|
|
Příprava expresních vektorů pro NKp65 a KACL, nových zástupců rodiny lidských NK buněčných receptorů
Mikulová, Barbora ; Vaněk, Ondřej (vedoucí práce) ; Hlouchová, Klára (oponent)
NK buňky (natural killer cells, "přirození zabíječi") jsou významnou složkou vrozeného imunitního systému a mají schopnost rozpoznat a zabít především nádorové a virem infikované buňky. Na svém povrchu mají celou řadu inhibičních a aktivačních receptorů, pomocí kterých rozhodují o osudu cílových buněk. Imunitní odpověď je nejčastěji spuštěna po navázání NK buněčného receptoru na svůj ligand. Takovými receptor-ligandovými systémy jsou např. NKp80-AICL a NKRP1-LLT1 na lidských lymfocytech. Další receptor-ligandový pár představují NKp65 a KACL, dva nedávno objevené lektinové receptory lidských imunocytů. NKp65, blízký příbuzný NKp80, je glykoprotein, který funguje jako aktivační imunoreceptor na NK92MI buňkách. KACL je posledním objeveným členem lidské rodiny receptorů CLEC2 a je lokalizován téměř výhradně v kůži. Pomocí povrchové plazmonové rezonance bylo zjištěno, že NKp65 je vysokoafinitní receptor pro KACL. Cílem mé bakalářské práce bylo připravit expresní vektory kódující lidské NK buněčné receptory NKp65 a KACL, produkovat tyto proteiny v expresním systému HEK293T buněk a provést jejich purifikaci. Klíčová slova: NKp65, KACL, NK buňka, lektin, receptor, plazmid
|
|
| |
|
|
Příprava konstruktů pro analýzu exprese jaderného receptoru nhr-97 pomocí transgenních technik v modelovém systému Caenorhabditis elegans
Boušová, Kristýna ; Stiborová, Marie (vedoucí práce) ; Hudeček, Jiří (oponent)
Cílem této bakalářské práce bylo připravit dva konstrukty promotoru regulující expresi genu kódujícího jaderný hormonální receptor nhr-97 u C. elegans. Jaderné receptory patří do velké skupiny genů sdílících homologní sekvence s jadernými receptory některých obratlovců. První, teoretická část práce popisuje strukturu jaderných hormonálních receptorů, jejich funkci a význam u nematod C. elegans. Dále je popsán samotný modelový organismus C. elegans, jeho anatomie, životní cyklus a genom. Práce také pojednává o struktuře a využití zeleného fluorescenčního proteinu (GFP), sloužícího k lokalizaci exprese genu nhr-97 v C. elegans. V praktické části je uveden postup přípravy dvou konstruktů promotoru: izolace genomové DNA ze C. elegans, amplifikace promotorů pomocí PCR a jejich následné klonování do vektoru pPD95.67 obsahujícího gen kódující zelený fluorescentní protein. Pro ověření úspěšného naklonování konstruktů promotoru bylo provedeno sekvenování DNA. Klonované promotory nhr-97 budou použity k mikroinjekcím do gonád C. elegans a exprese tohoto genu z jeho jednotlivých promotorů bude sledována pomocí exprese zeleného fluorescenčního proteinu v potomcích.
