|
|
Hledání selektivních antagonistů konstitutivního androstanového receptoru
Ondraszková, Karolína ; Smutný, Tomáš (vedoucí práce) ; Pourová, Jana (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Studentka: Karolína Ondraszková Školitel: PharmDr. Tomáš Smutný, Ph.D. Název diplomové práce: Hledání selektivních antagonistů konstitutivního androstanového receptoru Konstitutivní androstanový receptor (CAR) je významný, ligandem-řízený xenosenzor, který reguluje transkripci důležitých enzymů biotransformujících léčiva (např. CYP2B6). Pregnanový X receptor (PXR) spadá do stejné skupiny nukleárních receptorů jako CAR. Struktura a funkce obou receptorů vykazují mnohé společné rysy. PXR má ale větší a flexibilnější ligand-vázající doménu. V současné době není prakticky k dispozici selektivní, vysoce potentní a netoxický inhibitor CAR. Tato práce si klade za cíl určit afinitu dříve identifikovaných látek v naší skupině s antagonistickou aktivitou vůči CAR. Jde o replikační studii. Pro tyto účely jsme látky testovali pomocí gene reporter a two-hybrid assay. Ze všech testovaných látek jsme dosáhli nejlepšího výsledku s látkou 1A. Metodou gene reporter assay jsme zjistili, že substance 1A je schopna redukovat bazální expresi CAR, ale potlačuje také expresi CAR indukovanou pomocí modelového agonisty CITCO. Vysoká afinita látky k receptoru byla potvrzena pomocí two-hybrid assay. Látka navíc neovlivňuje...
|
|
|
Syntéza a hodnocení potenciálních léčiv neurodegenerativních chorob
Foltýnová, Eva ; Krátký, Martin (vedoucí práce) ; Vinšová, Jarmila (oponent)
Tématem této diplomové práce je syntéza derivátů oxadiazolu a jejich prekurzorů jako potenciálních léčiv neurodegenerativních chorob a jejich následné hodnocení především jako potenciálních inhibitorů cholinesteráz (CHE). Teoretická část této práce se věnuje Alzheimerově chorobě, především její patofyziologii, diagnostice a léčbě. Dále se zabývá také inhibitory CHE, které jsou již klinicky využívané, i novým strukturám s potenciálem mít v budoucnu klinické využití. Také se věnuje oxadiazolovému fragmentu, jeho chemickým i biologickým vlastnostem. V rámci experimentální práce byly nasyntetizovány deriváty 1,3,4- a 1,2,4-oxadiazolu, které se lišily kromě typu oxadiazolu také jejich substitucí. Tyto látky byly připravené pomocí cyklizace prekurzorů, které byly také připraveny a otestovány. U 1,3,4-oxadiazolů byla otestována kromě jejich inhibiční aktivity vůči acetylcholinesteráze (AChE) a butyrylcholinesteráze (BuChE) také jejich možná antimykobakteriální, antibakteriální a antifungální aktivita. U 1,2,4- oxadiazolů byla prozatím otestována pouze jejich inhibiční aktivita proti AChE a BuChE. Celkem bylo syntetizováno dvacet dva látek a výtěžky těchto syntéz byly v rozmezí 21-97 %. Látkou, která měla nejnižší hodnotu IC50 proAChE, byl 2-(3-nitrofenyl)-5-(pyridin-3-yl)-1,3,4- oxadiazol, konkrétně bylo...
|
|
|
Glykolytické enzymy a jejich inhibice v invazivitě nádorových buněk
Martinková, Eliška ; Peltanová, Barbora (vedoucí práce) ; Raudenská, Martina (oponent)
Glykolýza je zásadní metabolická dráha sloužící k získání energie z přijaté glukózy. Všech deset enzymů, které jsou součástí glykolytické dráhy, může být zapojeno do procesů ovlivňujících pohyb a schopnost nádorových buněk pronikat do okolních tkání, což úzce souvisí s tvorbou metastáz. Vzhledem k tomu, že úmrtí většiny pacientů s diagnostikovanými solidními nádory je způsobeno právě komplikacemi spojenými s metastázováním primárního nádoru, je studium tohoto fenoménu velmi aktuální. Úkolem této práce je shrnout poznatky o vztahu glykolytických enzymů a invazivity nádorových buněk. Jsou zde popsány různorodé role enzymů spojené s invazivitou, migrací a metastázováním nádorových buněk od vlivu na angiogenezi přes regulaci tvorby cytoskeletu a stabilizaci mRNA a proteinů až po ovlivňování různých signálních kaskád. Prostor je věnován nejen příslušným mechanismům na molekulární úrovni, ale také dosavadním výsledkům výzkumu zaměřeného na terapii. Práce rovněž přináší přehled vybraných inhibitorů glykolytických enzymů, které mají vliv na invazivitu nádorových buněk. Klíčová slova: invazivita, migrace, metastáze, glykolytické enzymy, inhibice, EMT, Warburgův efekt
