|
|
Pathophysiological development and differentiation of cells during hematopoiesis
Moudrá, Alena ; Štěpánek, Ondřej (vedoucí práce) ; Černý, Jan (oponent) ; Kalina, Tomáš (oponent)
(Czech version) V posledních letech byla vynaložena velká snaha o lepší pochopení molekulárních změn v buňkách a v prostředí kostní dřeně, které přispívají k rozvoji a progresi myelodysplastického syndromu (MDS) do akutní myeloidní leukémie (AML). Aberantní hematopoetické kmenové buňky v MDS často vykazují nárůst dvojitých zlomů DNA, genomovou nestabilitu s běžnou ztrátou nebo přestavbou chromozomů a neúčinnou odpověď na poškození DNA. Navíc může být mikroprostředí kostní dřeně více prozánětlivé. Pokusili jsme se lépe porozumět příspěvku mikroprostředí kostní dřeně při progresi MDS. Analyzovali jsme expresní profily cytokinů v mikroprostředí kostní dřeně u všech stadií MDS/AML a našli jsme několik prozánětlivých cytokinů, jejichž hladiny se zvyšují s progresí onemocnění. Opakovaně jsme odebírali vzorky kostní dřeně od MDS pacientů v průběhu léčby 5-azacytidinem a podařilo se nám stanovit změny v cytokinovém prostředí v průběhu progrese onemocnění. Dále jsme se zaměřili na identifikaci kandidátních markerů pro zlepšení prognózy MDS. Zaměřili jsme se na přirozeně se vyskytující polymorfismus genu NAD (P) H dehydrogenázy (chinonu 1) (NQO1*2), který snižuje schopnost redukovat oxidační stres. Zjistili jsme, že pacienti s genotypem NQO1*2 se zhoršují rychleji a mají kratší celkovou dobu přežití, což...
|
|
|
Moderní matematické metody ve studiu imunitní rekonstituce a imunodeficiencí
Stuchlý, Jan ; Kalina, Tomáš (vedoucí práce) ; Šinkora, Jiří (oponent) ; Štěpánek, Ondřej (oponent)
V této práci p edstavujeme nové metody anal˝zy a integrace cytometrick˝ch dat ze öirokého spektra problém se vztahem k imunodeficiencím a poruchám krvetvorby. CVID 6 (respektive 8) barevná pr toková cytometrie je pouûita k imnuno- fenotypizaci rozsáhlé kohorty (88) CVID pacient . Automatická anal˝za "pro- bability binning" ukazuje stabilitu a vnit ní provázanost imunofentotypu CVID pacient . Definovali jsme podskupinu CVID pacient , která vykazuje v˝raznou senescenci, aktivaci imunitního systému a podobn˝ klinick˝ obraz (trombocyto- penie, plicní fibróza a bronchiektázie), kter˝ kvantitativn koreluje s imunofeno- typem. Anal˝za bun ného proteomu Vytvo ili jsme techniky, které umoû ují multiplexní (tisíce protilátek najednou) anal˝zu lidského proteomu pomocí afi- nitní proteomiky, rychlou anal˝zu a zpracování dat. Tyto techniky jsme apliko- vali na anal˝zu zm n proteomu lidsk˝ch bun n˝ch linií a charakterizaci prote- omu akutních leukemií. Ukazujeme dosud nepopsanou stabilitu proteomu v rámci subcelulárních lokalizací a prezentujeme teoretick˝ a praktick˝ základ pro stan- dardizaci a validaci protilátek pro pouûití v afinitní proteomice. Topologická anal˝za cytometrick˝ch dat Multiparametrická hmotnostní cytometrie umoû uje popsat sloûité topologické vztahy bun k v r zn˝ch v˝vo- jov˝ch stádiích....
