|
|
Komunikace mezi signálními systémy opioidních a TLR4 receptorů
Hrdličková, Daniela ; Drastichová, Zdeňka (vedoucí práce) ; Březina, Jiří (oponent)
Opioidy se v klinické praxi využívají k léčbě akutní a chronické bolesti. Stereoselektivně se váží na opioidní receptory (OR) a aktivují signální kaskádu přes inhibiční Gi/o-proteiny, zprostředkující analgetický efekt. Jejich užívání ale provází mnoho nežádoucích účinků, jako je rozvoj závislosti, analgetické tolerance, alodynie, hyperalgezie, zácpa a periferní imunosuprese. Nedávné studie odhalily, že opioidy mohou také nestereoselektivně působit na receptor vrozené imunity pro rozpoznávání lipopolysacharidu (LPS), receptor 4 podobný Toll (TLR4). Ukazuje se, že některé z těchto účinků mohou být následkem právě této interakce. Ta indukuje expresi prozánětlivých mediátorů v centrální nervové soustavě (NS), za přítomnosti infekčního agens však může zánět naopak tlumit. Komunikace mezi receptorovými systémy OR a TLR4 probíhá na několika úrovních. Pochopení jednotlivých mechanismů by znamenalo velký přínos pro vývoj nových terapeutických strategií v opioidní analgetické léčbě, které by minimalizovaly její nežádoucí účinky, dále by mohlo dojít k využití protizánětlivého potenciálu opioidů. Klíčová slova: Opioidy, receptor 4 podobný Toll, buněčná signalizace, zánět, lipopolysacharid, cytokiny
|
|
|
Toxické produkty sinic se zaměřením na endotoxiny
Eršilová, Kateřina ; Načeradská, Jana (vedoucí práce) ; Semerád, Jaroslav (oponent)
Cyanotoxiny jsou toxické produkty sinic způsobující problémy (např. u lidí se mohou objevit nepřiznivé zdravotní účinky) hlavně při jejich přemnožení. Mezi tyto cyanotoxiny se řadí skupina endotoxinů, v níž jsou zahrnuty lipopolysacharidy. Na základě literární rešerše bylo zjištěno, že struktura těchto sloučenin se skládá ze tří chemických částí, z Lipidu A, centrálního oligosacharidu a O-Antigenu. Struktura pro všechny druhy sinic není stejná a vykazuje značné rozdíly. Co se týče toxicity lipopolysacharidů, tak ta se jeví vyšší u gramnegativních bakterií než u sinic. Práce v kapitole 4.1 o toxicitě uvádí, že microcystiny v toxicitě pro Daphnia nehrají zásadní roli a toxické budou jiné látky ze sinic a současně nevylučuje lipopolysacharidy. Naopak kapitola 6 uvádí, že lipopolysacharidy z Microcystis nejsou látky toxické pro Daphnia, a že za toxicitou budou ještě jiné látky. Práce se dále domnívá, že ve vodních květech spolupůsobí velké množství toxických látek, tedy ve vodních květech působí synergetické efekty, proto toxicita kultur kultivovaných v laboratořích je nižší ve srovnání s toxicitou přírodních sinicových květů. Vodní květy obsahují mnoho různých organismů, včetně gramnegativních bakterií, jejichž LPS patrně přispívají k vysoké pyrogenitě LPS izolovaných z vodních květů. Současně se...
|
|
|
Metody dekontaminace rekombinantních proteinů od bakteriálního lipopolysacharidu
CHARVÁTOVÁ, Lucie
V této práci byly použity tři metody dekontaminace rekombinantních proteinů od bakteriálního lipopolysacharidu s cílem zjistit, jaká metoda je nejefektivnější. Metody byly založené na dvoufázové extrakci na bázi detergentu a afinitní chromatografii. Efektivita nejúčinnější metody byla dále měřena za použití různých rekombinantních proteinů a při několika různých koncentracích proteinů. Tři různé testy, dva chromogenní a jeden fluorogenní, byly použity pro měření koncentrace endotoxinu ve vzorcích a byla vybrána nejpřesnější metoda pro měření koncentrace endotoxinu ve vzorcích.
|
|
|
Regulace exprese proteinů nespecifické imunity u Caenorhabditis elegans.
