|
Exprese transgenu bphC u ječmene
Sedlářová, Kateřina
Polychlorované bifenyly jsou toxické organické sloučeniny, charakteristické nízkou degradovatelností v životním prostředí a akumulací v rámci potravního řetězce. Z tohoto důvodu je dekontaminace znečištěných půd těmito látkami velice důležitou problematikou pro dnešní společnost. Dekontaminace ploch zamořených polychlorovanými bifenyly je však velmi komplikovaná z důvodu jejich fyzikálních a chemických vlastností. Vhodnou dekontaminační metodou jsou fytoremediace, které využívají k odstranění polychlorovaných bifenylů přirozené procesy rostlin. Prostřednictvím transformace rostlin můžeme zvýšit účinnost fytoremediací. V rámci diplomové práce byla zjišťována exprese remediačního genu bphC/His u T2 generace jarního ječmene (Hordeum vulgare L.), odrůdy Golden Promise na úrovni DNA, RNA a proteinu. Exprese transgenu byla detekována pomocí metod PCR, real-time PCR a Western blot. Pro získání dihaploidních homozygotních rostlin jarního ječmene, odrůdy Golden Promise obsahujícího fytoremediační gen bphC/His byla použita technika prašníkových kultur. V rámci diplomové práce byly vybrány rostliny T2 generace vykazující přítomnost vneseného genu pro test ověřující schopnost transgenních rostlin akumulovat polychlorované bifenyly.
|
|
Transport náboje po řetězci DNA
Drevený, Lukáš ; Mravec, Filip (oponent) ; Vala, Martin (vedoucí práce)
V této bakalářské práci byl studován transport náboje (CT) po řetězci DNA spektroskopickou metodou stacionární fluorescence s využitím fluorescenčního analogu adeninu - 2-aminopurinu (Ap), jako fluroescenční značky. Byl studován vliv změny struktury v duplexu DNA:DNA nebo DNA:RNA a vliv přítomnosti Hg(II) v dvoušroubovici DNA:DNA obsahující mutaci tymin-tymin, na účinnost CT po řetězci DNA. V experimentální části byla z excitačních spekter sledována míra zavedení Ap do řetězce deoxyribonukleové kyseliny (DNA), z integrálů emisních spekter byl vypočten faktor zhášení fluorescence. Bylo zjištěno, že Ap se lépe váže do bází v řetězeci DNA:RNA, který není tak rigidní jako řetězec DNA:DNA a tak může být lépe přijat mezi ostatní báze; dále bylo zjištěno, že fotoindukovaný přenos náboje (PET) po řetezci DNA prudce klesá po překročení teploty odpovídající teplotě tání řetezce, při které se řetezec rozplétá;přítomnost Hg(II) v řetězci DNA:DNA přenos náboje negatívně neovlivňuje, právě naopak, řetězec s mutací T-T je po začlenění Hg(II) stabilnější a teplota tání se posouvá k vyšším teplotám. V této práci bylo prokázáno že fotoindukovaný přenos náboje je velice citlivý proces a může být použit pro detekci i velmi malých změn ve struktuře nukleových kyselin.
|
|
The potential of deep seabed polymetallic nodules
Tormová, Lucia ; Dvořák, Antonín (vedoucí práce) ; Hadrabová, Alena (oponent)
Polymetalické konkrece oceánského dna jsou jedním z hlavních typů nekonvenčních rudných zdrojů. Oceánské ložiska surovin představují potenciální zdroj řady kovů, jejichž pevninská ložiska v nejbližší budoucnosti mají omezenou životnost. Proces geologického průzkumu oceánského dna se dá považovat za počátek kvalitativně nové etapy v procesu získávání nerostných surovin. Pokračování probíhajících prací na ložisku polymetalických konkrécií v zóně Clarion-Clipperton je považováno za vážný úkol do roku 2025, se zřetelem na pokrok ve vytvoření účinné těžební jednotky a aplikací moderních technologií pro extrakci hlavních kovů: manganu, niklu, mědi a kobaltu. Předpokladem racionálního využití oceánských zdrojů je ochrana přírodního oceánského prostředí. Zkoumaná je efektivita projektu těžby polymetalických konkrécií v konkrétním ložisku zóny Clarion-Clipperton, která je průzkumnou oblastí organizace IOM -- v rozsahu roční těžby 2,2 Mt mokrých konkrécií pro rok 2025.
|
|
Využití magnetických nanočástic pro transfekci plasmidu do HEK293 buněk
Bílek, Ondřej ; Svoboda, Ondřej (oponent) ; Fohlerová, Zdenka (vedoucí práce)
Tato bakalářská práce se zabývá využitím magnetických nanočástic, SPIO nanočástic a nanočástic komerčního produktu MATra pro transfekci plasmidu ASAP do HEK293 buněk a následnou optimalizací tohoto procesu. K experimentální části je přiložena teoretická část shrnující poznatky z oblasti syntézy magnetických nanočástic, jejich využití v biomedicíně, teorii zabývající se možnostmi vložení cizorodé DNA či plasmidu do buňky a způsoby vyhodnocování úspěšnosti těchto experimentů.
