Národní úložiště šedé literatury Nalezeno 62 záznamů.  1 - 10dalšíkonec  přejít na záznam: Hledání trvalo 0.01 vteřin. 
Mitochondriální biomarkery u Huntingtonovy nemoci
Vizelka, Vera ; Hansíková, Hana (vedoucí práce) ; Dračínská, Helena (oponent)
Huntingtonova nemoc (HN) je dědičné závažné neurodegenerativní onemocnění. Příčinou této choroby je mutace genu, který kóduje protein huntingtin (htt). Mutace se projevuje abnormálním prodloužením CAG tripletů. V molekule htt tak vzniká polyglutaminový řetězec, který způsobuje jeho fragmentaci a agregaci. Výsledkem je nesprávně sbalený protein a to má za následek poškození neuronů, především v oblasti striata. Biochemická podstata odumírání neuronů není dosud objasněna. Dodnes neexistuje žádná efektivní léčba HN. Htt se podílí se na mnoha různých buněčných procesech, např. se účastní regulace transportních dějů v buňce, podílí se na transkripci některých genů a kontroluje také apoptózu. Mutovaný htt může být příčinou poruch mitochondrií. Důsledkem působení mutovaného htt je vznik oxidačního stresu a následně nástup procesu neurodegenerace, ale přesná úloha mitochondrií během rozvoje nemoci nebyla dosud pečlivě prozkoumána Předchozí studie prokázaly poruchy mitochondrií nejen v mozku, ale i v dalších extraneuronálních tkáních. Cílem bakalářské práce bylo optimalizovat přípravu vzorku z buněk bukálního stěru - materiálu s neinvazivním odběrem pro účely proteinové analýzy a stanovit množství vybraných mitochondriálních proteinů v buňkách bukálního stěru u pacientů s HN v různých stádiích nemoci a...
Struktura a interakce lidského regulačního proteinu 14-3-3 pomocí in vitro fotoafinitního značení s využitím proteinových nano-sond a hmotnostní spektrometrie
Mazurová, Martina ; Šulc, Miroslav (vedoucí práce) ; Dračínská, Helena (oponent)
Tato bakalářská práce je zaměřená na studium struktury a mechanismu lidského proteinu 14-3-3, který patří mezi významné regulační proteiny vyskytující se ve všech eukaryotických buňkách. V dnešní době je u savců známo 7 isoforem tohoto proteinu a přestože jejich krystalová struktura vykazuje vysokou podobnost, můžeme pozorovat několik změn. Cílem této práce je příprava experimentálního nástroje, který umožní ověřit, zda jsou tyto rozdíly v krystalové struktuře isoformy ζ přítomné i v roztocích proteinů a současně zda ovlivňují strukturně funkční mechanismus této isoformy. Optimalizace exprese rekombinantního proteinu 14-3-3zeta s inkorporovaným fotoaktivovatelným analogem leucinu v sekvenci proteinu byla provedena v limitním médiu s prokaryotním expresním systémem E. coli BL-21 DE3 Gold, nebo auxotrofním systémem E. coli K-12 bez funkční biosynthesy leucinu.
Příprava a charakterizace slepičích protilátek proti patogenní kvasince Candida albicans
Vodecký, Matúš ; Hodek, Petr (vedoucí práce) ; Dračínská, Helena (oponent)
Nárůst počtu infekcí způsobených kvasinkovými patogeny je alarmujícím problémem celosvětového veřejného zdraví. Nejvíce jsou ohroženi lidé s narušeným imunitním systémem, jako např. po infekci virem lidské imunodeficience nebo při diabetes mellitus. Diagnostika je častokrát nedostatečná a léčba je odkázána na omezený výběr antimykotik, na která navíc narůstá rezistence. Tyto aspekty představují velký problém, jelikož je pak na rezistentní patogeny třeba podávat léky druhé volby, které mohou mít vedlejší toxické účinky (např. nefrotoxicita v případě amfotericinu B). Vzhledem k závažnosti kvasinkových infekcí je snaha najít způsob ochrany vůči těmto patogenům. Jednou z možností je pasivní imunoterapie. V této bakalářské práci byly pro tento účel zvoleny protilátky ze slepičích vajec, které mají potenciál širokého terapeutického použití. Příprava slepičích protilátek IgY ze žloutků vajec je jak z etického, tak ekonomického pohledu výhodná. Žloutkové protilátky navíc vykazují poměrně vysokou stabilitu. Z vajec slepic imunizovaných buď buněčnou stěnou nebo celými buňkami C. albicans po kultivaci v médiu simulujícím vaginální prostředí (VSF) byly izolovány polyklonální protilátky. Reaktivita protilátek byla testována metodou ELISA. Jako antigen byly použity buněčné stěny C. albicans kultivovaných v médiu...
