|
|
Vliv ivermektinu na dospělce vlasovky slézové
Mertová, Ivana ; Matoušková, Petra (vedoucí práce) ; Vokřál, Ivan (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Ivana Mertová Školitel: Ing. Petra Matoušková, Ph.D. Název diplomové práce: Vliv ivermektinu na dospělce vlasovky slézové Helmintóza je onemocnění způsobené paraziticky žijícími hlísticemi, mezi které patří i vlasovka slezová (Haemonchus contortus - H. contortus), způsobující hemonchózu. Jedná se o vážné onemocnění, poškozující chovy malých přežvýkavců, neboť způsobuje ztrátu produktivity zvířat, oslabení chovů a v konečném důsledku smrt zvířat. V boji s touto nemocí jsou široce využívána anthelmintika, s jejichž častým používáním v minulé i současné době došlo k rozvoji helmintorezistence. Rezistence na látky s anthelmintickou aktivitou se stává kvůli svému nárůstu celosvětovým problémem, a proto je vyvíjena snaha o poznání mechanismů rezistence a přispívajících faktorů, díky kterým by bylo možno předcházet vzniku a rozšiřování rezistence. Jednou z nejpoužívanějších látek v terapii veterinárních helmintóz zůstává dodnes ivermektin (IVE). Jedná se o makrocyklický lakton, jehož mechanismus účinku pravděpodobně spočívá v poškození chloridových kanálů glutaminergních synapsí parazita. V této práci byl sledován vliv IVE na dospělce H. contortus ze dvou kmenů: kmene citlivého, tzv. ISE (Inbred...
|
|
|
Gene expression analysis of selected UDP-glucosyltransferases from Haemonchus contortus
Janura, Michal ; Matoušková, Petra (vedoucí práce) ; Szotáková, Barbora (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Mgr. Michal Janura Školitel: Ing. Petra Matoušková, PhD. Název rigorózní práce: Stanovení exprese mRNA vybraných UDP-glukosyltransferas u parazita Haemonchus contortus Hemonchóza je jednou z nejzávažnějších parazitárních onemocnění u malých přežvýkavců způsobena parazitem Haemonchus contortus (vlasovka slézová). Rezistence na anthelmintika způsobuje problémy v léčbě této nemoci a zvyšuje náklady na její léčbu. Při účinné terapii proti rezistentním parazitům by se zlepšila ekonomická situace v zemědělství. Mechanizmy způsobující rezistenci u H. contortus jsou pořád nedostatečně známé. Rezistentní H. contortus je schopen produkovat mnohem víc glukózových konjugátů benzimidazolového anthelmintika albendazolu (ABZ) než citliví jedinci. V genomu H. contortus bylo identifikováno více než 40 genů pro UDP-glukosyltransferázy (UGT), které disponují širokou rozmanitostí v této rodině enzymů. Táto práce je část systematického výzkumu zaměřeného na stadium UGT enzymů, kterými je ABZ detoxifikován. Pro zjištění, který z UGT enzymů způsobuje zvýšený metabolismus ABZ se analyzovaly mRNA hladiny 8 vybraných genů z dospělých jedinců rezistentního kmene H. contortus pomocí real-time PCR, které se následně...
|
|
|
Vyhledání referenčních genů pro relativní kvantifikaci mRNA z Haemonchus contortus
Růžičková, Michaela ; Matoušková, Petra (vedoucí práce) ; Zemanová, Lucie (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Michaela Růžičková Školitel: Ing. Petra Matoušková, Ph.D. Název diplomové práce: Vyhledání referenčních genů pro relativní kvantifikaci mRNA z Haemonchus contortus Haemonchus contortus je parazitická hlístice, jejíž multirezistence k anthelminti- kům je celosvětovým problémem ohrožujícím hlavně chovy malých přežvý- kavců. V roce 2013 byl publikován její genom a transkriptom, což umožnilo rozsáhlý výzkum genové exprese. Referenční geny pro tyto studie prozatím ne- byly stanoveny. Použití vhodných referenčních genů je nezbytné pro správnou normalizaci hladin exprese genů. Cílem této práce bylo navrhnout a zhodnotit potenciální referenční geny pro studie genové exprese u dospělců H. contortus. Navrženo bylo 11 genů, stabilita jejich exprese byla hodnocena na samcích a sa- micích dvou kmenů H. contortus, jednoho na anthelmintika vnímavého (ISE) a druhého multirezistentního (WR). Z jedinců byla extrahována RNA, přepsána reverzní transkripcí do cDNA. Tato byla zředěna a analyzována kvantitativní real-time PCR s detekcí pomocí SYBR Green I. Stabilita exprese byla hodnocena počítačovými programy BestKeeper, geNorm, NormFinder a komparativní CT metodou. Nejstabilnějšími geny se jeví ncbp, ama, sodc, gapdh a...
