|
Zavedení imunodetekční metody pro stanovení aktivace AMPK signální kaskády v buněčné linii LS174T
Dubecká, Michaela ; Pávek, Petr (vedoucí práce) ; Nachtigal, Petr (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Studentka: Michaela Dubecká Školitel: Doc. PharmDr. Petr Pávek, Ph.D. Název diplomové práce: Zavedení imunodetekční metody pro stanovení aktivace AMPK signální kaskády v buněčné linii LS174T LKB1/AMPK je hlavní energetickou dráhou v buňce, která integruje různé extra- a intracelulární signály a jako odpověď na signály reguluje energetický metabolismus a udržuje homeostázu v buňce. AMPK kaskáda má proto zásadní význam pro přežití, růst a vývoj buněk i celého organismu. Tato signální kaskáda má supresivní vliv na nádorové změny v buňce. Metformin, široce užívané léčivo v terapii diabetu mellitu 2. typu, vykazuje významnou protinádorovou aktivitu. Ačkoliv přesný mechanismus účinku metforminu stále není znám. Metformin v buňce indukuje stres podobný metabolickému stresu inhibicí komplexu I mitochondriálního respiračního řetězce, což má za následek zvýšení plazmatických hladin AMP. AMP se váže k AMPKγ subjednotce a aktivuje AMPK, jež je vzápětí prostřednictvím LKB1 fosforylována na Thr172 kinázové domény AMPKα subjednotky, což vede ke spuštění podřazených (angl. downstream) kináz a výsledkem je ovlivnění metabolismu na úrovni genové exprese. Následně dochází ke spuštění katabolických procesů (glykolýza,...
|
|
Solubilní forma scavenger receptoru pro hemoglobin (sCD163) v těhotenstvích komplikovaných předčasným odtokem plodové vody
Kacerovský, Marian ; Tošner, Jindřich (vedoucí práce) ; Calda, Pavel (oponent) ; Procházka, Martin (oponent)
SOUHRN Předčasný odtok plodové vody (PPROM) představuje zhruba 30% všech předčasných porodů. Histologická chorioamnionitida, která se vyskytuje u přibližně 50-80% těhotenství s PPROM, je spojena se zhoršenou perinatální mortalitou a morbiditou. Scavenger receptor pro hemoglobin (CD163) je transmembránový glykoprotein nalézaný téměř výhradně na monocytech a makrofázích. Jeho hlavní funkcí je vychytávání komplexů hemoglobin-haptoglobin. Také však slouží jako povrchový receptor, který dokáže rozpoznat intaktní bakterie. Navíc se podílí na pozdní, tlumivé, fázi akutního i chronického zánětu. Jeho solubilní forma (sCD163) představuje odštěpenou extracelulární část receptoru, která se uvolňuje do tělních tekutin. Hlavní cíl disertační práce bylo vyšetřit hladiny sCD163 v plodové vodě a pupečníkové krvi u těhotenství PPROM s ohledem na přítomnost HCA a funisitidy. První specifický cíl byl zjistit hladiny sCD163 v plodové vodě nekomplikovaných těhotenství, resp. v druhém trimestru a v termínu porodu. Vzorky plodové vody byly získané od 31 žen, které podstoupily aminocentézu z genetické indikace, 21 žen v termínu porodu bez děložní aktivity a 11 od žen s běžícím porodem. Hladiny sCD163 v plodové vodě byly stanoveny pomocí enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) metody. Hladiny sCD163 v plodové vodě klesaly v...
|
|
Adsorpce kovových iontů na huminových kyselinách
Pokorná, Markéta ; Mgr. Martina Havelcová, Ph.D (oponent) ; Klučáková, Martina (vedoucí práce)
Bakalářská práce se zabývá huminovými kyselinami a jejich schopností vázat na svém povrchu kovové ionty. Huminové kyseliny jsou většinou aromatické polycyklické sloučeniny, které mají na svých postranních řetězcích především fenolové a karboxylové funkční skupiny. Díky těmto skupinám mohou huminové kyseliny s ionty kovů vytvářet stabilní komplexní sloučeniny. V této práci byla studována adsorpce olovnatých iontů pomocí elektroanalytické metody zvané průtoková coulometrie.
|
|
Vliv intravenosně podaného laktoferinu na časnou fázi ischemie myokardu II. Biochemické vyšetření.