Cirkulující nádorová DNA v moči a její využití jako potenciálního biomarkeru kolorektálního karcinomu
Surkovová, Veronika ; Ptáčková, Renata (vedoucí práce) ; Dračínská, Helena (oponent)
Kolorektální karcinom (CRC) je závažné onemocnění, jehož incidence v poslední době neustále narůstá. Pacienti, jejichž léčba je započata v raných stadiích nemoci mají vysokou šanci na vyléčení a kvalitní život. Se včasným odhalením nemoci, monitoringem stavu pacienta i vhodným určením diagnózy by mohla pomoci tzv. tekutá biopsie, při ní dochází k získání a analýze biomarkerů z různých tělních tekutin. Cílem této práce je izolace a analýza cirkulující nádorové DNA (ctDNA) z moči pacientů s pokročilým CRC, u kterých byla detekována ctDNA v plazmě. Pro analýzu je použita metoda založená na principu PCR s tvorbou heteroduplexů a následném rozdělení "wild type" a mutovaných fragmentů DNA pomocí denaturační kapilární elektroforézy. Na rozdíl od vzorků plazmy, přítomnost mutace KRAS ve vzorcích moči se nepotvrdila. Zavedený postup pro analýzu plazmy, snaha o nabohacení ctDNA tzv. přečištěním ani další testované izolační soupravy s využitím zvolené detekční metody neumožnily záchyt mutace KRAS v moči prostřednictvím ctDNA. Ačkoli se vyšetření ctDNA z moči obecně jeví jako nadějná metoda pro zlepšení úrovně léčby (kolorektálního) karcinomu, a ačkoli by její použití mohlo mít celou řadu výhod, je nutné této problematice věnovat ještě mnoho úsilí a času, než se stane rutinní záležitostí.
Interakce protinádorového léčiva lenvatinibu s podrodinou 2C cytochromů P450
Srogoň, Jiří ; Dračínská, Helena (vedoucí práce) ; Hýsková, Veronika (oponent)
Lenvatinib je vícecílový inhibitor kinas schopný inhibovat tyto kinasy již v nanomolárních koncentracích. Z tohoto důvodu je používán jako léčivo při terapii různých typů rakoviny. Podobně jako u většiny xenobiotik je lenvatinib metabolizován cytochromy P450, což může vést k výskytu lékových interakcí s jinými látkami. Identifikace nejdůležitějších a klinicky relevantních lékových interakcí je zásadní pro zajištění bezpečnosti pacientů, kteří již trpí sníženou kvalitou života v důsledku rakoviny. Hlavním cílem této bakalářské práce bylo zkoumat vliv lenvatinibu na cytochromy P450, konkrétně na isoformy podrodiny 2C u lidí a potkanů. Inhibiční účinek byl měřen in vitro pomocí markerových reakcí na vzorcích potkaních jaterních mikrosomů pro isoformu CYP2C6 a na vzorcích lidské rekombinantní isoformy CYP2C9 exprimované v SuperosmechTM nebo Bactosomech® . Dále byl zkoumán vliv lenvatinibu na expresi CYP2C11 a 2C6 v játrech potkanů vystavených lenvatinibu. Lenvatinib způsobil pokles aktivity lidské rekombinantní isoformy CYP2C9, zatímco na aktivitu isoformy CYP2C6 v potkaních jaterních mikrosomech nebyl zaznamenán žádný vliv. Jedním z dalších cílů bylo stanovit IC50 pro CYP2C9, cíl se ale nepodařilo splnit. Při zkoumání vlivu lenvatinibu na expresi CYP2C11 a 2C6 v játrech potkaních samců bylo...