|
|
Underpricing and the Long-Run Underperformance of IPOs
Pindroch, Michal ; Musílek, Petr (vedoucí práce) ; Witzany, Jiří (oponent)
Akcie, ktoré spoločnosti predávajú v primárnych emisiách, sú väčšinou značne podhodnotené, čo znamená, že ich ceny zaznamenávajú vysoký nárast v priebehu prvého obchodného dňa. Investori tak dosahujú značné jednodňové zhodnotenie svojej investície. Avšak portfólia takýchto investorov strácajú na dlhodobej výkonnosti v porovnaní s výnosnosťou trhu, v prípade, že sú v nich umiestnené len akcie získané z primárnych emisií. Predkladaná diplomová práca sa zaoberá štúdiom týchto anomálií. Diplomová práca si kladie dva hlavné ciele. Prvý spočíva v systematickom zmapovaní empirického výskumu a relevantných teórií zaoberajúcich sa objasnením podhodnotenia akcií v primárnych emisiách a ich dlhodobej nižšej výkonnosti. Obidve anomálie sú navyše skúmané predovšetkým z pohľadu dvoch navzájom si konkurujúcich finančných teórií: hypotézy efektívnych trhov a behaviorálnych financií. Teórie podhodnotenia emisií sú rozdelené do dvoch kategórii. Sú to jednak modely založené na informačnej asymetrii, ktoré predpokladajú, že jeden z účastníkov primárnej emisie akcií je lepšie informovaný ako zostávajúci účastníci, a teda podhodnotenie je výsledkom informačnej nedokonalosti. Na druhej strane sú tu behaviorálne teórie, v prípade ktorých hrá dôležitú rolu iracionálne investorské publikum, ktoré je aj považované za hlavnú príčinu existencie podcenenia. Teórie dlhodobej nízkej výkonnosti sú založené výhradne na behaviorálnych financiách, kde "investičná nálada" hrá primárnu rolu. Naopak, prívrženci teórie efektívnych trhov považujú predstavu o systematickej dlhodobej nižšej výkonnosti akcií za iluzórnu. Druhým cieľom predkladanej diplomovej práce je empiricky otestovať existenciu podhodnotenia a dlhodobej nižšej výkonnosti akcií v primárnych emisiách uskutočnených na európskych trhoch burzovej skupiny NYSE Euronext. Vo všeobecnosti, výsledky ukazujú, že primárne emisie sú nepochybne vo zvolenej vzorke v priemere mierne podcenené. Naopak, hodnotenie dlhodobej výkonnosti poskytuje výsledky, ktoré môžu byť vnímané ako sporné a preto si vyžadujú ďalší výskum.
|
|
Metodika přípravy transgenní myši.
Reslová, Gabriela ; Komrsková, Kateřina (vedoucí práce) ; Pěknicová, Jana (oponent)
Souhrn Práce se zabývá problematikou přípravy transgenních myší a srovnáním jednotlivých metodologických postupů z hlediska efektivity a vhodnosti aplikace pro výzkumné účely. Techniky pro přenos genových konstruktů zahrnují preferovanou mikroinjekci DNA do pronuklea oplodněného vajíčka. Jakož i možnosti spojené s využitím spermií, jež přenášejí zabudovaný genový konstrukt do oocytu při in vitro oplození, nebo za využití retrovirových vektorů, kterými jsou oocyty infikovány. Přenos jader somatických buněk do enukleovaných oocytů, využití embryonálních kmenových buněk, které jsou vnášeny do cizích zárodků či transgeneze pomocí liposomů jsou techniky prozatím používané okrajově z důvodu nutnosti hlubšího probádání. V další části seznamuje práce čtenáře s jednotlivými kroky, jež je nutné provést pro úspěšnost transgeneze. Předmětem zájmu je zde ovariální stimulace nutná pro získání dostatečného množství oocytů, ale také jako příprava pro embryo transfer, jakož i kapacitace spermií, která je zásadní pro in vitro oplození. Práce se rovněž zabývá zpětnou analýzou potvrzení pozitivity exprese transgenu pomocí genotypizace potomků a křížením pozitivních transgenů a srovnává výhody a nevýhody získání homozygotní transgenní linie. Klíčová slova: Transgenní myš, perinukleární injekce, ovariální stimulace, kapacitace,...