|
|
|
Příprava luciferázových konstruktů pro promotor genu DHRS3
Voborová, Lucie ; Malátková, Petra (vedoucí práce) ; Matoušková, Petra (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Řešitel: Lucie Voborová Školitel: PharmDr. Petra Malátková, Ph.D. Název diplomové práce: Příprava luciferázových konstruktů pro promotor genu DHRS3 Membránově vázané reduktázy, mezi které patří i DHRS3, představují málo prozkoumanou oblast. Předpokládá se, že DHRS3 má svou roli v metabolismu retinoidů, kde se podílí na udržování rovnováhy signalizace all-trans-retinové kyseliny (ATRA) a tímto reguluje tvorbu osy těla. Genová regulace DHRS3 prostřednictvím retinoidů ale doposud nebyla popsána. Proto jsme se rozhodli genovou regulaci DHRS3 zkoumat. Její objasnění může napovědět více o funkci DHRS3. Pro provedení promotorové analýzy bylo potřebné připravit luciferázové konstrukty obsahující různě dlouhou oblast promotoru DHRS3. V přípravě byly použity kroky amplifikace, restrikce, ligace, transformace, "colony PCR", kontrolní a zpětná restrikce a sekvenace. Jednotlivé kroky byly optimalizovány pro konkrétní konstrukty tak, aby došlo k jejich správnému sestavení. Díky vhodně zvoleným postupům a jejich optimalizacím se podařilo připravit konstrukty v dostatečném množství a kvalitě. Mohou tak být použity při luciferázové analýze jako součást promotorové analýzy. Klíčová slova: Klonování, dehydrogenáza/reduktáza,...
|
|
|
Klonování a příprava plasmidů pro reportérový esej lidské GPX7
Hanousková, Barbora ; Matoušková, Petra (vedoucí práce) ; Novotná, Eva (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Bc. Barbora Hanousková Školitel: Ing. Petra Matoušková, PhD. Název diplomové práce: Klonování a příprava plasmidů pro reportérový esej lidské GPx7 Glutathion peroxidázy (GPx), katalyzují redukci H2O2 a organických hydroperoxidů na vodu nebo odpovídající alkoholy. Odstraňují tak pro buňku nebezpečné sloučeniny a chrání ji před buněčným stresem. Zatím bylo objeveno v lidském genomu celkem 8 genů kódujících GPx. GPx7, které se práce věnuje, je monomerní enzym, který má antioxidační účinky a účastní se skládání proteinů. Snížená exprese GPx7 byla zaznamenána u karcinomu prsu, Barrettovy dysplázie jícnu nebo karcinomu jícnu. Spekuluje se proto o GPx7 jakožto klasickém nádorovém supresoru, jehož inaktivace může vést k rozvoji rakoviny. Diskutuje se působení mikroRNA (miRNA) v jehož důsledku dochází ke snížení exprese genu pro GPx7. MiRNA jsou malé jedno řetězcové nekódující molekuly RNA, které se významně podílejí na regulaci genové exprese. Jejich hlavní funkcí je inhibice genové exprese na post-transkripční úrovni, tedy zabraňují translaci mRNA do struktury proteinu. Děje se tak specifickou vazbou miRNA na vazebná místa hlavně ve 3'UTR oblasti mRNA. Cílem této práce je příprava plasmidů, které budou...