Písaříková, Veronika ; Semecký, Vladimír (vedoucí práce) ; Mladěnka, Přemysl (oponent)
Laktoferin (Lf) je glykoprotein vázající železo o molekulové hmotnosti 80-kD. Vyskytuje se přirozeně v sekretech exokrinních žláz (v slzách, slinách, mléce, sinoviální a seminální tekutině) a v sekundárních granulech neutrofilů. Je známo, že Lf vykazuje v organismu antibakteriální, protizánětlivé a antitumorové účinky. Jeho funkce v organismu je pravděpodobně komplexní a je předmětem vědeckého zkoumání. Díky schopnosti chelatovat železo, snižuje Lf tvorbu hydroxylových radikálů při tzv. Fentonově reakci. Afinita Lf k železu je asi 260krát větší než u transferinu. V experimentu byl použit isoprenalin (ISO) jako modelová sloučenina k vyvolání stavu podobnému akutnímu infarktu myokardu u člověka. Podání nekrotických dávek ISO způsobuje ischémii následovanou poškozením myokardu. Reperfúze ischemického myokardu představuje jedinou možnost, jak zachovat srdeční tkáň při akutním infarktu myokardu, ale tento proces je spojen s poškozením tkáně v důsledku zvýšené tvorby hydroxylových radikálů v tzv. Fentonově reakci, která je katalyzována volnými ionty železa. Potkani kmene Wistar byli náhodně rozděleni do čtyř skupin podle přijaté medikace: kontrola (fyziologický roztok), isoprenalin (ISO, 100mg/kg s.c.), hovězí laktoferin (La, 50 mg/kg i.v.) a kombinace La+ISO v již zmíněných dávkách (La byl podán 5 min před...
|
|
Adenylát cyklázový toxin bakterie Bordetella pertussis, jeho konformace a iontová rovnováha v hostitelské buňce.
Motlová, Lucia ; Konopásek, Ivo (vedoucí práce) ; Krůšek, Jan (oponent)
Adenylát-cyklázový (CyaA, ACT) toxin je jedním z hlavních virulenčních faktorů bakterie Bordetella pertussis. Ačkoli se CyaA váže na mnoho typů membrán, předpokládá se, že jeho receptorem je integrin CD11b/CD18, který je exprimován na povrchu myeloidních buněk. CyaA patří do rodiny RTX toxinů-hemolyzinů. CyaA působí na hostitelské buňky dvěma na sobě nezávislými aktivitami. Jednou z nich je přeměna ATP na cyklické AMP, kterou zajišťuje adenylát-cyklázová (AC) doména po translokaci do cytozolu hostitelské buňky, při které dochází ke vstupu vápenatých kationtů do hostitelské buňky. Translokace je pravděpodobně iniciována interakcí monomeru CyaA s cílovou membránou. Druhá aktivita CyaA je tvorba kanálu, selektivního pro kationty, který může způsobit koloidně osmotickou lyzi cílových buněk. Kanálo-tvorná aktivita je zajišťována RTX hemolyzinovou doménou a předpokládá se u ní oligomerizace, i když bylo zjištěno, že únik draselných kationtů z hostitelské buňky způsobuje CyaA ve formě monomeru. Také není jasné, zda by k oligomerizaci CyaA docházelo v roztoku, nebo až po interakci s hostitelskou membránou. Cílem této práce bylo zkoumat tok sodných iontů na membráně myších makrofágů J774A.1, které na svém povrchu exprimují CD11b/CD18 integrin. Pro dosažení tohoto cíle byly použity fluorescenční metody....
