|
Vliv parazitózy na biotransformační enzymy hostitele
Bártíková, Hana ; Szotáková, Barbora (vedoucí práce) ; Lamka, Jiří (oponent)
(CZ) Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Titul, jméno, příjmení kandidáta: Hana Bártíková Titul, jméno příjmení školitele: Doc. Ing. Barbora Szotáková, Ph.D. Název diplomové práce: Vliv parazitózy na biotransformační enzymy hostitele Parazitární choroby způsobují značné ekonomické ztráty u hospodářských, domácích i volně žijících zvířat. Relativně velmi vysokou patogenitu vykazuje celosvětově rozšířený druh Haemonchus contortus, jenž parazituje v trávicím traktu přežvýkavců. K terapii hemonchózy jsou používána benzimidazolová anthelmintika. Změněná aktivita enzymů biotransformujících tato léčiva může mít významný dopad na léčbu. Dalším problémem je rezistence červů na dostupná anthelmintika, k níž může mimo jiné přispívat indukce enzymů hostitele. V této práci byl zkoumán vliv hemonchózy na aktivitu biotransformačních enzymů ovce domácí. Sledovány byly oxidační, konjugační a redukční enzymy u zdravých i nemocných ovcí. Stanovení aktivit probíhalo v cytosolické a mikrosomální frakci jater a tenkého střeva. U většiny sledovaných oxidačních enzymů byla pozorována inhibice enzymové aktivity, u konjugačních enzymů naopak došlo vlivem parazitózy k indukci. Pro skupinu redukčních enzymů nelze vyslovit jednoznačný závěr. Porovnání výsledků mezi...
|
|
Investigation of sugar modified pyrimidine nucleosides as potential inhibitors of Thymidine (TP) and Uridine (UP) phosphorylasis
Růžičková, Markéta ; Wsól, Vladimír (vedoucí práce) ; Boušová, Iva (oponent)
1 Abstrakt diplomové práce RŮŽIČKOVÁ M.; STUDIUM PYRIMIDINOVÝCH NUKLEOSIDŮ MODIFIKOVANÝCH NA CUKERNÉ ČÁSTI JAKO POTENCIÁLNÍCH INHIBITORŮ TYMIDIN (TP) A URIDIN (UP) FOSFORYLÁZY Klíčová slova: uridinfosforyláza, tymidinfosforyláza, nukleosid, inhibitor, protinádorová chemoterapie, substrátová specifita Práce se zabývá studiem nových potenciálních inhibitorů rekombinantní tymidinfosforylázy a uridinfosforylázy z bakterií E. coli a Salmonella typhimurium. Hlavním předmětem studia je určení kinetických parametrů přirozených substrátů (tymidinu a uridinu) pro rekombinantní TP a UP, určení role fosfátového aniontu v enzymatické reakci a a hledání nových inhibitorů TP a UP. Studium substrátové specifity a aktivity TP a UP za různých reakčních podmínek je důležité pro získání lepšího pohledu na jejich funkce a pro vytvoření nových struktur potenciálních inhibitorů. Stanovení Michaelisovy konstanty KM a limitní rychlosti Vmax bylo provedeno s využitím spektrofotometru Varian Cary-300 Bio. Pro grafické znázornění kinetických dat jsme využili Lineweaver-Burkův diagram. Dalším bodem mé práce bylo stanovení aktivity enzymů a jejich substrátové specifity pro některé pyrimidinové analogy pomocí HPLC analýzy reakčních směsí. Testované sloučeniny, 2'-O-metyluridin, 1-(ß-D-fruktofuranosyl)uracil, 2'- deoxy-2'-fluorouridin,...