Příprava a charakterizace terapeutické protilátky Farletuzumab - Thiomab E154C S378C
Mochánová, Michaela ; Brynda, Jiří (vedoucí práce) ; Dračínská, Helena (oponent)
4 Abstrakt Lidský folátový receptor α (FRα) je receptor vázající kyselinu listovou, která je jakožto jeden z vitamínů nutná pro základní buněčné procesy, růst a diferenciaci buněk. Exprese FRα je ve zdravé tkáni přísně regulována, ale v některých nádorových typech je ve vysoké nadprodukci. Proti folátovému receptoru α byla vyvinuta humanizovaná monoklonální protilátka Farletuzumab. Vazba Farletuzumabu na FRα vede k aktivaci imunitního systému přes cytotoxicitu závislou na protilátkách a cytotoxicitu závislou na komplementu. Pro zvýšení protinádorového účinku byly vybrané aminokyseliny v molekuly protilátky Farletuzumab mutovány za cysteiny, které umožňují následnou aplikaci technologie THIOMAB. Tyto cysteiny jsou použity ke specifické konjugaci protilátky s uměle připravenou efektorovou molekulou, která spouští signální dráhu cGAS-STING (synthasa cyklického GMP-AMP - stimulátor interferonových genů, z angl. stimulator of interferon genes). Kombinace vlastního protinádorového účinku protilátky a spuštění imunitní reakce přes signální dráhu cGAS-STING maximalizuje imunitní odpověď vůči rakovinným buňkám. Cílem mé práce proto bylo protilátku exprimovat ve vhodném eukaryotickém buněčném systému a následně udělat základní charakteristiku proteinu. Protilátka Farletuzumab-Thiomab byla připravena heterologní...
Vliv protinádorového léčiva cabozantinibu na aktivitu cytochromů P450
Slobodníková, Eva ; Dračínská, Helena (vedoucí práce) ; Václavíková, Radka (oponent)
Cabozantinib je protinádorové léčivo používané zejména pro léčbu karcinomu štítné žlázy a ledvinových buněk. Řadí se mezi nízkomolekulární selektivní inhibitory tyrosinkinas. Tyrosinkinasy mají klíčovou roli při přenosu signálů a regulaci řady buněčných procesů, jako je růst, diferenciace a proliferace. Změny v tyrosinkinasových dráhách jsou spojeny se vznikem a progrese nádorů, kde dochází k jejich nekontrolovatelnému růstu. Inhibitory tyrosinkinas působí na tyrosinkinasové receptory, čímž zabraňují dělení nádorových buněk a zároveň zpomalují progresi nádorového onemocnění. Jelikož cabozantinib, stejně jako většina klinicky používaná léčiva, podléhá metabolismu cytochromy P450, může dojít k nežádoucím lékovým interakcím, které mají za následek změnu farmakokinetiky podávaných léčiv, a následné snížení účinnosti těchto léčiv. V této diplomové práci byl sledován účinek cabozantinibu na aktivitu hlavních enzymů I. fáze biotransformace xenobiotik, cytochromů P450, in vitro. Studován byl účinek na aktivitu potkaních i lidských izoforem cytochromů P450, které se účastní metabolismu xenobiotik. Izoformy CYP byly převážně inkubovány s cabozantinibem o dvou koncentracích; 10 µM a koncentraci odpovídající koncentraci substrátu ve specifické markerové reakci. Výsledky prokázaly inhibiční vliv cabozantinibu u...