|
|
Rostlinné alkaloidy a jejich vliv na enzymy metabolisující xenobiotika
Višněvská, Kateřina ; Stiborová, Marie (vedoucí práce) ; Černá, Věra (oponent)
Sanguinarin a chelerythrin jsou benzo[c]fenanthridinové alkaloidy. Prvním krokem metabolismu sanguinarinu je jeho redukce za vzniku dihydrosanguinarinu. Antimikrobiální a protizánětlivé účinky jsou využívány ve stomatologii a jako aditiva v krmivu zvířat. Sanguinarin i chelerythrin indukuje apoptózu buněk. Schopnost fluorescence alkaloidu a interkalace do DNA má potenciální využití ve značení DNA supravitálními sondami. Mezi negativní účinky sanguinarinu a chelerythrinu patří jejich genotoxicita. V metabolismu ellipticinu hrají základní roli cytochromy P450 a peroxidasy. Ellipticin je potenciální agens pro léčbu rakoviny s vícenásobným mechanismem působení. Ellipticin interkaluje do DNA a inhibuje topoisomerasu II. Po aktivaci ellipticinu CYP a peroxidasami tvoří s DNA kovalentní adukty. Antitumorová aktivita ellipticinu a jeho derivátů se také vyznačuje kombinací mechanismů zastavení buněčného cyklu a indukcí apoptózy. Farmakologický účinek a genotoxický vedlejší účinek je modulován cytochromy P450 a peroxidasami v cílové tkáni. Majoritní metabolity biotranformace aristolochových kyselin jsou aristolaktamy. Nitroredukce aristolochových kyselin je stěžejním krokem vzniku aktivního metabolitu N- hydroxyaristolaktamu. Aristolochové kyseliny vykazují nefrotoxické a kancerogenní účinky. Nefropatie...
|
|
Vývoj protokolu pro transientní transfekci buněčné linie HEK293 EBNA1
Šmíd, Jiří ; Španová, Alena (oponent) ; Ševčík, Mojmír (vedoucí práce)
Rekombinantní proteiny patří mezi důležité biofarmaceutické produkty používané v biomedicínském výzkumu a při léčbě lidských nemocí. Rekombinantní proteiny lze produkovat ve velkém množství stabilní transfekcí nebo rychlejší cestou přechodné transfekce s menšímy výtěžky. Pro zajištění správné biologické aktivity musí protein být náležitě poskládán a posttranslačně modifikován. Jelikož může být těchto modifikací dosaženo pouze expresí v savčích buňkách, staly se hlavním hostitelem expresí komplexních rekombinantních proteinů. V této diplomové práci je popsána přechodná transfekce buněk HEK 293 EBNA1 za použití lineárních polyethyleniminů (PEI). Tyto buňky byly předem adaptované na suspenzní kultivaci v médiu bez séra. Buňky byly transfekovány plasmidy pcDNA3.1, pCI, pEBSV1, pCEP4, pEAK8 a pcDNA5/FRT/TO, všechny nesly reporterový gen SEAP. K porovnání účinností jednotlivých transfekcí byly měřeny koncentrace exprimované alkalické fosfatázy (SEAP) v buněčném supernatantu. Dalším faktorem, který byl optimalizován, byl použitý poměr DNA:PEI; rovněž byly vzájemně srovnány účinnosti transfekcí při použití dvou různých polyethyleniminů. Nejvyšší dosažená exprese byla 50 mg/l SEAPu při transfekci ve 24 jamkových deskách za poměru DNA:PEI 1:5. Při porovnání všech šesti plasmidů měl nejvyšší expresi plasmid pCEP4/SEAP a to i při převedení transfekčního systému do většího objemu.
|
|
Posílení účinku DNA vakcíny proti karcinomu děložního hrdla pomocnými epitopy
Peřinová, Lucie ; Brábek, Jan (oponent) ; Šmahel, Michal (vedoucí práce)
Původci rakoviny děložního hrdla jsou viry ze skupiny lidských papillomavirů (HPV). Na transformaci infikované buňky v buňku nádorovou se nejvíce podílejí jejich onkoproteiny E6 a E7, a proto se právě na ně zaměřuje vývoj terapeutických DNA vakcín. Pro posílení jejich účinnosti se pracuje na definování pomocných epitopů aktivujících CD4+ T buňky, které se podílejí na navýšení počtu efektorových cytotoxických T lymfocytů a tedy i eliminaci nádoru. Pro celkové posílení imunitní odpovědi se již využívají epitopy pocházející přímo z onkoproteinů, syntetické epitopy, případně bakteriální epitopy nespecificky aktivující imunitní reakce. Prozatím nebylo provedeno dostatečné množství srovnávacích prací, které by určily jednoznačně nejefektivnější pomocné epitopy. Vývoj se spíše ubírá směrem ke kombinaci více variant za využití imunostimulačních molekul.
|
| |
host ::