Kaštánková, Iva ; Kostrouch, Zdeněk (vedoucí práce) ; Cmarko, Dušan (oponent)
5 Abstrakt Lipopolysacharidy, molekuly tvořené lipidy s kovalentně navázanými sacharidy, jsou charakteristickou složkou buněčné stěny gramnegativních bakterií. Je přičinou těžkých septických stavů u člověka a tím i komplikací v humánní medicíně Lipopolysacharid je konstantní součástí infekce gramnegativních bakterií, proto předpokládáme evolučně zachovalou nespecifickou imunitní odpověď a ochrany. Otázkou je, zda existuje tato imunitní odpověď u modelového organismu Caenorhabditis elegans. Pokud ano, jakým mechanismem je řízena a regulována. Mnohobuněčnému organismu Caenorhabditis elegans jsme podali lipopolysacharid bakterie Pseudomonas aeruginosa 10 v kombinaci s bakteriemi Escherichia coli. Pozorovali jsme vliv lipopolysacharidu na expresi vybraných genů. Dále jsme sledovali metabolismus a vývoj organismu. Prokázali jsme vliv lipopolysacharidu na expresi genů z rodin C-typy lecitinů, clec-60 a clec-71, dále na lys-5, hsp-60 a F44G.3.2.1. Po inkubaci Caenorhabditis elegans na komponentách lipopolysacharidu jsme zjistili regulaci těchto vybraných genů hydrofobní lipidní složkou lipopolysacharidu, lipidem A. Překvapivě regulaci sacharidovými složkami, glukosou a galaktosou jsme neprokázali. Změnil se metabolismus lipidů. Prokázali jsme snížení neutrálních tuků a změny v zastoupení některých mastných...
|
|
|
Some aspects of molecular mechanisms of xenobiotics' hepatotoxicity and hepatoprotection : Modulatory roles of natural polyphenols
Lekic, Nataša ; Farghali, Hassan (vedoucí práce) ; Kršiak, Miloslav (oponent) ; Brůha, Radan (oponent)
SOUHRN Zdůvodnění a cíle: Oxidační stres a apoptóza jsou navrhovanými mechanismy buněčného poškození v studiích hepatotoxicity vyvolané cizorodými látkami. Cílem této práce bylo nalézt časné signální markery jaterního poškození cizorodými látkami soustředěním na vybrané antioxidační/oxidační a apoptotické geny. Cílem mé práce dále bylo oslovit vztah mezi obvyklými markery jaterní dysfunkce a mRNA a proteinovou expresí v modelech hepatotoxicity s D-galaktozamin/lipopolysacharidem a tertbutylhydroperoxidem. Kromě toho, byly vyhodnocené hepatoprotekční možnosti antioxidačních polyfenolů quercetinu a kurkuminu v souvislosti s jejich modulacemi oxidačního stresu a apoptotických parametrů v stanovených modelech hapatoxicity způsobené cizorodými látkami. Metody: Biochemické markery zkoumající jaterní funkce zahrnují aminotransferázy a bilirubin. Pomocí 'real-time PCR' byly analyzovány mRNA exprese inducibilní syntázy oxidu dusnatého (NOS-2), hemoxygenázy-1 (HO-1), superoxiddismutázy (SOD-1), glutathionperoxidázy (Gpx-1), kaspázy 3 (Casp3), BH3 interacting domain death agonist (Bid) and Bcl-2 -associated X protein (Bax), a tumor necrosis factor α (TNF- α)mRNAs. Proteinové exprese HO-1 a NOS-2 byly stanoveny pomocí metody Western blot. Morfometrické hodnocení hepatocytů použitím světelného mikroskopu bylo uděláno na...