Specific heme interaction modulates the conformational dynamics and function of p53
Sergunin, Artur ; Martínková, Markéta (vedoucí práce) ; Dračínská, Helena (oponent)
Tumor supresor p53 je jedním z nejvíce studovaných proteinů v souvislosti s rakovinou a mechanismem jejího vzniku. Obecná funkce p53 spočívá v transkripční regulaci celé řady genů, které různými způsoby ovlivňují velké množství buněčných procesů. Nedávné studie odhalily vztah mezi p53 a homeostázou železa v buňce. Konkrétně, bylo ukázáno, že p53 je schopen interagovat s molekulou hemu a tato interakce vede ve výsledku k narušení DNA- vazebných schopností p53 a podporuje jeho proteazomální degradaci. Tato práce se zabývá podrobným popisem vazby molekuly hemu na p53. Za tímto účelem jsme izolovali dvě formy proteinu p53, bez hemu a s navázaným hemem. Zjistili jsme, že se liší konformační dynamika obou forem s tím, že forma s hemem vykazuje vyšší stupeň flexibility. Taktéž jsme potvrdili dřívější práce, že hem reaguje s p53 specificky a této interakce se účastní cysteinový zbytek. Nicméně, bylo zjištěno, že vazba hemu žádným způsobem nenarušuje oligomerní stav p53 a ani jeho přirozenou schopnost vázat zinek. Nakonec jsme ukázali, že p53 s navázaným hemem má značně narušené DNA-vazebné schopnosti v porovnání s p53 bez hemu. Klíčová slova: hem, senzorové proteiny, protein p53, transkripční faktor, vnitřně neu- spořádané proteiny
Identifikace změn expresního profilu genů účastnících se rezistence v experimentálním in vivo modelu ovariálního karcinomu
Bryndová, Barbora ; Václavíková, Radka (vedoucí práce) ; Dračínská, Helena (oponent)
Ovariální karcinom je jednou z nejzávažnějších gynekologických malignit na světě. Jeho vysoká mortalita je způsobena především vznikem mnohočetné lékové rezistence na kon- venční léčbu zahrnující taxany. Současný výzkum se proto zaměřuje na studium nových derivátů na bázi taxanů, které by mohly obcházet doposud známé mechanismy lékové rezistence. Existuje několik slibných derivátů taxanů z řady tzv. Stony Brook taxanů (SB-T taxanů), jejichž účinnost, toxicita a mechanismus působení jsou sledovány. Tato bakalářská práce se zabývá studiem změn exprese genů účastnících se vzniku rezistence v tkáních a nádorech získaných z in vivo modelů po podání derivátu SB-T-121605 v porovnání s konvenčním taxanem paklitaxelem a s neléčenými modely. Byly studovány vybrané geny ABC transporterů (ABCB1, ABCC1 a ABCG2) a enzymů metabolizujících taxany (CYP3A11, CYP3A13 a CYP2C29) a jejich myších ortologů ve vzorcích jater, střev a nádorové tkáně odebraných z in vivo modelů myších xenograftů. Nádorová tkáň byla odvozena od vysoce rezistentní buněčné linie NCI/ADR-RES ovari- álního karcinomu. Stanovení genové exprese bylo provedeno metodou kvantitativní po- lymerázové řetězové reakce v reálném čase. Podání derivátu SB-T-121605 vedlo k několika významným změnám genové ex- prese. V nádorové i střevní tkáni došlo po podání...
Optimalizace metody izotermální amplifikace zprostředkované smyčkou pro testování infekce způsobené bakterií Streptococcus pneumoniae
Friček, Matúš ; Jeřábek, Petr (vedoucí práce) ; Dračínská, Helena (oponent)
Streptococcus pneumoniae je grampozitivní patogenní bakterie. Podle světové zdravotnické organizace je tato bakterie nejčastěji se vyskytujícím mikrobiálním zdrojem onemocnění jako je pneumonie či meningitida u dětí. Standardem pro detekci patogenů je v současnosti polymerázová řetězová reakce. V posledních desetiletích došlo k rozvoji amplifikačních metod, mezi které se řadí také izotermální amplifikace zprostředkovaná smyčkou, která by díky své nízké instrumentální náročnosti i jednoduchému způsobu vyhodnocení mohla představovat vhodnou alternativu pro detekci patogenů. Zavedení této metody do klinické praxe je komplikováno častým výskytem falešné pozitivity u vzorků neobsahujících příslušnou DNA. V rámci předkládané bakalářské práce bylo proto velmi důležité identifikovat a odstranit hlavní zdroj kontaminace, jimž se na základě dosažených výsledků zdají být produkty předchozích reakcí. V současnosti se pro detekci bakterie S. pneumoniae metodou PCR nejčastěji využívají geny lytA a piaB. V dostupných zdrojích není zmínka o využití genu piaB pro LAMP detekci bakterie S. pneumoniae. Předmětem této práce bylo navržení optimální sady LAMP "primerů" pro detekci tohoto genu. V rámci optimalizace metody byly LAMP experimenty prováděny s využitím různých způsobů vizualizace produktů reakce, konkrétně...

Národní úložiště šedé literatury : Nalezeno 62 záznamů.   1 - 10dalšíkonec  přejít na záznam:
Chcete být upozorněni, pokud se objeví nové záznamy odpovídající tomuto dotazu?
Přihlásit se k odběru RSS.