|
|
|
Role of Bardet-Biedl syndrome (BBS) protein complex in T cells
Niederlová, Veronika ; Štěpánek, Ondřej (vedoucí práce) ; Černý, Jan (oponent)
BBSome je proteinový komplex zásadní pro transport specifických nákladů do primární cilie. Buňky hematopoetického původu, mezi které patří i T lymfocyty, primární cilie obvykle netvoří. Současný výzkum však odhalil překvapivé paralely mezi primární cilií a imunologickou synapsí. Vedle dalších podobností například obě struktury využívají stejné transportní proteiny včetně blízkých interakčních partnerů BBSomu, proteinů Rab8 a IFT20. Prvním cílem této práce bylo prozkoumat roli BBSomu v biologii T lymfocytů. S použitím RT-qPCR jsme prokázali, že podjednotky BBSomu jsou exprimovány v lymfoidních tkáních a T lymfocytech. Studium lokalizace podjednotek BBSomu v buněčné linii Jurkat a primárních T lymfocytech OT-I odhalilo, že podjednotky mají různou lokalizaci. Podjednotka BBS4 lokalizovala do centrozomu, podjednotky BBS1, BBS5 a BBip10 byly přítomné všude v cytoplazmě. Po kontaktu s antigen-prezentující buňkou se signál podjednotky BBS4 přemístil do imunologické synapse. Mutace v genech kódujících BBSome způsobují Bardet-Biedlův syndrom (BBS), vzácné onemocnění projevující se multiorgánovými vadami. Druhým cílem této práce bylo zjistit, zda existuje souvislost mezi BBS a imunitním systémem. Analýza lékařských záznamů více než 450 pacientů s BBS prokázala, že u pacientů s BBS se oproti normální populaci...
|
|
| |
|
| |
|
|
Pražská reklama v meziválečném období
Štěpánek, Ondřej ; Jakubec, Ivan (vedoucí práce) ; Vošahlíková, Pavla (oponent)
V diplomové práci "Pražská reklama v meziválečném období" se její autor Ondřej Štěpánek věnoval dosud spíše opomíjenému tématu - reklamnímu odvětví v Praze mezi lety 1918- 1939. Po nastínění vývoje reklamy v těchto dvou dekádách v celém nově konstituovaném státě se zaměřil na regionální specifika v hlavním městě, která byla dána místními vyhláškami a nařízeními. Zaobíral se tak především legalitou jednotlivých reklamních prostředků, zejména těch ve veřejném prostoru. Svou pozornost věnoval také tvůrcům samotné reklamy v Praze. Dochází tak k závěrům, že reklamní obor prošel ve sledovaném období značným posunem vpřed. Především během druhé poloviny dvacátých let a první poloviny třicátých let se začal reklamní průmysl v Praze rozvíjet daleko rychleji. Legislativní rovina přinesla mnohá omezení a zákazy, se kterými se musely propagující firmy vyrovnávat. Závěrečná kvalifikační práce přináší nové podněty do výzkumu dějin reklamy, zejména v oblasti vývoje reklamních kanceláří.
|
|
|
Regulatory CD8+ T lymphocytes
Chadimová, Tereza ; Štěpánek, Ondřej (vedoucí práce) ; Grobárová, Valéria (oponent)
Regulační T-buňky jsou nezbytné pro udržování periferní imunitní tolerance, zabraňování aloimunity a prevenci imunopatologie způsobené patogeny. Zatímco regulační CD4+ T lymfocyty jsou studovány po více než dvě desetiletí, existence regulačních T lymfocytů mezi CD8+ buňkami zůstává nadále kontroverzní. V průběhu let byla možná regulační aktivita zpozorována u několika subpopulací CD8+ T lymfocytů, nicméně žádná z nich nebyla dosud kanonicky uznána. Cílem této práce je přezkoumat současné znalosti týkajících se těchto předpokládaných CD8+ regulačních lymfocytů a zhodnotit, zda tyto podskupiny mohou být zavedeny jako regulační T buňky. Důraz bude kladen na fenotypovou charakteristiku, regulační aktivitu a inhibiční mechanismy těchto buněk. Klíčová slova: CD8+ regulační T lymfocyty, imunologická autotolerance, imunosuprese
|
|
|
Homeostatic memory and virtual memory CD8+ T cells
Přibíková, Michaela ; Štěpánek, Ondřej (vedoucí práce) ; Krulová, Magdaléna (oponent)
