranné čepičky z 5'-konce. Zmíněné komplexy se za normálních okolností sdružují v tzv. procesních tělískách (P-tělíska) v cytoplasmě. Tato práce přináší nečekané zjištění, že mikroRNA dráha je umlčená v plně dorostlých myších oocytech i během přerodu oocytu do zygoty. Toto zjištění je v souladu s pozorovaným rozpadem P-tělísek závislých na funkci mikroRNA během růstu oocytu a jejich absenci v plně dorostlých oocytech. Některé proteiny běžně obsažené v P-tělískách lokalizují v plně dorostlých oocytech do kortikální oblasti. Spolu s dalšími RNA-vazebnými faktory vytvářejí tyto proteiny ve finální fázi oocytárního růstu sub- kortikální...
|
|
|
Development of extracellular-matrix scaffolds for CNS repair
Výborný, Karel ; Kubinová, Šárka (vedoucí práce) ; Hampl, Aleš (oponent) ; Vandrovcová, Marta (oponent)
Výborný, Karel. Vývoj materiálů na bázi extracelulární matrix pro léčbu centrálního nervového systému. [Development of extracellular-matrix scaffolds for CNS repair]. Praha, 2020. 105 stran, 3 přílohy. Dizertační práce (Ph.D.). Univerzita Karlova, 2. lékařská fakulta, Ústav experimentální medicíny, AV ČR v.v.i. Abstrakt Poranění mozku a míchy jsou vážná onemocnění a navzdory intenzivnímu výzkumu stále neexistuje účinná léčba. Jednou ze studovaných možností reparace poškozené tkáně je použití biomateriálů. Cílem této dizertační práce byla příprava, charakterizace a studium výzkum léčebného a neurotrofního efektu hydrogelů na bázi extracelulární matrix (ECM) připravených decelularizací tkání různého původu (prasečí mozek, mícha, močový měchýř, lidský pupečník) na rekonstrukci poškozené nervové tkáně mozku a míchy u laboratorního potkana. ECM hydrogely byly charakterizovány z hlediska mechanických a reologických vlastností, struktury a složení, buněčné adheze, migrace a proliferace. Na modelu míšní hemisekce jsme srovnávali regenerační efekt ECM hydrogelů připravených z prasečího močového měchýře a prasečí míchy. V této studii jsme neprokázali žádné tkáňově specifické výhody ECM hydrogelu neurálního původu z hlediska neurotrofních vlastností in vitro a in vivo. Přestože je degradace ECM hydrogelu žádoucí z...
|
host ::
RSS.