|
|
Critical factors affecting pathogen development in sand flies
Jančářová, Magdaléna ; Volf, Petr (vedoucí práce) ; Ratinier, Maxime (oponent) ; Bilej, Martin (oponent)
Tato práce se zabývá bariérami a kritickými faktory při vývoji virů, leishmanií a gregarin během vývoje ve flebotomovi. Nejdříve jsme se zaměřili na vývojový cyklus virů přenášených flebotomy, jelikož dodnes není jasné, jak tyto viry dokážou kolovat v přírodě. Pro studium této problematiky jsme si zvolili Massilia virus (MASV), který je blízce příbuzný Toscana viru, hlavnímu původci meningitidy v Mediteránu během letních měsíců. Zkoušeli jsme různé způsoby nákazy Massilia virem u různých vývojových stádií flebotoma druhu Phlebotomus pernicisous a to infekci: (i) prvního a čtvrtého larválního instaru z larvální potravy, (ii) samic krví a (iii) obou pohlaví cukrem. Infekce larev z potravy a následný transstadiální přenos MASV na dospělce byl neefektivní; celkem se z larev vyvinulo 875 dospělců a pouze tři z nich byli MASV pozitivní. Po nákaze samic z krve jsme sice na počátku získali vysoké procento infikovaných jedinců, nicméně po defekaci došlo k eliminaci infekce a počet infikovaných samic poklesl na 5 z 27. Jako nejúčinnější způsob infekce MASV jsme prokázali nákazu z cukru; 72 % samic (88 ze 122) a 51 % samců (58 ze 113) bylo MASV pozitivní. Navíc, takto infikovaní flebotomové kontaminovali virem cukr, který díky tomu sloužil jako zdroj nákazy pro naivní jedince během následujících 24 hodin;...
|
|
|
Koinfekce leishmanií a gregarin u flebotomů
Jančářová, Magdaléna ; Volf, Petr (vedoucí práce) ; Bilej, Martin (oponent)
Tato diplomová práce se skládá ze dvou vzájemně navazujících částí. První část se zabývá vlivem gregariny Psychodiella sergenti na náchylnost flebotoma Phlebotomus sergenti vůči experimentální nákaze Leishmania tropica. Při srovnání turecké kolonie P. sergenti infikované gregarinou a izraelské kolonie bez gregarin jsme u turecké kolonie prokázali signifikantně vyšší intenzitu infekce L. tropica druhý a desátý den po infekčním sání a rychlejší kolonizaci stomodeální valvy promastigoty. Tyto rozdíly však zřejmě nejsou způsobeny gregarinou, ale vnitrodruhovou variabilitou P. sergenti nebo rozdílným složením střevní mikroflory u obou kolonií. U dvou kolonií P. sergenti původem z Izraele (jedna infikovaná gregarinami, druhá nikoli) jsme žádný signifikantní rozdíl nezaznamenali; kolonie se nelišily v procentu infikovaných samic, intenzitě infekce ani v lokalizaci promastigotů L. tropica. V druhé části mé diplomové práce byly pomocí degenerovaných primerů navržených na základě sekvencí imunitních molekul z Phlebotomus papatasi a Lutzomyia longipalpis a následného klonování produktů pomocí pGEM®-T Easy Vector Systems získány sekvence čtyř imunitních molekul P. sergenti: cekropinu, serpinu, TEPu (thiolesther containing proteins) a PGRP - LB (peptidoglycan recognition protein). Pomocí qPCR byla měřena...