Tato práce shrnuje dosavadní poznatky zabývající se homeostatickou proliferací vzniklými paměťovými buňkami (HP) a virtuálními paměťovými CD8+ T buňkami. Tyto dvě buněčné populace nepředstavují pravou imunologickou paměť, protože se tvoří v nepřítomnosti cizího antigenu. Nicméně, HP-paměťové i virtuální paměťové T buňky sdílejí některé fenotypické a funkční vlastnosti s pravými paměťovými buňkami, včetně schopnosti poskytnout rychlou imunitní odpověď během infekce. HP-paměťové buňky vznikají homeostatickou proliferací během lymfopenie. Virtuální paměťové buňky mohou vznikat také homeostatickou proliferací během neonatální nebo stařecké lymfopenie, ale objevují se i v jedincích, kteří mají normální počet lymfocytů v krvi. Na základě podrobné analýzy těchto dvou buněčných populací jsem došla k závěru, že HP-paměťové buňky a virtuální paměťové buňky pravděpodobně využívají stejný diferenciační program a představují stejnou populaci buněk. Klíčová slova: homeostatická proliferace, lymfopenie, CD8+ T buňky, imunologická paměť, virtuální paměťové buňky
|
|
|
Příprava biologicky aktivních látek s chinazolinovým skeletem
Štěpánek, Ondřej
Předkládaná dizertační práce byla vypracována v rámci výzkumu inhibitorů skládání kapsidy viru HIV-1. Bylo prokázáno, že 2,4-disubstituované deriváty chinazolinu tento proces dokážou inhibovat jak v rámci kompetitvního biochemického testu založeného na technologii AlphaScreen, tak i v tkáňových kulturách. Hlavním cílem práce byla příprava výše zmiňovaných chinazolinů, na základě hodnot IC50 získaných při biochemických testech následně navrhnout a připravit nové kandidáty s vyšší aktivitou, a také se pokusit zvýšit rozpustnost těchto jinak nedostatečně rozpustných sloučenin. Takovéto disubstituované chinazoliny jsou poměrně dobře přístupné z komerčně dostupných derivátů kyseliny anthranilové, které jsou pomocí kondenzačních reakcí převedeny na příslušný chinazolin-4(3H)-on. V rámci této práce byly využívány dvě metody pro přípravu chinazolin-4(3H)-onů: reakce anthranilamidů s aromatickými acylchloridy poskytovaly 2-arylamidobenzamidy, jejichž následná cyklizace v bazickém prostředí vedla k derivátům 2-arylchinazolin-4(3H)-onu; reakce esterů kyseliny anthranilové s aromatickými nitrily, kterouž bylo možné požadovaný chinazolin-4(3H)-on získat v jednom reakčním kroku. Chlorace 2-arylchinazolin-4(3H)-onů pomocí POCl3 poté vedla k derivátům 2-aryl-4-chlorchinazolinu jakožto klíčovým intermediátům....
|
|
|
Příprava biologicky aktivních látek s chinazolinovým skeletem
Štěpánek, Ondřej ; Kotora, Martin (vedoucí práce) ; Hájíček, Josef (oponent) ; Moravcová, Jitka (oponent)
Předkládaná dizertační práce byla vypracována v rámci výzkumu inhibitorů skládání kapsidy viru HIV-1. Bylo prokázáno, že 2,4-disubstituované deriváty chinazolinu tento proces dokážou inhibovat jak v rámci kompetitvního biochemického testu založeného na technologii AlphaScreen, tak i v tkáňových kulturách. Hlavním cílem práce byla příprava výše zmiňovaných chinazolinů, na základě hodnot IC50 získaných při biochemických testech následně navrhnout a připravit nové kandidáty s vyšší aktivitou, a také se pokusit zvýšit rozpustnost těchto jinak nedostatečně rozpustných sloučenin. Takovéto disubstituované chinazoliny jsou poměrně dobře přístupné z komerčně dostupných derivátů kyseliny anthranilové, které jsou pomocí kondenzačních reakcí převedeny na příslušný chinazolin-4(3H)-on. V rámci této práce byly využívány dvě metody pro přípravu chinazolin-4(3H)-onů: reakce anthranilamidů s aromatickými acylchloridy poskytovaly 2-arylamidobenzamidy, jejichž následná cyklizace v bazickém prostředí vedla k derivátům 2-arylchinazolin-4(3H)-onu; reakce esterů kyseliny anthranilové s aromatickými nitrily, kterouž bylo možné požadovaný chinazolin-4(3H)-on získat v jednom reakčním kroku. Chlorace 2-arylchinazolin-4(3H)-onů pomocí POCl3 poté vedla k derivátům 2-aryl-4-chlorchinazolinu jakožto klíčovým intermediátům....
|
host ::
RSS.