|
|
|
Poruchy paměti a kognitivní koordinace u potkaních modelů neuropsychiatrických onemocnění
Vojtěchová, Iveta ; Stuchlík, Aleš (vedoucí práce) ; Syka, Josef (oponent) ; Hort, Jakub (oponent)
Paměť a prostorová navigace jsou pro člověka nesmírně důležité mozkové funkce a pro zvířata jsou často otázkou života a smrti. U lidí bývají poškozeny při různých neuropsychiatrických onemocněních. Pacienti trpící Alzheimerovou demencí (AD) mají narušenou pracovní i dlouhodobou paměť, navigaci v prostoru i vyšší kognitivní funkce či sociální paměť. Mezi symptomy schizofrenie patří deficit kognitivní koordinace (schopnosti rozlišit relevantnost přicházejících informací) a dezorientace. Intelektuální nedostatečnost zase postihuje některé pacienty s poruchou autistického spektra. Tato onemocnění však neumíme léčit, protože ve většině případů neznáme jejich příčiny. K pochopení jejich etiologie nám mohou pomoci kvalitní animální modely. Tato dizertační práce se věnuje charakterizaci rozsahu poškození zejména kognitivních funkcí - ale dotýká se i ostatních změn chování - u vybraných potkaních modelů AD (transgenní potkan McGill, netransgenní potkan Samaritan) a schizofrenie (časně postnatální a prenatální aplikace lipopolysacharidu simulující bakteriální infekci). Práce diskutuje také validitu uvedených modelů a jejich limity. Výsledky potvrdily u obou modelů AD závažný deficit prostorové navigace, učení a kognitivní koordinace. U potkanů McGill jsme navíc pozorovali poškozenou motorickou koordinaci a...
|
|
|
Exprese enzymů kynureninové a methoxyindolové dráhy v epifýze, játrech a srdci potkana v cirkadiánním profilu a po aplikaci lipopolysacharidu
Hrubcová, Leona ; Bendová, Zdeňka (vedoucí práce) ; Svobodová, Irena (oponent)
Tryptofan je aminokyselina, která má v těle mnoho funkcí. Kromě účasti na produkci proteinů Kynureninová dráha končí produkcí otřeba pro buněčnou energetickou produkci. Při zvýšené poptávce po energii, např. během aktivace imunitního systému je tedy aktivita kynureninové dráhy zvýšena. Při zvýšené aktivitě produkuje chinolinová. Tyto metabolity se účastní mnoha procesů v těle a ovlivňují patologii mnoha onemocnění. Studie ukazují, že regulace hladiny těchto metabolitů by mohla být klíčová inovaci léčby egenerativních onemocnění Methoxyindolová dráha je další důležitá dráha zpracovávající tryptofan. Její nejznámější metabolity jsou serotonin, který působí jako neurotransmiter, a melatonin, imunomodulačními účinky r Tato práce se zabývá cirkadiánní rytmicitou exprese enzymů těchto dvou metabolických drah. Také popisuje účinek systémového podání endotoxinu lipopolysacharidu genů těchto enzymů. Naše pokusy využívaly potkany kmene Wistar ve stáří 30 dnů. Lipopolysacharid byl podán experimentální skupině čtyři hodiny před zhasnutím a odběry byly prováděny během 24 hodin ve tříhodinových intervalech. Pro účely ater a srdcí. Míra exprese měřených genů byla stanovena metodou RT Výsledky této práce potvrdily přítomnost cirkadiánního rytmu některých genů játrech a změny v expresi genů kynureninové dráhy a...
