|
| |
|
|
Příprava DNA vazebné domény transkripčního faktoru FOXK2
Kobrle, Lukáš ; Kukačka, Zdeněk (vedoucí práce) ; Bělonožníková, Kateřina (oponent)
Transkripční faktory jsou specifické proteiny, které jsou schopny regulovat trankripci a které se na základě strukturních motivů dělí do jednotlivých rodin. Jednou z těchto rodin je i rodina FOX, do které se řadí i transkripční faktor FOXK2, jež byl předmětem studia této práce. Protein FOXK2 reguluje mnoho buněčných dějů včetně buněčné proliferace a metabolismu a má neméně důležitou roli při karcinogenezi, neboť jeho zvýšená exprese byla zaznamenána v případech rakoviny plic, jater a ledvin. V rámci této práce byla připravena DNA vazebná doména trakripčního faktoru FOXK2 rekombinantní expresí v buňkách Escherichia coli. Získaný protein byl poté purifikován a byla studována jeho interakce s DNA pomocí nativní hmotnostní spektrometrie.
|
|
|
Afinitní purifikace 5'-adenosinmonofosfátem aktivované proteinové kinasy
Jahodová, Tereza ; Novák, Petr (vedoucí práce) ; Bělonožníková, Kateřina (oponent)
5'-adenosinmonofosfátem aktivovaná proteinová kinasa je významným regulátorem buněčného metabolismu, růstu, proliferace, ale i například autofagie. Dle posledních výzkumů hraje důležitou roli i v patogenezi nervosvalového onemocnění myotonická dystrofie typu 1 a je možným terapeutickým cílem. V této práci byly kultivovány diferencované a nediferencované lidské svalové buněčné linie zdravých jedinců a pacientů s myotonickou dystrofií typu 1. Předmětem práce je studium a porovnání hladin AMPK v kulturách zdravých a nemocných buněk. Dalším bodem práce je afinitní purifikace tohoto enzymu metodou imunoprecipitace pomocí magnetických kuliček s navázanou protilátkou a následně hmotnostně spektrometrická analýza purifikovaného vzorku. Jelikož se spolu s AMPK podařilo afinitně purifikovat i další proteiny její signalizační kaskády, je část práce věnována také popisu těchto interakcí a porovnání množství koimunoprecipitovaných proteinů ve zdravých a nemocných buňkách. Klíčová slova 5'-adenosinmonofosfátem aktivovaná proteinová kinasa, imunoafinitní precipitace, hmotnostní spektrometrie, relativní kvantifikace bílkovin
|
|
|
Příprava a metabolismus nanotransportérových forem inhibitorů tyrosinkinas
Urbanová, Tereza ; Indra, Radek (vedoucí práce) ; Bělonožníková, Kateřina (oponent)
Nádorová onemocnění jsou v současné době druhou nevýznamnější civilizační chorobou, není tedy divu, že v posledních desetiletích je jejich výzkum prioritou řady laboratoří. Problémem klasické léčby onkologických chorob, jejíž původ se datuje do počátku 40. let minulého století, je její nespecifičnost k nádorovým buňkám a s tím spojena celá řada vedlejších účinků. V posledních letech se objevil nový přístup k léčbě této závažné choroby, využívající nejrůznější nanotransportéry (liposomy, proteiny, ale i anorganické uhlíkové nanotrubice), které mohou cytostatika enkapsulovat a cíleně uvolnit až v okolí nádoru, to by mělo vést k minimalizaci vedlejších účinků. V této diplomové práci byla studována enkapsulace tří cytostatik (lenvatinibu, adavosertibu a sunitinibu) do apoferritinu. Dále v této diplomové práci byl studován vliv kavity apoferritinu na biotransformaci enkapsulovaného sunitinibu; biotransformace volného i vázaného sunitinibu pomocí biotransformačních enzymů vázaných v liposomech a v neposlední řadě také kinetika uvolňování sunitinibu z apoferritinové centrální dutiny. Bylo zjištěno, že lenvatinib není vhodným cytostatikem pro enkapsulaci do centrální dutiny apoferritinu kvůli své nízké rozpustnosti a zápornému náboji při bazickém pH. Adavosertib a sunitinib se jeví jako vhodnější alternativy pro...