|
|
|
Působení směsí potravinových doplňků na vybrané biotransformační enzymy
Kurshakova, Evgeniia ; Dračínská, Helena (vedoucí práce) ; Koblihová, Jitka (oponent)
Potravinové suplementy jsou celosvětově užívané produkty, které byly navrženy k doplnění stravy o dodatečné živiny. Obsahují široké spektrum biologicky aktivních látek: aminokyseliny, vitamíny, minerály, bylinné extrakty atd. Vzhledem k popularitě a nadměrné konzumaci potravinových suplementů roste nutnost výzkumu jejich možných vzájemných interakcí a vlivu na lidské zdraví. Určité potravinové suplementy jsou metabolizovány enzymy ze skupiny cytochromů P450, které hrají klíčovou roli v biotransformaci exogenních substrátů. Některé biologicky aktivní látky mohou zároveň ovlivňovat jejich aktivitu. Předkládaná diplomová práce byla věnována studiu vlivu několika nejpopulárnějších složek potravinových doplňků na cytochromy P450 3A4 a 1A1 vyskytující se v gastrointestinálním traktu. Byl zkoumán vliv kovových iontů Zn2+ a Mg2+ , askorbátu ze skupiny vitamínů a kurkuminu ze skupiny polyfenolů. Byl potvrzen silný inhibiční účinek kurkuminu na aktivitu obou zkoumaných isoforem in vitro. Reakce 6β-hydroxylace testosteronu katalyzovaná CYP3A4 byla přídavkem kurkuminu výrazně potlačena, stanovená hodnota IC50 činila 4,7 M. Bylo také pozorováno významné snížení rychlosti O-deethylace resorufinu potkaní a lidskou isoformou CYP1A1 (IC50 = 1,1 M, resp. 2,7 M). Inhibiční vliv byl pozorován i u askorbátu a...
|
|
|
Analysis of Thick Film Amperometrical Sensors Signal and Its Usage for Measurement and Characterization of Enzymes
Ondruch, Vít ; Kizek, René (oponent) ; Masojídek,, Jiří (oponent) ; Vrba, Radimír (vedoucí práce)
The principle of synchronous detection (SD) has been applied to biosensor measurement. SD principle achieves significant increases in the signal-to-noise ratio, limit of detection and overall measurement robustness. Application of SD in biosensor measurements improves the analysis of the response and avoids the influence of interference/noise produced by stirring, electromagnetic effects and influence of parasitic currents. SD also enables to decompose the signal to stimulation response and phenomena with long time of response and last but not least, to identify second-order phenomena in the signal. Linear statistical model was used to develop software for identification of the stimulation signal in the output current. SD was applied to the response signal of a Photosystem II complex (PSII) biosensor. PSII response to light stimulation follows first order kinetics. The inhibition kinetics of PSII has been studied. Kinetic constants of herbicide binding to PSII depend linearly on herbicide concentration and enable measurement of its concentration at low concentrations.
|
|
|
Inhibice nebezpečných látek v alumináto-silikátových systémech
Koplík, Jan ; Škvára, František (oponent) ; Rovnaníková, Pavla (oponent) ; Havlica, Jaromír (vedoucí práce)
Schopnost alumináto-silikátových systémů imobilizovat nebezpečné látky je zkoumána od 90. let 20. století. Cílem této práce je vyvinout alumináto-silikátový systém (matrici) se schopností inhibovat nebezpečné látky (těžké kovy) za použití sekundárních surovin. Schopnost matrice inhibovat těžké kovy byla stanovena na základě vyluhovacích testů založených na vyhlášce 294/2005 Sb. Koncentrace prvků ve výluzích byly stanoveny pomocí ICP-MS. Výsledný alumináto-silikátový systém se skládal z vysokoteplotního popílku a vysokopecní strusky aktivovaných pomocí směsi alkalických aktivátorů (hydroxid a vodní sklo). Vytvořené matrice byly charakterizovány pomocí vhodných analytických metod (XRD, SEM, FT-IR, DTA-TGA-EGA). Následně byl pomocí stejných metod popsán způsob, jakým se vybrané prvky (Ba, Cu, Pb) imobilizují v připravených systémech.
