|
|
Studium procesu elektrofotokatalytické dezinfekce vody
Cisáriková, Barbora ; Zita, Jiří (oponent) ; Veselá, Mária (vedoucí práce)
Táto bakalárska práca bola zameraná na fotokatalytickú dezinfekciu vody pomocou oxidu titaničitého aplikovaného na pracovnú elektródu. Experiment prebiehal za normálnych podmienok, s aplikáciou UV-žiarenia s intenzitou 40 W/m2 a s UV-žiarením a elektrickým napätím 1 V súčasne. Každá časť experimentu prebiehala po dobu 60 a 120 minút. Mikrobiocídny účinok bol sledovaný na baktérii Escherichia coli.
|
|
|
Kvalita pitných vod v Moravskoslezském kraji
Diblíková, Michaela ; Navrátilová, Jana (oponent) ; Omelková, Jiřina (vedoucí práce)
Cílem této práce bylo zjištění kvality vod vyrobených a spotřebovávaných v Moravskoslezském kraji metodami používanými v laboratoři Morava a. s. Na základě statistického zpracování výsledků analýz za období let 2005 až 2006 bylo stanoveno, že nejvyšší míra znečištění je mikrobiálního původu a to především bakteriemi čeledi Enterobacteriaceae (koliformní bakterie a E. coli). Chemické znečištění bylo způsobeno převážně amonnými ionty a dusičnany, což může být jednak důsledek kontaminace podzemních a povrchových toků průmyslovými hnojivy, jednak prosakováním odpadů ze septiků.
|
|
|
Charakterizace specifických proteinů z vybraných živočišných produktů.
Janhuba, Filip ; Obruča, Stanislav (oponent) ; Márová, Ivana (vedoucí práce)
Diplomová práce byla zaměřena na specifické obranné proteiny z živočišných produktů, zejména na charakterizaci antimikrobiálního proteinu ovotransferinu (též „conalbuminu“) pocházejícího z vaječného bílku, který patří do skupiny transferinů a je do jisté míry analogem laktoferinu v mléce. Ovotransferin má velmi široké spektrum účinků, především antivirové, protirakovinové a imunomodulační. Jeho antimikrobiální aktivita vycházející z možnosti vázat železo je stále předmětem velkého zájmu. Pro srovnání charakteristik ovotransferinu byl použit další obranný vaječný protein, a to lysozym (N-acetylmuramidglykanhydrolasa). V teoretické části diplomové práce byl vypracován přehled o specifických antimikrobiálních proteinech ve vybraných živočišných produktech, kdy byl důraz kladen především na ovotransferin a lysozym. Experimentální část je zaměřena na optimalizaci metod stanovení antimikrobiální aktivity, koncentrace a čistoty těchto proteinů. Pro kvantitativní stanovení celkových proteinů byla využita optimalizovaná Hartree – Lowryho metoda a pro zjištění molekulové hmotnosti a čistoty byla provedena SDS-PAGE s vizualizací pomocí Coomassie Brilliant Blue G250 nebo pomocí barvení stříbrem. V rámci charakterizace byl reálný vzorek vaječného bílku souběžně srovnáván se vzorky antimikrobiálních tablet a s lyofilizovanými vzorky antimikrobiálních proteinů dodanými průmyslovým partnerem a bylo určeno jejich přesné proteinové složení a čistota. Studium antimikrobiální aktivity ovotransferinu bylo prováděno na kulturách bakterie Bacillus subtilis a pro srovnání i na gramnegativní bakterii E. coli. Ovotransferin vykázal antimikrobiální účinek i přes vysoký přídavek (100 mM) hydrogenuhličitanových iontů až při velmi vysokých koncentracích okolo 75 mg/ml (Bacillus subtilis) a 50 mg/ml (E. coli). Inhibiční efekt byl nejvíce patrný v tekutých médiích. U enzymu lysozymu bylo zjištěno, že vykazuje v případě kultury grampozitivních bakterií významnou inhibiční aktivitu již od 0,3 mg/ml. Naopak inhibiční účinek na E. coli pozorován nebyl. V další části byl ovotransferin izolován z vaječného bílku gelovou filtrací na koloně s náplní Sephadex G100. Jako mobilní fáze byly testovány 0,1 M fosfátový a 0,05 M Tris-HCl pufr. Čistota ovotransferinu byla srovnána s komerčním standardem pomocí SDS-PAGE. Na závěr byla testována možnost enkapsulace ovotransferinu a lysozymu do liposomových a chitosanových částic. Vlastnosti připravených částic byly studovány pomocí DLS a měření zeta potenciálu. Studována byla také stabilita částic v modelových fyziologických podmínkách.
