|
|
Immobilization of protease V8 on magnetic particles for application to proteolytic cleavage of pepsin A
Čepa, Adam ; Pacáková, Věra (advisor) ; Tichá, Marie (referee)
This thesis is part of a long-standing research in the field of diagnosis of the stomach diseases, which is based on the gastric enzyme pepsin A mapping. It was found that a phosphorylation in the primary structure of this enzyme may serve as a marker of incipient stage of carcinogenesis. This thesis is focused on the immobilization of protease V8 isolated from microorganism Stafylococcus aureus to magnetic agarose beads. Protease V8 is a promising candidate for producing peptide maps of pepsin A. The influence of pH, temperature and reaction time on the enzyme to activity has been studied and the optimal conditions for hydrolytic catalysis of formation of peptide fragments of pepsin A.
|
|
|
Study on protective effect of 3-hydroxybutyrate and its derivatives
Černá, Klára ; Smilek, Jiří (referee) ; Obruča, Stanislav (advisor)
The aim of this thesis is the study of chemical chaperones, as a preservative enzymes before denaturing processes. In the experimental part of the study we investigated the protective effects of five selected potential protective compounds – derivatives of 3-hydroxybutyrate – two model enzymes: lipase and lysozyme. Protective effects of potential chemical chaperones were investigated by dynamic light scattering (DLS), which was determined by the size distribution of the aggregates lipase produced depending on the temperature at the heat-induced denaturation. Further we have been used differential scanning calorimetry (DSC), which was determined by the temperature of the denaturation of lysozyme in the presence or absence of potentially protective substances. The last parameter was to determine the effect of potentially protective agents at different concentrations on the catalytic activity of lipase and determining the residual lipase activity after application of denaturing two factors – the high temperature and freezing. Of all tested structural analogues of 3-hydroxybutyrate was the highest protective effect observed (stabilization of enzyme molecules) with the succinate, which has two carboxyl groups. Conversely, 1,3-butanediol showed virtually no protective activity, indicating that the presence of carboxyl groups on the protective effect of essential. The low protective efficacy butyrate further indicates that it is essential that an effective protectant in addition to the carboxyl group contained as a further functional group – either carboxyl or hydroxyl. More significant protective effect was observed in 3-hydroxybutyrate than in 2-hydroxybutyrate. Interestingly, the effective protectant while at higher concentrations strongly inhibit the enzyme activity of the model enzyme, which is probably related to the solvation and conformations of the protein in the presence of protectant and the availability of the active site for the substrate.
|
|
|
Microbial Degradation of Polycaprolactone-based Materials
Damborský, Pavel ; Stratilová, Eva (referee) ; Hermanová, Soňa (advisor)
Diplomová práce se zabývá vlivem nutričních a aeračních faktorů na produkci lipáz bakterií Bacillus subtilis (CCM 1999). Produkce lipáz byla studována zejména z hlediska katalytického působení lipáz při degradaci polyesterových řetězců. Mezi studované parametry patřily: růst bakterií, lipolytická aktivita, pH optimum, teplotní optimum, tepelná stabilita, proteolytická aktivita, množství bílkovin, atd. a to v různých typech živných medií zaočkovaných Bacillus subtilis. Jedna série vzorků kultivačních médií pro BS na bázi: pepton a kvasničný extrakt (NB), pepton, kvasničný extrakt s 2% přídavkem (w/v) glukózy (NBG) a minerální médium s kvasničným extraktem (MS-YE) obsahovala jeden PCL vzorek o definovaných rozměrech (Mn = 10 kDa, = 1.4). Experimenty probíhaly po dobu 21 dnů pří rychlosti třepání 160 a 200 rpm. Přítomnost PCL způsobila v obou typech médií (NB, NBG) inokulovaných BS zvýšení lipolytické aktivity, což naznačuje, uvolnění a následné uplatnění se nízko-molekulekulárních řetězců PCL jako substrátů pro BS. BS kultivovaný v MS-YE medium vykazoval ve srovnání s NB a NBG médii nízké hodnoty lipolytické aktivity a to i v přítomnost PCL. Během experimentů se hodnota pH posunula z neutrální (pH 7.0) do alkalické (pH 8.5-9.3) oblasti a to