|
|
Vliv vybraných cytostatit na aktivitu cytosolických reduktas karbonylové skupiny v MCF-7 linii
Vildová, Lenka ; Szotáková, Barbora (vedoucí práce) ; Skálová, Lenka (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Titul, jméno, příjmení kandidáta: Lenka Vildová Titul, jméno, příjmení školitele: Doc. Ing. Barbora Szotáková, Ph.D. Titul, jméno, příjmení školitele specialisty: Mgr. Martina Gavelová, Ph.D. Název diplomové práce: Vliv vybraných cytostatik na aktivitu cytosolických reduktas karbonylové skupiny v MCF-7 linii Nádorová rezistence představuje hlavní problém chemoterapeutické léčby rakoviny. Jednou z možných příčin vzniku rezistence může být zvýšení enzymatické inaktivace cytostatik. V této studii jsme se zabývali vlivem antracyklinového antibiotika doxorubicinu a potenciálního cytostatika oracinu na aktivitu a expresi reduktas karbonylu v cytosolu buněk MCF-7 linie izolované z lidského adenokarcinomu prsu. Tato cytostatika jsou biotransformována cestou redukce karbonylové skupiny na méně účinné metabolity. Zjistili jsme, že po krátké (48hod) expozici nízkým (nM) koncentracím vybraných cytostatik dochází ke statisticky výraznému nárůstu aktivity reduktas v cytosolu buněk. Dále jsme se pokusili s využitím specifických inhibitorů definovat účast aldo-ketoreduktasy 1C3 (AKR1C3) a karbonylreduktasy 1 (CBR1) na redukci výše uvedených cytostatik. Zvolené enzymy se přirozeně exprimují v prsní tkáni. Z naměřených výsledků...
|
|
Viskozita a povrchová aktivita roztoků polyesterových nosičů
Šanderová, Martina ; Dittrich, Milan (vedoucí práce) ; Šklubalová, Zdeňka (oponent)
Viskozita a povrchová aktivita roztoků polyesterových nosičů Student: Martina Šanderová Vedoucí diplomové práce: Doc. RNDr. Milan Dittrich, CSc. Katedra farmaceutické technologie, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové, Univerzita Karlova v Praze, Česká republika Diplomová práce je zaměřena na studium viskozity a povrchové aktivity roztoků polyesterových nosičů léčiv. V teoretické části je pojednáno obecně o viskozitě, povrchovém a mezipovrchovém napětí, biodegradabilních polymerech a polyesterech alifatických hydroxykyselin. V experimentální části byla měřena a hodnocena kinematická viskozita a mezipovrchové napětí různě koncentrovaných roztoků lineárních kopolymerů kyselin glykolové a D,L-mléčné nebo větvených terpolymerů kyselin glykolové a D,L-mléčné. Větvícími sloučeninami byly mannitol a tři pentaerytritoly s násobným počtem jednotek. Rozpouštědlem byl chloroform. Pro měření mezipovrchového napětí byla použita metoda měření platinovou destičkou podle Wilhelmy. Výsledky budou mít využití při optimalizaci formulace biodegradabilních přípravků monolitického nebo částicového typu.
|
|
Vliv vybraných fyzikálně-chemických faktorů na mechanismus přepěňování piva
Poštulková, Michaela ; Novák, Pavel ; Vitoušová, K. ; Brányik, T. ; Růžička, Marek
Z výsledků, uvedených v tomto příspěvku vyplývá, že s rostoucím pH roztoku BSA o koncentraci 0,5 g/l roste intenzita jeho přepěňování. Rovněž bylo zjištěno, že zvýšení tlaku nad gushingovou matricí vedlo k úplnému potlačení přepěňování. Zařízení pro pozorování přepěňování se z praktického hlediska jeví jako vhodný nástroj pro predikci, stanovení a kvantifikaci přepěňovací aktivity a bude v budoucnu využíván pro další studium tohoto jevu.
Plný tet: SKMBT_C22013110513040 -  PDF
Plný text: content.csg - PDF
|
|
Vliv donoru sulfanu a česnekových derivátů na meiotické zrání a stárnutí prasečích oocytů
Dvořáková, Markéta ; Sedmíková, Markéta (vedoucí práce) ; Miloslava, Miloslava (oponent)
Meiotické zrání oocytu je proces přeměny oocytu ve stádiu zárodečného váčku v oocyt ve stádiu metafáze II. Pokud jsou oocyty po dokončení zrání vystaveny prodloužené kultivaci, nastává proces označovaný jako stárnutí oocytu, kdy dochází k poklesu jejich kvality. Přidáním vhodných sloučenin do kultivačních médií lze pozitivně ovlivnit kvalitu zrajících a stárnoucích oocytů. Sulfan je plynná molekula, která je v organismu endogenně produkována a plní zde signální úlohu. Alliin a S-allyl cystein jsou česnekové deriváty, které vykazují v organismu řadu pozitivních účinků, z nichž řada je zprostředkována jejich schopností zvyšovat koncentrace sulfanu.
