|
|
Exprese a aktivita potkaních cytochromů P450 3A po podání benzo[a]pyrenu a Sudanu I
Ličko, Vojtech ; Dračínská, Helena (vedoucí práce) ; Ptáčková, Renata (oponent)
Cílem této bakalářské práce je studium vlivu kancerogenů benzo[a]pyrenu a Sudanu I podávaných laboratorním potkanům samostatně nebo společně na expresi a aktivitu významného biotransformačního enzymu cytochromu P450 podrodiny 3A v játrech - hlavním orgánu metabolismu xenobiotik, ve kterém je obsah CYP3A zvlášť vysoký. Pomocí metody kvantitativní PCR jsme pozorovaly pokles exprese genů CYP3A v játrech laboratorních potkanů nepremedikovaných a premedikovaných benzo[a]pyrenem, Sudanem I a jejich kombinacemi. Metodou Western Blot s následnou imunodetekcí jsme i na proteinové úrovni pozorovaly podobnou tendenci poklesu exprese CYP3A v játrech potkanů vystavených samostatně podanému benzo[a]pyrenu a Sudanu I. Specifická aktivita CYP3A, stanovená markerovou reakcí CYP3A, kterou je 6β- hydroxylace testosteronu, však předchozí výsledky potvrzuje jen u některých skupin premedikovaných potkanů. Celkově lze shrnout shrnout, že vystavení laboratorních potkanů oběma studovaným látkám s kancerogenním potenciálem vedlo k poklesu exprese jaterních CYP3A in vivo. Klíčová slova: cytochromy P450, benzo[a]pyren, Sudan I, exprese, enzymová aktivita
|
|
|
Charakterizace glykoforem haptoglobinu v lidském séru
Darebná, Petra ; Pompach, Petr (vedoucí práce) ; Ptáčková, Renata (oponent)
Charakterizace glykoforem haptoglobinu v lidském séru Petra Darebná (Katedra biochemie, Přírodovědecká fakulta, Univerzita Karlova v Praze, Česká republika) Změny v glykosylaci proteinů jsou spojovány s nádorovými onemocněními, především s hepatocelulárním a kolorektálním karcinomem. Tato práce se zabývá využitím na datech nezávislé analýzy pomocí iontově cyklotronové rezonance s Fourierovou transformací a tandemové hmotností spektrometrie s kapalinovou chromatografií a sledováním více reakcí ke kvantifikaci těchto změn u hepatocelulárního karcinomu, kolorektálního karcinomu a kolorektálního karcinomu s metastázemi do jater. V první fázi projektu byl haptoglobin směsných sér pacientů s hepatocelulárním karcinomem, kolorektálním karcinomem a kolorektálním karcinomem s metastázemi nabohacen pomocí hemoglobinu, imobilizovaného na aktivovanou CNBr Sepharosu 4B a následně purifikován pomocí vysokotlaké kapalinové chromatografie. Jednotlivé glykopeptidy haptoglobinu byly analyzovány pomocí iontově cyklotronové rezonance s Fourierovou transformací. V druhé fázi projektu byla použita pro analýzu změn glykosylace v závislosti na různém nádorovém onemocnění séra jednotlivých pacientů, u nichž byl částečně depletován albumin pomocí etanolového srážení. Jednotlivé fukosylované glykoformy N-glykopeptidů...
|
|
| |
|
|
Aplikační potenciál modifikačních metod (chemická činidla, foto-nanosondy) a hmotnostní spektrometrie pro studium struktury proteinů a jejich vzájemných interakcí
Ptáčková, Renata ; Šulc, Miroslav (vedoucí práce) ; Levová, Kateřina (oponent) ; Osička, Radim (oponent)
K pochopení fyziologické funkce proteinů je nezbytná znalost jejich prostorového uspořádání, studium konformačních změn a vzájemných interakcí. Chemické zesítění v kombinaci s hmotnostní spektrometrií představuje vhodnou doplňkovou techniku k běžným metodám strukturní biologie (RTG krystalografie, NMR spektroskopie), která umožňuje charakterizovat interakce v komplexech bílkovin za nativních podmínek. Předkládaná práce je zaměřena především na novou síťovací techniku založenou na in vivo inkorporaci analogu methioninu s foto-reaktivní funkční skupinou (foto-Met) do sekvence studovaného proteinu (tzv. proteinová foto-nanosonda). Interakce modelové dimerní molekuly proteinu 14-3-3zeta byla použita pro testování a optimalizaci přípravy proteinové foto-nanosondy a byla tak ověřena využitelnost této techniky k zachycení protein-proteinových interakcí. Byla řešena také interakce membránových hemoproteinů - cytochromu P450 2B4 a cytochromu b5. S využitím chemického zesítění a MS analýzy byla charakterizována vzájemná interakce katalytických domén cytochromů a byly nalezeny dvě možné prostorové orientace cytochromů. Nově zavedená technika síťování pomocí foto-Met umožnila zachytit různé oligomerní stavy katalyticky aktivního membránového komplexu a byl stanoven molární poměr cytochromů v identifikovaných...