|
|
|
Příprava expresního systému gama-laktamázy a otestování exprese v E.coli
Magyerková, Monika ; Ingr, Marek (vedoucí práce) ; Šácha, Pavel (oponent)
γ-laktamasa je enzym štěpící pětičlenné laktamové cykly. Jedním z jejích potenciálních substrátů je polyvinylpyrrolidon (PVP). Degradace PVP γ-laktamasou je zkoumána s ohledem na využití v čistírnách odpadních vod. Cílem této práce proto bylo připravit synteticky gen γ- laktamasy z bakterie Comamonas acidovorans a provést jeho klonování do expresního vektoru pET22b. Pro syntézu genu γ-laktamasy byla použita metoda PCA. Sekvence genu γ- laktamasy o délce 1725 bp byla rozdělena do dvou částí (syntonů), které byly syntetizovány samostatně. Po syntéze bylo provedno restrikční štěpení a ligace do vektoru pUC19. Takto připravenými konstrukty byly transformovány kompetentní buňky E. coli kmene DH5α. Po ověření správnosti sekvencí byly oba syntony vyštěpeny restrikčními endonukleasami a spojeny jednokrokovou ligací do plazmidu pET22b. Rekombinantním plazmidem obsahujícím spojené syntony byly transformovány expresní buňky E. coli kmene BL21(DE3)RIL a byla testována exprese rekombinantní γ-laktamasy. Sekvence klonu produkujícío protein odpovídající délky byla potvrzena sekvenční analýzou. Připravený expresní plazmid bude použit pro produkci rekombinantní γ-laktamasy. (In Czech)
|
|
|
Provedení relay útoku na karty Mifare
Činčala, Martin ; Henzl, Martin (oponent) ; Malčík, Dominik (vedoucí práce)
Tato práce se zabývá převedením relay útoku na čipové karty MIFARE s použitím standardních čteček. Tyto čtečky nejsou na podobné útoky určené a proto nebylo možné implementovat útok, který by byl úspěšný proti všem typům karet. Vzhledem k tomu, ze na mnoho typů karet už byly relay útoky implementovány, zaměřil jsem se na nejnovější a dosud málo prozkoumanou kartu MIFARE Ultralight C. Relay útok byl implementován se zjednodušenou emulací 4-místného UID a úspěšně otestován na kartách MIFARE Ultralight C. S použitím jiného typu čteček by mělo být možné uskutečnit útok také na karty typu Plus, Desfire a SmartMX. Zabezpečení MIFARE Classic je možné prolomit volně dostupnými softwarovými nástroji, pomocí kterých lze tuto kartu naklonovat.
|
|
| |
|
|
The transcriptional regulation by the nuclear receptor NHR-25 in \kur{Caenorhabditis elegans}
MERGLOVÁ, Linda
NHR-25 je jedním z mála konzervovaných jaderných receptorů haďátka C. elegans a jeho rodina je zahrnuta v mnoha vývojových procesech nejen u háďátka, ale také u octomilek, ryb, myší a člověka. Buněčný mechanismus funkce této genové rodiny je však zatím málo znám. U C. elegans pravděpodobně funguje jako transkripční faktor, ale jeho přímý cílový gen doposud nebyl identifikován. V této studii jsem použila definovaná vazebná místa pro NHR-25 a GFP jako marker pro zviditelnění možnosti, že NHR-25 reguluje transkripci jiného gebu (genů) in vivo. Vyzkoušela jsem také alternativní přístup se dvěma geny v již existujících transgenních kmenech háďátek, nesoucích promotor::GFP fúzované transgeny exprimované v epiteliálních buňkách, mohou-li být tyto geny regulované NHR-25. Výsledky naznačují, že jeden ze zkoumaných genů může být ve vztahu k nhr-25 a tento receptor může být i aktivním při endocytóze.
|
|
|
Genetická selekce a klonování u metody GMDH-MIA
Jiřina, Marcel ; Jiřina jr., M.
Algoritmus GMDH-MIA byl modifikován použitím selekční procedury z genetických algoritmů a zahrnutím klonování. Selekční procedura najde rodiče pro nový neuron mezi již existujícími neurony podle jejich fitness a s určitou pravděpodobností také mezi vstupy sítě. Podstatou klonování je malá modifikace parametrů nejlepšího neuronu. Geneticky modifikovaná síť GMDH s kolonováním (GMC-GMDH) je schopna lepších výsledků než jiné výkonné metody. Je to ukázáno na některých datech z Machine Learning Repository.
|
|
|
Molecular cloning, E.coli expression and purification of SCFV antibody fragments of diagnostic/therapeutic interest
Král, Vlastimil ; Fábry, Milan ; Hořejší, Magdalena ; Závada, Jan ; Sedláček, Juraj
We describe molecular cloning, expression, purification and properties of two single chain antibody variable fragments (scFv) of potential diagnostic use, namely scFv M75 and scFv Tu-20. The former scFv is derived from a monoclonal antibody M75 specific for a cell surface protein MN/CA IX, strongly associated with many types of human carcinomas. The latter scFv is derived from a monoclonal antibody TU-20 specific for neuronal beta-III-tubulin.
|
|
| |
host ::
RSS.