Byla stanovena hypotéza, podle které lze zlepšit kvalitu oocytů v in vitro kultivačním systému přidáním donoru sulfanu a česnekových derivátů do kultivačního média. Cílem práce bylo vyhodnotit vliv sulfanu a česnekových derivátů na meiotické zrání oocytů, vyhodnotit vliv sulfanu na stárnutí oocytů a zhodnotit vliv kultivace se sulfanem a česnekovými deriváty na časný embryonální vývoj.
Bylo zjištěno, že donor sulfanu urychluje jaderné zrání oocytů a způsobuje dřívější vzestup aktivity MPF a MAPK. Donor sulfanu zvýšil úspěšnost partenogenetické aktivace oocytů. Bylo zjištěno, že během stárnutí prasečích oocytů dochází k endogenní produkci sulfanu, a že tato endogenní produkce sulfanu klesá po prvních 24 hodinách prodloužené kultivace. Inhibitory sulfan uvolňujících enzymů zhoršily kvalitu stárnoucích oocytů. Donor sulfanu zcela potlačil fragmentaci oocytů vystavených prodloužené kultivaci a zlepšil také kvalitu stárnoucích prasečích oocytů ošetřených inhibitory sulfan uvolňujících enzymů. Přítomnost donoru sulfanu během prodloužené kultivace oocytů zlepšila jejich časný embryonální vývoj po partenogenetické aktivaci. Bylo zjištěno, že zatímco alliin narušuje průběh meiotického zrání oocytů, S-allyl cystein nemá na tento proces vliv. S-allyl cystein urychlil nástup rýhování embryí a snížil hladiny ROS ve zrajících a partenogeneticky aktivovaných oocytech.
|
|
Vliv kontaminace životního prostředí na kvalitu listové zeleniny
Jančíková, Silvie ; Pavlíková, Daniela (vedoucí práce) ; Veronika, Veronika (oponent)
Těžké kovy jsou přirozenou součástí životního prostředí, vlivem antropogenní činnosti však může dojít k jeho kontaminaci, těžké kovy tak přirozeně přechází do rostlin. Jak snadno bude konkrétní prvek rostlinou přijímán a do jaké míry se zde bude akumulovat, závisí na mnoha faktorech, mezi něž patří: rostlinný druh, rostlinný orgán, růstová perioda rostliny, půdní podmínky (fyzikálně- chemické vlastnosti půdy, obsah organické hmoty), synergické či antagonistické vztahy mezi prvky aj. Při dosažení určité koncentrace se těžké kovy stávají stresovými faktory. Rostlina se s rostoucí koncentrací těžkých kovů vyrovnává pomocí různých mechanismů, jakými jsou např. vylučování organických kyselin, znesnadňujících vstup toxických kovů do cytosolu, sorpce na pektinové látky v buněčných stěnách nebo tvorba fytochelatinů, které těžké kovy inaktivují.
Při selhání detoxifikačních mechanismů nastává rozvrat metabolismu rostlin, k jehož projevům patří: změny koncentrace aminokyselin, změny aktivity enzymů, změny koncentrace mastných kyselin, inhibice výnosu biomasy, skvrny na listech aj.
Poněkud odlišné postavení mezi zde uváděnými rizikovými prvky (As, Cd, Pb, Zn) má zinek, který je rostlinnou živinou a reakce rostlin na jeho vyšší obsah jsou ve srovnání s ostatními kovy méně toxický.
Listová zelenina je bohatým zdrojem nutričních látek, těžké kovy mohou jejich obsah snižovat a znehodnocovat tak kvalitu produkce. Konzumace listové zeleniny by v případě silné kontaminace životního prostředí představovala vážné riziko vstupu těžkých kovů do potravního řetězce z důvodu snadné akumulace těžkých kovů touto zeleninou v porovnání se zeleninou plodovou a kořenovou.
Evropská zemědělská půda je pro produkci plodin z hlediska obsahu těžkých kovů bezpečná, větší problém představují hustě zalidněné průmyslové oblasti (např. Čína), o čemž svědčí i množství publikovaných studií zaměřených na obsah těžkých kovů v plodinách této oblasti.
|
|
Influence of enzymatic activity induced by copper and cadmium in aquatic plant Myriophyllum alterniflorum DC.