|
|
|
Strukturní charakterizace interakce Nkr-p1f/Clrg
Tůmová, Lucie ; Kavan, Daniel (vedoucí práce) ; Ptáčková, Renata (oponent)
NK buňky jsou řazeny mezi lymfocyty, které se účastní primární odpovědi imunitního systému na viry infikované a nádorové buňky. Současně produkují cytokiny a zapojují se do tvorby sekundární imunitní odpovědi spolu s T a B lymfocyty. Tato diplomová práce se zabývá studiem struktury a interakce membránového receptoru Nkr-p1f spolu s ligandem Clr-g. Receptor Nkr-p1f má aktivační funkci a je schopen zahájit cytotoxickou funkci NK buněk. Trojrozměrná struktura byla vyřešena u homodimeru Clr-g, ale jeho interakce s receptorem dosud ne. Cílem práce bylo připravit produkční vektor celé extracelulární části receptoru Nkr-p1f a provést produkci Nkr-p1f a Clr-g v prokaryotickém expresním systému. Následně provést renaturaci a purifikaci proteinů in vitro. Tímto způsobem připravené proteiny byly analyzovány elektroforeticky a hmotnostní spektrometrií. Jejich interakce byla sledována biofyzikální metodou, povrchovou plasmonovou rezonancí (SPR). Avšak interakce mezi nimi nebyla technikou SPR odhalena.
|
|
|
Příprava expresního konstruktu receptoru NKp44
Hajná, Vladimíra ; Kavan, Daniel (vedoucí práce) ; Ptáčková, Renata (oponent)
NK buňky jsou součástí vrozeného imunitního systému. Jejich okamžitá reakce na patogen hraje roli hlavně při eliminaci nádorových či virem napadených buněk. V poslední době jsou NK buňky stále více předmětem různých studií, a to zejména různé formy jejich receptorů. Jednou skupinou receptorů NK buněk jsou receptory přirozené cytotoxicity (NCR), kam kromě dalších dvou členů patří také receptor NKp44. Receptory NCR hrají důležitou roli při aktivaci NK buněk. Receptor NKp44 je označován jako první receptor, který je specifický jen pro aktivované NK buňky. Ligandy receptoru NKp44 nejsou dosud zcela známé. Nedávný výzkum poukázal na jeden z možných ligandů, a to na protein PCNA, který překvapivě prostřednictvím tohoto receptoru působí inhibičně na funkce NK buňky. Cílem této práce bylo získat konstrukt kódující extracelulární část lidského receptoru NKp44. Byla provedena izolace RNA z buněčné linie NK-92MI, z níž byl následně pomocí PCR reakcí získán inzert DNA. Ten byl poté nejdříve ligován do klonovacího pBS vektoru a nakonec do produkčního pET vektoru. Ve výsledku byl tedy získán vektor pro expresi extracelulární části receptoru NKp44.
|
|
|
Pošta pro tebe-reality TV a sociální motivace participantů
Ptáčková, Renáta ; Bednařík, Petr (vedoucí práce) ; Gerbery, Juraj (oponent)
_Diplomova_prace_Ptackova_Renata Diplomová práce "Pošta pro tebe - reality TV a sociální motivace participantů" se zaměřuje na sociální užití televize. Popisuje podrobně žánr reality TV, zmiňuje jeho krátkou historii vysílání a soustředí se na motivační prvky jednotlivých participantů pořadu Pošta pro tebe. Zkoumá vliv a účinek médií a vztah mediovaných obsahů ke společnosti a realitě. Za pomoci dotazníků a rozhovorů analyzuje diváckou základnu a zkoumá důvody návštěvy diváků v televizním studiu a důvody televizních diváků, proč pořad vyhledávají v televizním programu a sledují ho. Zkoumá důvěryhodnost pořadu a ptá se diváků, zda by se oni sami stali účastníky pořadu. Dále práce zachycuje diváckou sledovanost a oblíbenost v jednotlivých letech svého vysílání. V neposlední řadě popisuje tvorbu pořadu, jeho zákulisí. Práce je členěna do 4 kapitol: Teoretický úvod práce (objasňuje pojmy, které jsou pro práci klíčové z hlediska tématu), Sledovanost (analyzuje žebříčky sledovanosti prvního kanálu České televize a demografickou skladbu publika), Zákulisí pořadu (popisuje průběh natáčení, role jednotlivých zúčastněných participantů, technické zázemí pořadu), Publikum (definuje, kdo je publikum a interpretuje dotazníky a rozhovory s publikem učiněné). Samozřejmostí je Úvod a Závěr práce. Na samotný konec...
|
host ::
RSS.