|
|
| |
|
|
Protinádorová léčiva ve formě nanočástic a mechanismy potencující jejich protinádorovou účinnost
Meskařová, Veronika ; Indra, Radek (vedoucí práce) ; Bělonožníková, Kateřina (oponent)
Onkologická onemocnění jsou jedním z častých civilizačních chorob už po staletí. V 18. století byly popsány některé druhy rakoviny a navrhnuty první léčebné postupy. V současné době se pro léčbu rakoviny využívá onkochirurgie, chemoterapie, radioterapie, imunoterapie a hormonální léčba. Zároveň je snaha nalézt nová protinádorová léčiva, která cílí selektivněji na nádorové buňky. V poslední době se začala uplatňovat i nanomedicína. Tato bakalářská práce pojednává o minimalizaci vázanosti množství cytostatika ellipticinu na povrch nanotransportéru apoferritinu a docílení vyšší efektivity enkapsulace. V rámci práce byly studovány 2 typy apoferritinů při různých hmotnostních poměrech ku ellipticinu. Bylo zjištěno, že při nalezení vhodného hmotnostního poměru obou molekul lze minimalizovat vázanost a zvýšit účinnost enkapsulace. Při práci s komerčním apoferritinem byla vyšší enkapsulace a nižší vázanost ellipticinu na povrch při hmotnostním poměru 1:10. Naopak při práci s rekombinantním apoferritinem je vyšší enkapsulace a nižší vázanost ellipticinu u menšího poměru a to 1:2,5. Klíčová slova: onkologická onemocnění, protinádorová léčiva, nanomedicína, cytostatikum, nanotransportér, ellipticin, apoferritin
|
|
|
Diagnostika těhotenských patologií
Račko, Ján ; Hudeček, Jiří (vedoucí práce) ; Bělonožníková, Kateřina (oponent)
Problematika spontánního potratu je v dnešní době pořád aktuálním tématem. V České republice je každoročně tímto způsobem ukončeno v průměru patnáct tisíc gravidit. Nejčastějšími příčinami jsou genetické aberace nebo jiné poškození plodu, jako je např. syndrom dechové tísně, nebo syndrom LUTO. Potrácení je možné předejít časnou diagnostikou v prvním trimestru a také za pomoci chirurgických zákroků jako je např. cervikální cerkláž. Annexin V, PAPP-A a hCG jsou považovány za vhodné biochemické markery pro časnou diagnostiku. V této práci je na základě literárních dat rozebírána problematika potratovosti a experimentálně zkoumána možnost využití annexinu V jako vhodného biomarkeru pro časnou diagnostiku a prevenci spontánního potratu.
|
|
|
Příprava léčiv vázaných v nanočásticích pro cílenou léčbu rakoviny
Jáklová, Kateřina ; Indra, Radek (vedoucí práce) ; Bělonožníková, Kateřina (oponent)
V této bakalářské práci byla studována schopnost apoferritinu enkapsulovat léčiva vandetanib a etoposid. Vandetanib je protinádorové léčivo používané zejména pro léčbu nádorů štítné žlázy. Patří mezi inhibitory tyrosinkinasových receptorů. Etoposid, který se používá velmi široce, jak pro léčbu krevních maligních chorob, tak pro léčbu solidních nádorů, inhibuje topoizomerasu II, která reguluje topologii DNA. Vedlejší účinky, které léčbu oběma léčivy doprovází, je možné minimalizovat využitím cílené léčby pomocí nanočástic. Apoferritin je přirozeně se vyskytující protein skládající se z 24 ferritinových podjednotek. Ve své struktuře obsahuje dutinu využitelnou pro vložení nejrůznějších látek. Struktura je pozoruhodně stálá a odolná vůči biologicky extrémním teplotám (do 70 řC) a širokému rozsahu pH (pH 2 - 10). Navíc apoferritin dokáže cirkulovat v krvi bez toho, aniž by byl detekován imunitním systém. Šíře použití apoferritinu se zvyšuje schopností modifikace jeho povrchu specifickými ligandy. Byl zjišťován zejména vliv koncentrace apoferritinu a vliv koncentrace cytostatika na výslednou koncentraci enkapsulovaného léčiva v apoferritinu, a dále pak efektivita enkapsulace cytostatika. V případě vandetanibu ze získaných výsledků vyplývá, že při konstantní koncentraci vandetanibu a s rostoucí...