Mikšová, Martina ; Karlíčková, Jana (vedoucí práce) ; Macáková, Kateřina (oponent)
Souhrn Tato diplomová práce se zabývá účinkem těžkých kovů na rostliny a je součastí širšího výzkumu týkajícího se biomarkrů oxidativního stresu u vodních rostlin, který probíhá na katedře botaniky Farmaceutické Fakulty Univerzity v Limoges. Pokusným organismem byla vodní rostlina Myriophyllum alterniflorum DC (stolístek střídavokvětý), která byla nasbírána v horním toku řeky Vienny. Vzorky pak byly kultivovány ve roztocích s rostoucí koncentrací mědi a kadmia (0mM, 0,25mM, 0,5mM, 0,75mM) po dobu 1, 3 a 6 dnů. Kvůli nedostatku času a chemikálií byly provedeny pouze některé analýzy u rostlin ošetřených mědí. Kataláza je jedním z enzymů zapojených do antioxidačního obraného systému buňky. Rozkládá H2O2 na vodu. V čase aktivita katalázy postupně rostla až do koncentrace 0,5mM. 0,75mM vykazovala maximum třetí den. Ve srovnání rozdílných koncentrací mědi, po stejné inkubační době byla první den nejvýši aktivita pozorována u 0,25mM roztoku a u 0,50mM třetí a šestý den. Myriophyllum alterniflorum DC, stejně jako jiné vodní rostliny, vykazovala schopnost akumulace těžkých kovů rostoucí v čase a v koncentrovanějších roztocích. Naopak, klesající časová a koncentrační závislost byla pozorovatelná u měření obsahu proteinů.
|
|
Účinek hipoterapie na držení těla
Burešová, Barbora ; Hofmanová, Barbora (vedoucí práce) ; Majzlík, Ivan (oponent)
Práce se zabývá problematikou držení těla a způsobu jeho ovlivnění prostřednictvím hipoterapie.
První část práce se zabývá motorikou člověka a jejím vývojem. Je zde rozlišena motorika podpůrná, která zajišťuje vzpřímené držení těla pomocí reflexních mechanismů a motorika cílená, která zahrnuje volní a mimovolní pohyby. Volní pohyby jsou řízeny centrální nervovou soustavou na popud naší mysli. Jestliže vykonáváme určité pohyby často, mohou z nich vzniknout, na základě pohybového učení stereotypy. Tyto pohyby i jejich řízení se zautomatizují a jsou vykonávány neuvědoměle, což může vést k nepřiměřenému zatěžování některých svalů.
Mimovolní pohyby, spojené s příjmem potravy, chůzí a podobně jsou dané tzv. motorickými vzory. Jsou to pohybové odpovědi centrální nervové soustavy, objevující se ve stejné podobě ve sledu generací, jednoduché reflexy i složitější pohybové reakce.
Vývoj motoriky je daný právě těmito motorickými vzory. Začíná vývojem držení těla - postury a cílené lokomoce a je vázaný na zdravý centrální nervový systém. V práci je popsán fyziologický vývoj motoriky člověka a jeho jednotlivá období. Postupně dochází ke koordinaci svalové aktivity, která zajišťuje centrované postavení kloubů a správné zakřivení páteře. Následně se vyvíjí nákročná a opěrná funkce, dítě se vertikalizuje a pomocí rovnováhy, koordinace a ovládání svalové síly se začíná vyvíjet samostatná chůze. V období kolem dvou let, kdy dozrává centrální nervový systém, mizí některé reflexy a motorické vzory a začínají vznikat první pohybové stereotypy.
Druhá část práce se věnuje držení těla, které odráží a ovlivňuje celkový stav organismu. Jde o svalové držení jednotlivých částí těla zejména proti působení gravitační síly. Je součástí každé polohy a základní podmínkou pohybu. Jsou zde popsány jednotlivé složky pohybového aparátu s důrazem na axiální systém a páteř, jež jsou základem, od kterého se každý pohyb odvíjí. Kostra tvoří pevný základ těla, chrání orgány a je místem úponu jednotlivých svalů. V práci je popsána stavba a vlastnosti svalové tkáně a jsou zde zmíněny svaly, jejichž funkce je zásadní pro držení těla. Držení těla a každý pohyb je zajišťován rovnovážnou spoluprací svalů, které jsou řízeny z centrální nervové soustavy, proto se část práce věnuje právě popisu nervové soustavy.