|
|
|
Studium oxidačního poškození na modelu hepatocytu potkana
Hauptmanová, Gabriela ; Hodek, Petr (vedoucí práce) ; Černá, Věra (oponent)
Míra oxidačního poškození vlivem reaktivních forem kyslíku a dusíku je měřena velmi často v buňkách in vitro. K tomuto účelu složí např. fluorescenční sondy. Jsou to látky, které reagují s určitými druhy reaktivních forem za emise fluorescenčního záření. V buňkách lze pozorovat také poškození DNA, lipidů či proteinů. K tomuto účelu bylo vyvinuto mnoho technik, z nichž ovšem většina neposkytuje jednoznačně objektivní výsledky. Měření bývají zatížena množstvím interferencí. Techniky jsou často selektivní pouze pro určité typy molekul a výsledky tedy neodpovídají celkové míře oxidačního poškození. Tématem této bakalářské práce je optimalizace vybraných technik pro měření míry oxidačního poškození. Konkrétně stanovení malondialdehydu a měření množství reaktivních forem kyslíku a dusíku pomocí fluorescenčních sond DCFDA a DHR. Jako experimentální systém pro měření oxidačního stresu byly zvoleny primární potkaní hepatocyty. Zvolené techniky se podařilo optimalizovat a mohou být dále využity pro studium antioxidačních vlastností přírodních flavonoidních sloučenin v modelovém organismu potkana. Klíčová slova fluorescence, sonda, peroxidace lipidu, lipopolysacharid, ethanol
|
|
|
Vliv endotoxinu lipopolysacharidu na cirkadiánní systém
Štěrbová, Petra ; Bendová, Zdeňka (vedoucí práce) ; Svobodová, Irena (oponent)
Biologické hodiny jsou zodpovědné za řízení cirkadiánních rytmů v řadě fyziologických a behaviorálních funkcí, včetně aktivity imunitního systému. U savců jsou tyto hodiny uloženy v suprachiasmatických jádrech hypothalamu a vyskytují se také na periferii. Hlavní oscilátor v SCN synchronizuje fáze periferních oscilátorů v tkáních a jiných částech mozku, a řídí také syntézu melatoninu v epifýze. Jeho vnitřní perioda Tau (τ) je v přirozených podmínkách synchonizována s vnějším 24hodinovým dnem, zejména střídáním světla a tmy během dne a noci, ale také nesvětelnými stimuly. Narušení přirozených vnitřních podmínek organismu podáním endotoxinu způsobuje aktivaci imunitní odpovědi, behaviorální změny a fázové změny cirkadiánních rytmů. Tato práce zkoumá vliv akutně podaného endotoxinu lipopolysacharidu na buněčné signální kaskády v buňkách suprachiasmatických jader a epifýzy. Naše výsledky ukazují, že hladiny fosforylovaných forem kináz GSK3β, a ERK1/2, a hladiny fosforylovaných forem transkripčních faktorů STAT3 jsou po podání LPS výrazně modifikovány jak v suprachiasmatických jádrech, tak zejména v epifýze potkana. Powered by TCPDF (www.tcpdf.org)
|
|
|
Some aspects of molecular mechanisms of xenobiotics' hepatotoxicity and hepatoprotection : Modulatory roles of natural polyphenols
Lekic, Nataša ; Farghali, Hassan (vedoucí práce) ; Kršiak, Miloslav (oponent) ; Brůha, Radan (oponent)
SOUHRN Zdůvodnění a cíle: Oxidační stres a apoptóza jsou navrhovanými mechanismy buněčného poškození v studiích hepatotoxicity vyvolané cizorodými látkami. Cílem této práce bylo nalézt časné signální markery jaterního poškození cizorodými látkami soustředěním na vybrané antioxidační/oxidační a apoptotické geny. Cílem mé práce dále bylo oslovit vztah mezi obvyklými markery jaterní dysfunkce a mRNA a proteinovou expresí v modelech hepatotoxicity s D-galaktozamin/lipopolysacharidem a tertbutylhydroperoxidem. Kromě toho, byly vyhodnocené hepatoprotekční možnosti antioxidačních polyfenolů quercetinu a kurkuminu v souvislosti s jejich modulacemi oxidačního stresu a apoptotických parametrů v stanovených modelech hapatoxicity způsobené cizorodými látkami. Metody: Biochemické markery zkoumající jaterní funkce zahrnují aminotransferázy a bilirubin. Pomocí 'real-time PCR' byly analyzovány mRNA exprese inducibilní syntázy oxidu dusnatého (NOS-2), hemoxygenázy-1 (HO-1), superoxiddismutázy (SOD-1), glutathionperoxidázy (Gpx-1), kaspázy 3 (Casp3), BH3 interacting domain death agonist (Bid) and Bcl-2 -associated X protein (Bax), a tumor necrosis factor α (TNF- α)mRNAs. Proteinové exprese HO-1 a NOS-2 byly stanoveny pomocí metody Western blot. Morfometrické hodnocení hepatocytů použitím světelného mikroskopu bylo uděláno na...
|
host ::
RSS.