|
|
Vysokopevnostní macrodefect-free kompozity pro žáruvzdorné aplikace
Ryšková, Martina ; Másilko, Jiří (oponent) ; Šoukal, František (vedoucí práce)
Obsahem bakalářské práce je studium odolnosti vůči žáru macro-defect-free (MDF) kompozitu založeného na bázi kalcium-aluminátového cementu a organického polymeru polyvinylalkoholu. Macrodefect-free kompozity jsou významné především vynikajícími mechanickými parametry, mezi které se řadí pevnost v tahu za ohybu. Tyto materiály jsou charakteristické svou nízkou porózitou a absencí mikrotrhlin. Velkou roli v MDF cementech mají vazebné a nevazebné interakce polymeru s cementem, jež mají vliv na chemické a fyzikálně-mechanické vlastnosti. Hlavní problém při aplikaci MDF cementů je v nízké odolnosti vůči vodě. Pro přípravu macrodefect- free vzorků byl použit hlinitanový cement (SECAR 51 , SECAR 71) a polymer polyvinylalkohol Gohsenol GH 17S. Byly sledovány změny mechanických vlastností závislé na způsobu vytvrzení vzorků, které byly vytvrzeny za laboratorní teploty a 70 C. Vzorky žíhány při 1000°C a následně provedena zkouška pevnosti v tahu za ohybu před i po žíhání, porovnání mechanických vlastností. Žárové namáhání bylo zkoušeno pomocí žárového mikroskopu, TGA-DTA-EGA a TMA analýzy.
|
|
Panels of steroid receptor reporter cell lines for compound profiling and development of selective ligands for estrogen receptor alpha and beta
Sedlák, David ; Bartůněk, Petr (vedoucí práce) ; Anzenbacher, Pavel (oponent) ; Kasal, Alexander (oponent)
Obr 1. Porovnání odpovědí U2OS-ERα/3xERE (●), U2OS-ERαwt -LBD/9xGal4UAS (○) a U2OS- ERαG420C -LBD/9xGal4UAS ( ) z reportérových buněčných linií vystavených vzrůstající koncentraci vybraných látek. Agonistická odpověď reportérových buněčných linií v závislosti na E2 (A), DES (B) a PPT (C) je vyjádřena jako podíl naměřené luciferázové aktivity vyvolané testovanou látkou a luciferázovou aktivitou naměřenou maximální stimulací receptoru pomocí E2. V antagonistickém modu byly buňky inkubovány s různými koncentracemi ICI 182.780 (D), raloxifene hydrochloridu (E) and tamoxifen citrátu (F). Panel reportérových linií využívajících plnodélkových steroidních receptorů je zvláště vhodný pro detailní studium mechanizmů jakými látky dosahují biologických projevů vazbou na steroidní receptory. Tento systém totiž poskytuje biologicky více významnou informaci o aktivitě testované látky tím, že odráží například aktivitu jiných transkripčních faktorů, signálních drah, přítomnost různých kofaktorů v buňce atd. Užitečnost těchto buněčných linií jsme prokázali "screeningem" chemické knihovny obsahující 3700 látek a identifikací nových agonistů a antagonistů pro PR, MR a GR. Obr 3. Účinek E2 na růst myší mléčné žlázy u mladých myších samic. Prepubertálním mladým myším bylo po dobu 10 dnů podáváno subkutánně pouze olejové...
|
|
Charakterizace a funkce faktoru C z klíštěte \kur{Ixodes ricinus}
HARTMANN, David
Factor C is a multi-domain serine protease which recognizes Gram-negative bacteria via binding to lipopolysaccharides and triggers hemolymph clotting cascade in the horseshoe crab. A closely related molecule was also found to be present in the genome of the tick Ixodes scapularis. In this work, the full sequence of Factor C ortholog from Ixodes ricinus (IrFC) was determined. IrFC is mainly expressed in tick hemocytes and the heavy chain of the activated molecules is present in tick hemolymph as confirmed by Western blotting with antibodies raised against recombinant fragments of IrFC. The function of the IrFC in tick innate immunity was assessed using its silencing by RNA interference.
|
host ::