ve všech typech médií s i bez přítomnosti PCL vzorku v důsledku metabolických pochodů BS využívajících různé substráty. Lipolytické enzymy stanovené v supernatanech bez bakteriálních buněk vykazují dvě pH optima v přítomnosti PCL, pH 7 a 9. V nepřítomnosti polymeru vykazují pouze jedno pH optimum při pH 7. Na základě měření tepelné stability bylo prokázáno, že extracelulární lipázy jsou relativně termostabilní enzymy, zejména v nepřítomnosti polymeru. Dále byla provedena základní proteomická analýza lipáz produkovaných bakterií Bacillus subtilis v NBG médiu pomocí metody peptidového mapování (PMF). Byla ověřena přítomnost proteinů s molární hmotnosti (19.3 kDa) pomocí FPLC. SDS-PAGE a IEF-PAGE prokázaly přítomnost těchto proteinů v obou studovaných mediích inokulovaných BS (NBG vs. NBG/PCL). Zásadní rozdíly proteinového složení v přítomnosti PCL nebyly potvrzeny a identifikace pomoci MALDI-TOF hmotnostní spektrometrie nestanovila žádnou lipázu. Proces degradace v PCL vzorcích byl vyhodnocen také na základě hmotnostních úbytků, které byly zjištěny ve všech typech médií inokulovaných BS pravděpodobně v důsledku synergického účinku enzymaticky-katalyzované a biotické hydrolýzy v alkalickém prostředí. . Modelová degradační studie PCL a jeho kompozitu s oxidem grafenu (2.7 hm.%, GO) byla provedena v přítomnosti bakterie Bacillus subtilis v NBG při 30 °C a počátečním pH 7 po dobu tří týdnů. Hmotností úbytky PCL filmů se postupně zvyšovaly během celého degradačního testu až ke 12 hm%. Degradace PLC/GO kompozitu probíhala pomaleji, což je prokázáno maximální hmotnostním úbytkem 5 hm%. Podobný charakter elučních křivek PCL a jeho kompozitu stanovený pomocí SEC potvrzoval snížení molární hmotnosti po degradaci.
|
|
|
Thermophilic Enzymes
Kuchtová, Ludmila ; Obruča, Stanislav (referee) ; Babák, Libor (advisor)
Thermophilic enzymes are produced by organisms living at temperatures between 60 and 80°C, in some cases even higher, and are active and stabile at these temperatures. This work deals with thermophilic and hyperthermophilic organisms, their habitats, ways of adaptation to environment with considerably higher temperatures than optimal temperature for most organisms, and recent findings and opinions about possible factors enhancing protein thermostability. Properties and behaviour of thermophilic enzymes and their current applications (i.e. PCR, starch industry) are summarized. Advantages and disadvantages of using of these enzymes in comparison to currently used mesophilic enzymes are compared. Possible applications of thermozymes in various industrial branches, where they could replace some environment polluting procedures, simplify technology and be economically important, are introduced.
|
|
|
Technologický postup výroby čerstvých sýrů s využitím rostlinných syřidel
Auerová, Markéta
This work is focused on issue of manufacture of fresh cheeses with using plant coagulants.Cheese is milk product, which is produced by precipitation of milk protein by rennet or other suitable coagulant agents. Plant extracts have been used to coagulate milk in antiquity, although there are very few knowledges of their properties. A lot of interest in vegetable coagulants was in 1960, when the increasing consumption of cheese was not enough of animal rennet. The literary section described the manufacture of cheese, characteristic of different type of coagulant and properties of different plant coagulants, which are used in different parts of the world. The aim of practical part was made fresh cheeses coagulated by plant extracts. The cheeses coagulated at different temperatures. It was measured pH and mass of arising cheese. It was also carried out microbiological analysis of cheeses, plant coagulants and milk. The work concentrated mainly on optimizing the temperature coagulation of milk and cheese properties.
|
|
| |
|
| |
|
| |
|
| |
|
|
Kinetics and temperature dependance of cellulose degrading enzymes in the Arctic soils
VAZAČ, Jan
Kinetics and temperature dependance of ?-glucosidase and cellobiosidase was investigated in Arctic soil. These enzymes are key in cellulose degradation, while ?-glucosidase produces the final product of cellulose degradation, the glucose, which si readily available to soil microbes and can influence the CO2 production. The enzymes activities was measured using fluorogenic substrates.
|
guest ::