|
|
| |
|
|
Molekulárna charakterizácia vybraných obranných faktorov v čeľadi Lumbricidae
Mančíková, Veronika ; Bilej, Martin (vedoucí práce) ; Král, Jiří (oponent)
Dáždovky patriace medzi máloštetinavce sú modelom porovnávacej imunológie už viac ako 40 rokov. Sú schopné efektívne rozpoznať a reagovať na nevlastné látky vďaka rôznym obranným mechanizmom, medzi ktoré sa zahrňujú aj molekuly s mnohými biologickými aktivitami zahrňujúcimi cytolytické, antimikróbne a proteolytické. Táto práca je zameraná na porovnanie imunologických vlastností dvoch blízkych druhov dážďoviek Eisenia andrei a Eisenia fetida. Vďaka mnohým podobnostiam medzi ich morfológiou a životnými cyklami boli až donedávna považované za členov poddruhu. Zaujímavým však je, že sa ich prirodzené prostredia života od seba veľmi líšia, a preto bolo veľmi zaujímavé skúmať aký vplyv majú rozdiely v prostredí na vlastnosti prirodzenej imunity oboch druhov. Kľúčové slová: dážďovky, prirodzená imunita, Eisenia andrei, Eisenia fetida, CCF, fetidín, lysenín, lyzozým
|
|
|
Antigenic and enzymatic properties of sand fly saliva
Hostomská, Jitka ; Volf, Petr (vedoucí práce) ; Salát, Jiří (oponent) ; Bilej, Martin (oponent)
i SUMMARY OF RESULTS The thesissumsup the resultsof threeprojectsI was involvedin duringmy PhD study.Specifically, I adressedthe putativeeffect of sand fly salivary hyaluronidaseon transmissionandestablishmentof kishmania infection.The secondprojectwasdealingwith thekineticsof anti-salivaantibodyresponsein dogsexposedto Lutzomyialongipalpissutd flies andwith the characterizationof salivaryantigensrecognizedby thesedogs.Finally, I constructedand annotateda cDNA library from Phlebotomusarabicas and characterized P. arabicus sďivary antigensreactingwith arrtibodiesof mice exposedto this sand fly species.Theresultsofthe projectsaÍebrieflyoutlinedhere. We detectedhyaluronidaseactivity in saliva of various bloodsuckingDipter4 includingsandflies. In coinoculationexperimentswith BALB/o mice we proveda positive conelationbetweenthe size of the cutaneouslesion causedby Leishmaniamajor andthe presenceofhyaluronidasein theinfectiveinoculum.In hyďuronidase-coinoculatedmice,the lesionsweresigniÍicantlylargerfromweek3 postinfection(infectiondosel05 parasites)or week 4 (infection dose 10"). On the other hand, hyaluronidasedid not affect early viscerďizationof L. majorat24 hrspostinfection.Thus,we demonstratedthathya|uronidase promotes Leishmania establishment in murine skin and we hypothesize that immunomodulatoryeffectsof...
|
|
| |
|
| |
|
|
Molecular mechanisms of regulation of FcɛRI signaling in mast cells
Bambousková, Monika ; Dráber, Petr (vedoucí práce) ; Černý, Jan (oponent) ; Bilej, Martin (oponent)
SOUHRN Žírné buňky tvoří důležitou součást imunitního systému. Při patologických situacích jsou aktivovány a jsou zodpovědné za alergické reakce. Detailní poznání molekulárních mechanismů vedoucích k jejich aktivaci je proto důležité zejména pro vývoj nových postupů v léčbě alergických reakcí. Nejdůležitějším transmembránovým receptorem žírných buněk je vysokoafinitní Fc receptor pro IgE (FcεRI). FcεRI váže IgE na plasmatické membráně. Po prokřížení polyvalentním antigenem, imunoreceptorové tyrosinové aktivační motivy (ITAM) v intracelularní části receptrou jsou fosforylovány a spouští se signální dráha vedoucí k buněčné aktivaci. Signalizace přes FcεRI po vazbě antigenu je kriticky závislá na interakci s intracelularními protein-tyrosinovými kinasami, které zprostředkovávají fosforylaci ITAM motivů, a zároveň na mnoha dalších komponentách signalizační dráhy. Tato práce byla soustředěna na studium signalizačních procesů vedoucích k aktivaci žírných buněk na několika různých úrovních s důrazem na rané fáze signalizace přes FcεRI. Nejprve jsme se zaměřili na roli protein-tyrosinových fosfatas (PTP) při inicializaci fosforylace FcεRI. Podařilo se nám ukázat, že aktivace FcεRI antigenem vede k oxidaci tyrosinu v aktivním místě PTP a tudíž k jejich inhibici. Topografie inaktivních PTP na plasmatické membráně...