|
|
|
Proteiny jako zdroj dusíku pro rostliny tabáku pěstované in vitro
Bělonožníková, Kateřina ; Ryšlavá, Helena (vedoucí práce) ; Entlicher, Gustav (oponent)
Dusík (N) patří mezi nepostradatelné prvky pro růst a vývoj rostlin. Dříve byla pozornost soustředěna hlavně na jeho anorganické formy - dusičnany a amonné kationty. V půdě je N přítomen také v organické formě, kterou představují i proteiny, o které mohou rostliny soutěžit s půdními mikroorganismy. V současné době jsou zvažovány dva mechanismy - hydrolýza proteinů sekretovanými proteasami a endocytóza nativních proteinů, případně jejich souhra. Rostliny tabáku byly pěstovány in vitro za sterilních podmínek v modifikovaném Murashige- Skoogově médiu s kaseinem jako jediným zdrojem N (KAS), se sníženou koncentrací anorganických forem N (AD) nebo v kompletním Murashige-Skoogově médiu jako kontrolní rostliny (MS). Po 12 týdnech růstu byly změřeny standardní růstové parametry rostlin. KAS rostliny byly schopné růst bez přítomnosti anorganické formy N, a obsah proteinů v listech byl vyšší než v ostatních experimentálních rostlinách. Proteomická analýza ukázala rozdíly v expresi proteinů v kořenech rostlin v závislosti na formě N v kultivačním médiu. Celkově bylo identifikováno 185 proteinů, z nichž 75 % procent proteinů bylo méně a 14 % více abundantních v KAS rostlinách. Příjem konjugátu kaseinu s fluoresceinem rostlinami a jejich proteolytická aktivita byla analyzována konfokální mikroskopií. Mezi...
|
|
|
Vlastnosti rostlinných extraktů
Bělonožníková, Kateřina ; Ryšlavá, Helena (vedoucí práce) ; Liberda, Jiří (oponent)
Rostliny syntetizují řadu látek označovaných jako sekundární metabolity. Patří mezi ně produkty fenylpropanoidní dráhy (flavonoidy, stilbeny, anthokyaniny, taniny), isoprenoidy a alkaloidy. Studiu sekundárních metabolitů rostlin je věnována značná pozornost, protože jsou spojovány s pozitivním vlivem na lidské zdraví a snížením rizika některých chorob včetně rakoviny, diabetu 2. typu a poruch kardiovaskulárního systému. Mechanismus účinku jednotlivých látek není dosud přesně znám, pozitivně se projevuje jejich antioxidační kapacita. V této práci byly připraveny extrakty z 22 druhů ovoce a zeleniny, byl stanoven celkový obsah fenolických látek, flavonoidů a antioxidační kapacita pomocí metody FRAP (z angl. ferric ion reducing antioxidant power) a ABTS [2,2' -azino-bis(3-ethylbenzothiazolin-6- sulfonát)]. Vysoký obsah fenolických látek byl zjištěn v extraktu z jahody, višně a kiwi. Nejvyšší antioxidační kapacitu měl extrakt z jahody. Další sledovanou vlastností byl vliv extraktů z ovoce a zeleniny na aktivitu trávicích enzymů pankreatické lipasy a α-amylasy. Extrakt z citronu, červeného rybízu, josty, limetky a višně snížil aktivitu lipasy, extrakty z červeného rybízu, dýně, kiwi a nashi výrazně inhibovaly štěpení škrobu α-amylasou. Klíčová slova: fenolické látky, flavonoidy, antioxidační kapacita,...
|
host ::
RSS.