Závěr druhé části práce se zaměřuje na vadné držení těla způsobené hlavně pohybovými stereotypy, osvojenými v průběhu života, které vedou k nadměrnému svalovému napětí, následně k bolesti a omezení pohyblivosti. Mnoho těchto stereotypů vzniká už v dětství, a proto se zdají být zcela normální, často si je neuvědomujeme a nevíme, jak je změnit.
V další části je nastíněn princip celostní medicíny, že tělo a mysl jsou neoddělitelné a jedno ovlivňuje druhé.
Poslední část práce rozebírá vztah člověka a koně, který sahá daleko do naší historie. Soustředí se na využití koně ke zlepšení zdravotního stavu a celkové kvality života lidí, což je oblast, o kterou je v současné době čím dál větší zájem. Zabývá se působením koně na člověka zejména ve fyzické a psychické oblasti. Pro pochopení účinku na tělesnou stránku člověka je zde popsán pohyb koně v kroku, dále pozice jezdce a jeho pohyb, který je vyvolaný pohybem koňského hřbetu. Práce shrnuje poznatky o přímém účinku hipoterapie na fyzické tělo a o účinku na psychickou stránku člověka, neboť tyto oblasti jsou vzájemně úzce propojeny.
|
|
In vitro produkce embryí u koní
Babická, Dominika ; Šichtař, Jiří (vedoucí práce) ; Šimoník, Ondřej (oponent)
Cílem této práce je napsat literární rešerši zahrnující nejnovější poznatky z oblasti in vitro produkce embryí u koní. Aby bylo možné provést in vitro produkci embryí, je potřeba nejprve znát anatomii klisny a řízení pohlavní aktivity. Pohlavní soustava klisny se skládá ze dvou vaječníků, dvou vejcovodů, dělohy, pochvy a vulvy. Na rozdíl od jiných hospodářských zvířat probíhá vývoj oocytů v dřeni vaječníků. Pohlavní aktivita je řízena neurohumorálně a produkci hormonů zajišťuje centrální nervová soustava a endokrinní žlázy.
Pro in vitro produkci embryí se musí nejprve získat oocyty. Ty se sbírají buď z živých, nebo mrtvých klisen. U živých klisen se využívá ovum pick up (OPU, transvaginální aspirace oocytů pomocí ultrazvuku), laparotomie přes slabinu, nebo transkutánní punkce přes slabinu. Neinvazivní metodou je OPU, kdy se každý folikul několikrát vyplachuje, a v získaném roztoku se hledají oocyty. Invazivní, za to však úspěšnější metodou při získání oocytů, je transkutánní punkce přes slabinu. Z vaječníků z jatek se oocyty sbírají rozřezáním vaječníků, kyretáží, nebo aspirací. Velmi dobré výsledky v množství zíkaných oocytů má rozřezání vaječníků. Po sesbírání se oocyty nejprve musí roztřídit podle kvality kumulo-oocytárního komplexu na oocyty kompaktní, expandované, nebo degenerující. Kompaktní a expandované oocyty se rozlišují pod mikroskopem na základě morfologie okrajů těchto komplexů. Kompaktní oocyty mají čistou linii okraje, zatímco expandované oocyty mají okraje zdeformované a mají heterogenní cytoplazmu. Nejlepší výsledky pro produkci embryí vykazují expandované oocyty. Ty se nejprve musí nechat zrát v kultivačním médiu do stádia MII. Kultivační systém pro zrání oocytů se sestává z použití M199 s Earlovou solí, 10% fetálního bovinního séra a 5 mU - ml bovinního folikulostimulačního hormonu ve zvlhčené atmosféře 5% CO2 ve vzduchu při 38,2°C. Bylo zjištěno, že nezáleží na délce kultivace, výsledky vývoje blastocyst po 24 nebo 48 hodinách byly stejné.
Standardní IVF se u koní nedá provést kvůli změnám na zoně pellucidě a problematické kapacitaci spermií. Proto se používá intracytoplazmatická injekce spermie (ICSI), kdy se přímo do oocytu injikuje jedna znehybněná spermie. Před ICSI musí proběhnout kapacitace spermie pomocí kalcium ionoforu. Oocyt se dále kultivuje in vitro do stádia blastocysty. Další možností je přenos oplozeného oocytu přímo do děložního rohu klisny, nebo se uchovává pomocí kryokonzervace pro další použití.
|
host ::