|
|
|
Vývoj leishmanií v hmyzím přenašeči rodu Phlebotomus
Kvapilová, Kateřina ; Volf, Petr (vedoucí práce) ; Bilej, Martin (oponent)
Práce byla zaměřena na studium různých aspektů vývoje leishmanií v přenašečích rodu Phlebotomus a lze ji rozdělit na dvě hlavní části. V prvé části jsme pomocí experimentálních koinfekcí fluorescenčně značenými promastigoty Leishmania major a L. turanica studovali kompetici těchto dvou druhů při vývoji ve flebotomech, kteří jsou přirozenými přenašeči L. major. Zatímco ve střevě Phlebotomus papatasi se obě leishmanie vyvíjely obdobným způsobem, u P. duboscqi převládla v pozdních stádiích infekce L. turanica. Fluorescenční značení nám zároveň mělo umožnit studovat případnou genetickou výměnu mezi druhy leishmanií v různých stádiích infekce (2., 9. a 14. den po infekčním sání). Metodou FACS byly v homogenátech střev koinfikovaných flebotomů opakovaně identifikovány desítky objektů emitujících červený i zelený signál, avšak následná kontrola konfokálním mikroskopem vyloučila možnost, že jsou to hybridní promastigoti leishmanií. Ve druhé části práce jsme u L. major zkoumali roli genů HASP a SHERP, které leží na lokusu LmcDNA16 a jsou exprimovány výhradně u metacyklů. Používali jsme mutantní linie KO (postrádající celý lokus LmcDNA16) a HASPB (KO linie se zpět vloženým genem HASPB) a jejich vývoj v přenašeči a metacyklogenezi jsme porovnávali s kontrolní linií FVI. Důležitým cílem bylo též zjistit, zda...
|
|
|
The immune response of naïve mice infected with the neuropathogenic schistosome Trichobilharzia regenti
Macháček, Tomáš ; Horák, Petr (vedoucí práce) ; Bilej, Martin (oponent) ; Schabussova, Irma (oponent)
Helmintární neuroinfekce představují závažný zdravotní problém, ale mechanismy hostitelovy imunitní odpovědi často zůstávají opomíjeny, i když se mohou účastnit patogeneze. To je zčásti způsobeno nedostupností klinických vzorků, ale také nedostatkem vhodných laboratorních modelů. V této práci jsem se proto zaměřil na studium vybraných aspektů imunitní odpovědi myší nakažených neuropatogenní ptačí schistosomou Trichobilharzia regenti. Většina schistosomul je u těchto náhodných hostitelů zastavena a eliminována časně po perkutánní infekci ihned v kůži. Není však jasné, jaké parazitární antigeny protektivní imunitní reakci spouštějí. Naše in vitro experimenty odhalily, že katepsin B2, cysteinová peptidáza používaná parazitem k penetraci kůže, aktivuje dendritické buňky odvozené z kostní dřeně mnohem více než kompletní parazitární homogenát. To naznačuje její úlohu ve spouštění počáteční imunitní odpovědi, která je polarizována směrem k typu 1/2. Některá schistosomula jsou však schopna kůži opustit a migrují dále do míchy. S využitím 3D zobrazovacích technik, ultramikroskopie a mikro-CT, jsme prokázali jejich preferenční lokalizaci v bílé hmotě. Přítomnost schistosomul v míše vyvolává výraznou hypertrofii astrocytů a mikroglií. Živá schistosomula u astrocytů indukují produkci interleukinu 6, jejich...
|
host ::
RSS.