|
|
|
Účinek polyfenolů ze zeleného čaje na antioxidační enzymy u myší in vivo
Kvita, Vojtěch ; Svobodová, Hana (vedoucí práce) ; Matoušková, Petra (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Vojtěch Kvita Školitel: PharmDr. Hana Bártíková, Ph.D. Název diplomové práce: Účinek polyfenolů ze zeleného čaje na antioxidační enzymy u myší in vivo Antioxidační enzym patří mezi látky s prokázanými účinky na lidský organismus. Jejich hlavní funkce spočívá v ochraně buněk před oxidačním stresem. Abychom tento proces podpořili, přijímáme látky zvané antioxidanty a to buď v normální stravě, nebo ve formě potravních doplňků. V současné době je na trhu bezpočet firem nabízejících tyto preparáty, u kterých slibují například snížení hmotnosti nebo ochranu před rakovinou. Zelený čaj obsahuje spoustu přírodních látek, jako jsou polyfenolové sloučeniny mezi něž patří i katechiny, které mají studiemi prokázané vlastnosti na náš organismus, avšak jak konkrétně působí na vybrané antioxidační enzymy je stále předmětem zkoumání. Cílem mé práce bylo zjištění vlivu polyfenolů ze zeleného čaje na antioxidační enzymy u myší. Zkoumali jsme 8 skupin (4 normální, 4 obézní) přičemž dvě skupiny byly ponechány, jako kontrolní tzn. bez podávání Polyphenonu. Vždy třem skupinám byla podávána strava obohacená o Polyphenon a to v různé délce (28 dní, 3 dny) a v různých koncentracích (0,1%, 0,01%). Aktivitu jsme zkoumali v...
|
|
|
Účinek polyfenolů ze zeleného čaje na antioxidační enzymy u myší in vivo
Kvita, Vojtěch ; Svobodová, Hana (vedoucí práce) ; Matoušková, Petra (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Vojtěch Kvita Školitel: PharmDr. Hana Bártíková, Ph.D. Název diplomové práce: Účinek polyfenolů ze zeleného čaje na antioxidační enzymy u myší in vivo Antioxidační enzym patří mezi látky s prokázanými účinky na lidský organismus. Jejich hlavní funkce spočívá v ochraně buněk před oxidačním stresem. Abychom tento proces podpořili, přijímáme látky zvané antioxidanty a to buď v normální stravě, nebo ve formě potravních doplňků. V současné době je na trhu bezpočet firem nabízejících tyto preparáty, u kterých slibují například snížení hmotnosti nebo ochranu před rakovinou. Zelený čaj obsahuje spoustu přírodních látek, jako jsou polyfenolové sloučeniny mezi něž patří i katechiny, které mají studiemi prokázané vlastnosti na náš organismus, avšak jak konkrétně působí na vybrané antioxidační enzymy je stále předmětem zkoumání. Cílem mé práce bylo zjištění vlivu polyfenolů ze zeleného čaje na antioxidační enzymy u myší. Zkoumali jsme 8 skupin (4 normální, 4 obézní) přičemž dvě skupiny byly ponechány, jako kontrolní tzn. bez podávání Polyphenonu. Vždy třem skupinám byla podávána strava obohacená o Polyphenon a to v různé délce (28 dní, 3 dny) a v různých koncentracích (0,1%, 0,01%). Aktivitu jsme zkoumali v...
|
|
|
Vliv vybraných isoflavonoidů na účinnost protinádorové léčby u buněčné linie MDA-MB-231
Lokvencová, Kateřina ; Svobodová, Hana (vedoucí práce) ; Matoušková, Petra (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Titul, jméno, příjmení kandidáta: Kateřina Lokvencová Titul, jméno, příjmení školitele: PharmDr. Hana Bártíková, Ph.D. Název diplomové práce: Vliv vybraných isoflavonoidů na účinnost protinádorové léčby u buněčné linie MDA-MB-231. Karcinom prsu je nejčastějším onkologickým onemocněním u žen. Existuje značné množství terapeutických režimů pro léčbu tohoto onemocnění, často je však limituje nedostatečná účinnost nebo závažné nežádoucí účinky. Isoflavonoidy genistein (GEN), daidzein (DAID) a formononetin (FORM) patří mezi přírodní látky s bioprotektivními efekty na lidský organismus. Některé epidemiologické studie potvrdily protektivní efekt isoflavonoidů proti některým typům rakoviny, včetně karcinomu prsu. Cílem této práce bylo studium vlivu isoflavonoidů na rakovinné buňky a posouzení jejich schopnosti podporovat účinek cytostatik, konkrétně antracyklinového cytostatika doxorubicinu (Dox). K experimentům byla vybrána buněčná linie karcinomu prsu MDA-MB-231. Ke studiu vlivu isoflavonoidů na nádorové buňky jsme s ohledem na biologickou dostupnost isoflavonoidů zvolili koncentrace 1 a 10 µM. Prokázali jsme, že isoflavonoidy v takto nízkých koncentracích většinou buněčnou viabilitu významně neovlivňují....