|
|
|
Production of human milk oligosaccharides in the cell factory of E. coli
Havrdová, Jana ; Bojarová, Pavla (vedoucí práce) ; Smrček, Stanislav (oponent)
Oligosacharidy lidského mléka patří mezi nejhojnější složky mateřského mléka a jsou nezbytné pro zdravý vývoj novorozence. Izolovat tyto oligosacharidy z živočišného mléka, zejména ty méně hojné, je velmi náročné, a proto je třeba hledat nové způsoby získání těchto látek. Chemické a enzymové syntézy těchto sloučenin jsou pracné a nákladné a poskytují nízké výtěžky. Inovativním přístupem k syntéze HMO jsou bakteriální buněčné továrny, v nichž geneticky upravené bakteriální kmeny mohou využívat levné sacharidy jako substráty a přeměňovat je na specifické oligosacharidy. Cílem této práce je prozkoumat možnosti využití vybraných bakteriálních kmenů (E. coli) pro produkci oligosacharidů lidského mléka. U laktosy jako sacharidového substrátu musí být bakteriální hostitel deficientní na β-galaktosidasu, jinak by byl substrát degradován. Pro zýšení příjmu laktózy v buňce lze do hostitelského organ- ismu vnést gen crp, který kóduje pozitivní transkripční regulátor (Catabolite Acti- vator Protein - CAP). Klonovaný plazmid - pRSFDuet-1-crp byl transformován do vybraného bakteriálního kmene. Laktóza z buněk byla purifikována gelovou chro- matografií a vliv zvýšené exprese CAP na příjem laktózy do buněk byl analyzován pomocí různých analytických metod, jako je TLC, HPLC a komerční laktózový test. Klíčová slova:...
|
|
|
Produkce a charakterizace nových aryl-sulfotransferas a jejich využití v bioanalytice
Petránková, Barbora ; Bojarová, Pavla (vedoucí práce) ; Křížek, Tomáš (oponent)
Polyfenolové látky jsou nejrozšířenější přírodní látky nacházející se v potravě. Největší skupinu tvoří flavonoidy, fenolové kyseliny a katecholy. Polyfenoly jsou v organismu metabolizovány v rámci II. fáze biotransformace, můžou být sulfatovány, glukuronylovány nebo methylovány. Pro studium biotransformace je potřeba mít definované standardy. Sulfatované polyfenoly můžeme připravit pomocí enzymové sulfatace, která má mnohem mírnější reakční podmínky oproti chemické. Prokaryotické sulfotransferasy využívají k sulfataci jako donor sulfátu 3'-fosfoadenosin-5'-fosfosulfát (PAPS), který je však velmi drahý a obtížně se regeneruje. Alternativou jsou bakteriální aryl-sulfotransferasy (EC 2.8.2.22), které katalyzují přenos sulfátové skupiny z fenolového donoru na fenolový akceptor. V literatuře byly doposud popsány dvě bakteriální aryl-sulfotransferasy z Desulfitobacterium hafniense a Escherichia coli. Předkládaná práce se zabývá produkcí, purifikací a biochemickou charakterizací dvou nových bakteriálních aryl-sulfotransferas z Desulfosporosinus sp. HMP52 a Salmonela bongori. Enzymy byly heterologně exprimovány v E. coli a purifikovány pomocí afinitní chromatografie. V rámci biochemické charakterizace bylo stanoveno jejich pH a teplotní optimum, stabilita v organických rozpouštědlech a různých teplotách a...
|
|
| |
|
|
Produkce a charakterizace mutované formy galektinu-3
Dubanych, Yurii ; Vaněk, Ondřej (vedoucí práce) ; Ječmen, Tomáš (oponent)
Přirozeně zabijácké buňky (NK buňky, z angl. natural killer) jsou velké granulární lymfocyty vrozené imunity, které jsou charakterizovány schopností zabíjet rakovinné a virem poškozené buňky bez předchozí aktivace. Cytotoxické funkce NK buněk jsou regulovány jednak prostřednictvím povrchových receptorů rozpoznávajících molekuly MHC-I, jednak přítomností sady aktivačních a inhibičních receptorů, které jsou mezi sebou za normálních podmínek v rovnováze. Osud cílové buňky proto záleží nejen na expresi MHC-I, ale i na expresi ligandů aktivujících receptory NK buněk. Jedním z aktivačních receptorů NK buněk je NKp30. Pro NKp30 byly objeveny tři specifické buněčné ligandy: lidský athanogen 6 asociovaný s BCL-2 (BAG-6, také známý jako BAT3), nádorový antigen B7-H6 a nově objevený ligand galektin-3. Všechny tyto ligandy jsou často exprimovány rakovinnými buňkami, přičemž BAG-6 a Gal-3 působí na funkce NK buněk inhibičně, což může být mechanismem úniku nádoru před imunitním systémem. Proto je Gal-3 novým potenciálním cílem léků, které inhibicí Gal-3 mohou napomáhat imunitnímu systému bránit se proti maligně transformovaným buňkám. Tato bakalářská práce zahrnuje ověření vlivu mutace Cys173 - Ser173 v sacharid vazebné doméně galektinu-3 na vazbu receptoru NKp30 pomocí gelové permeační chromatografie. Dále se...