|
|
|
Tvorba biofilmu u probiotických kultur a možnosti jeho využití ve farmacii
Ryšávka, Petr ; Obruča, Stanislav (oponent) ; Vorlová, Lenka (oponent) ; Márová, Ivana (vedoucí práce)
Práce byla zaměřena na vývoj adhezivní formy probiotik ve formě biofilmu na kombinovaných nosičích s prebiotickou složkou, druhá část práce byla věnována vlivu potravin na množení a přežívání vybraných typů probiotických bakterií. Dále byl sledován vliv individualizované probiotické suplementace na změny střevního mikrobiomu člověka. V první části práce byly vybrány a otestovány vhodné adherentní probiotické kmeny pro tvorbu biofilmu. Podařilo se zavést metody a otestovat různé varianty nosičů pro kultivaci a navázání bakterií. In vitro experimenty ověřily stabilitu biofilmu a jeho odolnost vůči nízkému pH, žluči a antibiotikům ve srovnání s planktonní formou. Rovněž byl sledován antimikrobiální efekt probiotických kmenů ve formě biofilmu. Kultivace multidruhového biofilmu na kombinovaném nosiči byla optimalizována a zároveň byla potvrzena stabilita biofilmu a finální životnost probiotických bakterií. Ve druhé části práce byl hodnocen vliv různých potravin a nápojů na životaschopnost probiotických bakterií důrazem na simulaci průchodu gastrointestinálním traktem. Byly testovány jak modelové roztoky (různé koncentrace alkoholu, cukru, soli, bílkovin a různé pH) tak různé druhy skutečných potravin a nápojů. Vliv potravin a nápojů byl testován na monokulturách Lactobacillus acidophilus, Bifidobacterium breve a na probiotických kapslích obsahujících smíšenou kulturu probiotických mikroorganismů. Přežití probiotik v různých potravinových matricích v simulovaném prostředí gastrointestinálního traktu bylo kvantitativně odlišné. Podařilo se definovat potraviny vhodné pro podporu množení probiotických bakterií. Poslední část práce byla zaměřena na cílenou úpravu střevního mikrobiomu individualizovanými probiotiky, kterábyla připravena na základě molekulárně biologické analýzy střevního mikrobiomu zaměřené na detekci procentuálního zastoupení laktobacilů, bifidobakterií a kmenů Firmicutes a Bacteroidetes. Personifikovaná probiotická suplementace potvrdila pozitivní efekt tohoto přístupu na změny mikrobiomu zejména na zvýšení obsahu laktobacilů, bifidobakterií a celkové diverzity mikrobiomu.
|
|
|
Vyluhovatelnost Ba a Cr z alkalicky aktivovaných matric
Cába, Vladislav ; Hajzler, Jan (oponent) ; Koplík, Jan (vedoucí práce)
Cílem této práce je zjištění použitelnosti alkalicky aktivovaných matric z popílků k inhibici barya a chromu. Popílky, jak fluidní, tak vysokoteplotní, byly porovnány s klasickým cementem používaným k inhibici. Pomocí atomového emisního spektrometru s indukčně vázaným plazmatem byly zjištěny koncentrace barya a chromu ve výluzích na základě normy ČSN EN – 12457-4. Dále pro zjištění struktury byly pořízeny snímky na rastrovacím elektronovém mikroskopu. Také byla pořízena krystalografická spektra z rentgenové krystalografie. Z výsledků vyplývá, že fluidní popílky jsou vhodné pro inhibici barya a chromu, zatímco vysokoteplotní nedokáží s takovou úspěšností udržet dané prvky.
|
|
|
Fixace olova v alkalicky aktivovaných materiálech na bázi různých typů popílků
Cába, Vladislav ; Kalina, Lukáš (oponent) ; Koplík, Jan (vedoucí práce)
Cílem této práce bylo vyvinout alkalicky aktivovanou matrici založenou hlavně na popílcích, dále zjistit schopnost fixovat olovo u těchto matric, zjistit dopad přidávaného olova na mechanické vlastnosti a odhalit způsob fixace olova v těchto matricích. Matrice byly tvořeny hlavně popílky (čtyři fluidní popílky, jeden vysokoteplotní) s příměsí vysokopecní strusky a sodným vodním sklem jako aktivátorem. Byly připraveny výluhy na základě normy ČSN EN – 12457-4, koncentrace olova v nich byla měřeny pomocí atomového emisního spektrometru s indukčně vázaným plazmatem. Po 28 dnech byly měřeny pevnosti vzorků. Pro zjištění struktury byly pořízeny snímky, prvkové mapy a prvková spektra pomocí rastrovacího elektronového mikroskopu s elektronově disperzním spektrometrem, dále byla naměřena spektra na infračerveném spektrometru s Furierovou transformací, byla použita rentgenová difrakční analýza a elektronová spektroskopie pro chemickou analýzu. Z jednotlivých měření vyplývá, že olovo je kumulováno ve formě hydroxidu. Dopad dopování olova k matrici na pevnost byl u jednotlivých vzorků různý. Matrice jak z fluidních popílků, tak z vysokoteplotního popílků, uvolňovaly do výluhů minimální množství olova, tudíž by bylo možné je využívat k fixaci olova.
|
|
|
Inhibice vývoje vodíku v hlinitofosfátových žárovzdorných pojivech
Bednárek, Jan ; Kalina, Lukáš (oponent) ; Šoukal, František (vedoucí práce)
Práce se zabývá možnostmi inhibice reakce hlinitofosfátových pojiv s otěrovým železem, obsaženým v bauxitu, se kterým pojiva tvoří chemicky vázané žáruvzdorné hmoty. Při této reakci vzniká vodík, což se negativně projevuje napěněním takto připravených směsí. Množství vznikajícího vodíku bylo zjišťováno měřením na vápnoměru dle Janka, dále byl potenciometricky měřen průběh redoxního potenciálu v pojivu před a po přimíchání kameniva. V rámci práce byl zjišťován vliv přídavku různých kationtů jak na vývin vodíku, tak i na redoxní potenciál pojiva. Účinnost inhibitorů byla zkoumána i vizuálně pomocí testovacích tělísek.
|
host ::
RSS.