|
|
|
In vitro and in silico evaluation of biological activity of new compounds
Želazková, Jana ; Pávek, Petr (vedoucí práce) ; Matoušková, Petra (oponent)
Pro šest derivátů kumarinu, u nichž byl v některých případech v předešlé studii prokázán antikoagulační účinek a schopnost inhibovat cyklooxygenázu I, byla stanovena cytotoxicita vůči HepG2 buněčné linii pomocí LDH a MTS testů. Tři z kumarinů v koncentraci 30 μM nesnížily viabilitu HepG2 buněk po 48 hodinách působení a žádný ze zbylých tří kumarinů nevedl ke snížení viability pod 79% za identických podmínek. Dále byly pro všechny kumariny predikovány fyzikálně chemické vlastnosti určující chování v biologických systémech pomocí ADMET Prediktoru. Program vyhodnotil čtyři kumariny jako vhodná potenciální léčiva (nulové celkové riziko) a dva zbývající ohodnotil nejmenším rizikem v rámci stupnice. Tyto dva kumariny byly identické s kumariny vykazujícími určitou cytotoxicitu v in vitro testech. Cytotoxicita in vitro byla rovněž stanovena pro zástupce skupiny derivatů flavonů, 3-hydroxyflavonu, jenž podle MTS vedl ke snížení viability na 80%, zatímco v LDH testu byl vyhodnocen jako netoxický. Vysvětlením tohoto pozorování může být cytostatický, nikoli cytotoxický účinek látky a flavonový derivát by tak měl být předmětem dalšího výzkumu (např. sledování vlivu na buňky pomocí průtokového cytometru). Powered by TCPDF (www.tcpdf.org)
|
|
|
Vliv flavonoidů in vitro na aktivitu vybraných biotransformačních enzymů ve střevních buněčných liniích
Pokorná, Petra ; Szotáková, Barbora (vedoucí práce) ; Matoušková, Petra (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Petra Pokorná Školitel: Doc. Ing. Barbora Szotáková, Ph.D. Název diplomové práce: Vliv flavonoidů in vitro na aktivitu vybraných biotransformačních enzymů ve střevních buněčných liniích Anthokyany se řadí mezi flavonoidní látky, které patří mezi hlavní přírodní barviva v rostlinách. Jsou považovány za velmi prospěšné pro lidský organismus. Anthokyany jsou hojně konzumovány prostřednictvím ovoce, zeleniny a červeného vína, a představují významné složky doplňků stravy. Obliba potravních doplňků s vysokými koncentracemi flavonoidů se stále zvyšuje, ale kromě pozitivního vlivu na lidské zdraví mohou také mít nežádoucí účinky - ovlivňovat enzymy metabolizující léčiva a tím ovlivňovat jak žádoucí, tak i nežádoucí účinky řady léčiv. V této diplomové práci se zkoumal in vitro vliv některých anthokyanidinů (cyanidin, delfinidin, malvidin, pelargonidin) na proliferaci střevní buněčné linie Caco- 2 za použití testu metabolické aktivity (MTT) a stanovení integrity plazmatické membrány buněk (neutrální červeň), a dále se sledoval jejich vliv na aktivitu vybraných biotransformačních enzymů: glutathion-S-transferasy (GST), karbonylreduktasy (CBR), UDP-glukuronosyltransferasy (UGT) a cytochromů P450 (CYP)....
|
host ::
RSS.