|
|
|
Možnosti přežívání a množení patogenních a nepatogenních mikroorganismů v cukrářských výrobcích
Šrubařová, Monika
V této práci byly analyzovány dva druhy cukrářských výrobků: oříškové a citrónové kuličky. U vzorků byl proveden rozbor a stanovení celkového počtu mikroorganismů, počtu kvasinek a plísní, S. aureus, koliformních bakterií a E. coli, dále průkaz Salmonella spp. a Listeria monocytogenes. Dále byla do vybraných vzorků zaočkována suspenze bakterie S. aureus (kmen CCM 5974) s následným stanovením počtu S. aureus a průkazu tvorby enterotoxinu metodou RPLA. Z výsledků vyplývá, že při stanovení CPM v závislosti na době skladování docházelo u obou druhů vzorků k poklesu počtu kolonií (p<0,05). Rozdíl mezi ořechovou a citrónovou variantou vzorku v CPM nebyl prokázán (p>0,05). Při prvním i druhém rozboru byl zaznamenán výskyt kolonií kvasinek a plísní u oříškových vzorků. U vzorků citrónových byl výskyt kolonií kvasinek a plísní zaznamenán pouze u jednoho vzorku v prvním rozboru. Klesající počet (p<0,05) byl zaznamenán i při stanovení počtu S. aureus, mezi dvěma druhy vzorků nebyl prokázán rozdíl v počtech S. aureus (p>0,05). Bakterie rodu E. coli nebyla detekována v žádném vyšetřovaném vzorku. Koliformní bakterie byly zaznamenány pouze při prvním a druhém rozboru u oříškových vzorků, u vzorků citrónových pouze v rozboru prvním. Při průkazu salmonely, byly zaznamenány 4 kolonie u dvou oříškových vzorků v prvním rozboru. Kolonie Listeria monocytogenes nebyly detekovány v žádném ze vzorků. Mikrobiologický rozbor zaočkovaných vzorků, potvrdil, že naše cukrářské výrobky nepodporují růst patogenních mikroorganismů S. aureus a také, že neexistuje statisticky významný rozdíl v počtech kolonií S. aureus mezi ořechovou a citrónovou variantou vzorku (p>0,05). Bylo prokázáno, že při zaočkování S. aureus (CCM 5974) při koncentraci 1,2.105 buněk na gram, je bakterie schopná tvořit ve výrobku enterotoxiny, které následně na rozdíl od S. aureus v cukrářských výrobcích zůstávají.
|
|
|
Studium procesu elektrofotokatalytické dezinfekce vody
Cisáriková, Barbora ; Zita, Jiří (oponent) ; Veselá, Mária (vedoucí práce)
Táto bakalárska práca bola zameraná na fotokatalytickú dezinfekciu vody pomocou oxidu titaničitého aplikovaného na pracovnú elektródu. Experiment prebiehal za normálnych podmienok, s aplikáciou UV-žiarenia s intenzitou 40 W/m2 a s UV-žiarením a elektrickým napätím 1 V súčasne. Každá časť experimentu prebiehala po dobu 60 a 120 minút. Mikrobiocídny účinok bol sledovaný na baktérii Escherichia coli.
|
|
|
Heterologní exprese a purifikace lidské NADPH: cytochrom P450 oxidoreduktasy
Kostelanská, Marie ; Černá, Věra (vedoucí práce) ; Kavan, Daniel (oponent)
NADPH: cytochrom P450 oxidoreduktasa (POR) je nezbytnou složkou řady metabolických procesů, kde vystupuje jako přenašeč redukčních ekvivalentů mezi NADPH a redoxním partnerem. K takovým procesům patří i katalytické reakce cytochromů P450, které se markantně podílejí na metabolismu steroidních hormonů, léčiv a xenobiotik. Obzvláště pak mikrosomální cytochromy P450 jsou striktně závislé na elektronové podpoře ze strany POR a společně vytvářejí systém oxygenas se smíšenou funkcí. Mutace v proteinové struktuře POR mohou doléhat na aktivitu jeho redoxních partnerů a některé polymorfismy POR mohou vést až k vážným poruchám, většinou spojených s defektním metabolismem steroidů. V této práci byla připravena POR nesoucí dvojí mutaci A503V a P228L. Doposud však nebylo prokázáno, že by byl tento polymorfismus asociován s jakýmkoli neobvyklým vývojovým fenotypem či poruchou, které by měly devastující účinky na lidský organismus. Nicméně při některých metabolických studiích se hodnoty aktivity A503V odlišují od hodnot stanovených pro wild-type formu POR. V rámci této diplomové práce byly připraveny konstrukty rekombinantní plasmidové DNA nesoucí gen pro lidskou POR nebo gen pro lidskou POR s histidinovou kotvou. Oba konstrukty byly založeny na expresním vektoru pCW. Rekombinantní POR bez histidinové kotvy byla...
|
host ::
RSS.