|
|
Vliv vybraných potravních doplňků na metabolismus karcinogenů přítomných v potravě
Fousová, Petra ; Hodek, Petr (vedoucí práce) ; Burdová, Kamila (oponent)
AABBSSTTRRAAKKTT Užívání potravních doplňků, a to především flavonoidů, může předcházet vzniku mnoha civilizačních chorob. Flavonoidy jsou schopné modulovat aktivitu cytochromů P450 (CYPs), enzymů podílejících se na první fázi metaboslismu cizorodých látek (xenobiotik), a tak ovlivňovat aktivaci a detoxikaci potravních karcinogenů. Inhibice aktivity těchto enzymů flavonoidy je intenzivně studována především z hlediska jejich využití při potlačení iniciační fáze během vzniku rakoviny. Na druhou stranu bylo také prokázáno, že flavonoidy mohou karcinogeny aktivovat, a to právě prostřednictvím jejich indukčního efektu na cytochromy P450. V první části této diplomové práce byl studován účinek flavonoidů dihydromyricetinu a α-napthoflavonu na aktivitu a expresi CYP1A1, a to buď v kombinaci s karcinogenem benzo[a]pyrenem (BaP) nebo samostatně. Za tímto účelem byly izolovány mikrosomální frakce z premedikovaných potkaních jater, tenkého a tlustého střeva, ve kterých byla následně stanovena indukce CYP1A1 použitím metody "Western blot" a bylo provedeno měření specifické aktivity cytochromů P450. V případech, kdy byl flavonoid podáván společně s BaP, docházelo v mikrosomech jater a tenkého střeva k silné indukci exprese CYP1A1. Množství detekovaného CYP1A1 proteinu bylo navíc téměř identické jako v případech, kdy...
|
|
|
Testování citlivosti bakterií na vybrané účinné látky ve školních podmínkách
Švehlová, Vendula ; Pavlasová, Lenka (vedoucí práce) ; Skýbová, Jana (oponent)
Tato práce představí metody zjišťující rezistenci bakterií vůči antibiotikům, vybraným, v domácnosti běžně používaným desinfekčním prostředkům a účinkům vybraných přípravků ústní hygieny. Tyto metody jsou koncipovány způsobem, který lze snadno uplatnit např. při biologickém praktiku na gymnáziích a středních školách. V rámci zjišťování rezistence bakterií na antibiotika se pracuje s antibiotickými disky a s pomůckami, které není obtížné pro školní laboratoře pořídit. Snadno se můžeme přesvědčit, které z používaných antibiotik má na bakterie největší účinnost, jaký desinfekční prostředek dále používat a který raději, vzhledem k jeho nízké účinnosti, nepořizovat. Dále otestujeme účinnost zubních past a ústních vod, kde bude opět k vidění, které prostředky jsou nejúčinnější a které nikoliv. Mechanismy účinků těchto látek a citlivostí bakterií se budu dále zabývat jak v teoretické, tak v praktické části práce. Klíčová slova: Antimikrobiální látky, rezistence, inhibice, agarové půdy, bakterie
|
|
|
Vliv sekundárních metabolitů (esenciálních olejů) na endofytické houby kolonizující listy Rhododendron tomentosum
Koudelková, Barbora ; Koukol, Ondřej (vedoucí práce) ; Žabka, Martin (oponent)
Rhododendron tomentosum je stálezelený keř, který je typický svým obsahem sekundárních metabolitů, především esenciálního oleje s antimikrobiálními účinky. Diverzita endofytických hub v tomto druhu a jejich případná adaptace na růst v prostředí esenciálního oleje je velmi málo prozkoumána. Prvním cílem této práce tedy bylo zmapovat diverzitu endofytických hub kolonizujících listy druhu R. tomentosum na sedmi lokalitách v ČR a jedné v Estonsku. Z listů R. tomentosum jsem izolovala a pomocí srovnání úseků ITS1 a ITS2 rDNA se sekvencemi z GenBank a morfologických znaků určila 37 druhů endofytických hub. Dominantní byly druhy široce rozšířené a vyskytující se jako endofyté v zástupcích většiny rostlin. Druhým cílem mé práce bylo zjistit, zda esenciální olej z R. tomentosum má vliv na jeho endofytické houby. Předpokladem bylo, že kmeny endofytických hub získané z R. tomentosum budou růstu v prostředí esenciálního oleje přizpůsobené a na médiích s přidanými různými koncentracemi těchto chemických látek tedy porostou lépe v porovnání s kmeny stejných druhů získaných z jiných substrátů. U čtyř ze sedmi testovaných druhů rostly kmeny získané z R. tomentosum rychleji, ale i na médiu bez chemických sloučenin. Většinu kmenů (z R. tomentosum i z jiných substrátů) také výrazněji inhibovala až nejvyšší...
|
|
|
Modulation of HIV-1 Protease Activity
Pokorná, Jana ; Konvalinka, Jan (vedoucí práce) ; Šedo, Aleksi (oponent) ; Ruml, Tomáš (oponent)
HIV-1 proteasa hraje zásadní roli v pozdní fázi životního cyklu HIV viru, kdy štěpí virové polyproteinové prekursory na strukturní a funkční proteiny. Pokud je účinně inhibována, HIV partikule zůstávají nezralé a neinfekční. Použití vysoce účinné antiretrovirové léčby (HAART) zahrnující proteasové inhibitory může snížit hladinu HIV-1 v plasmě pacientů pod detekční limit, a tak velmi významně zlepšit prognózu jejich onemocnění. Použití prvních inhibitorů bylo poznamenáno vážnými vedlejšími účinky, nízkou biologickou dostupností, nutnými vysokými dávkami léčiv a především rychlým rozvojem virové rezistence pod selekčním tlakem léčiv. Ve snaze překonat tyto komplikace byla vyvinuta druhá generace inhibitorů. Navzdory nespornému zlepšení, které přinesly do antiretrovirové léčby, je další vývoj nových velmi účinných HIV-1 proteasových inhibitorů s optimálními farmakokinetickými vlastnostmi, vysokou metabolickou stabilitou, minimalizovanými vedlejšími účinky a především s příznivým rezistenčním profilem vysoce žádoucí. V předkládané disertační práci je uveden přehled léků k léčbě HIV spolu s vývojem substituovaných metallakarboranů, nové třídy účinných, neobvyklých, nepeptidických inhibitorů HIV proteasy s terapeutickým potenciálem. Dále je analyzován vliv substitucí v protease na vývoj rezistence vůči...
|
|
|
Studium působení neurosteroidů na NMDA podtyp glutamátových receptorů.
Krausová, Barbora ; Vyklický, Ladislav (vedoucí práce) ; Bendová, Zdeňka (oponent)
N-methyl-D-aspartátové (NMDA) receptory jsou ionotropní glutamátové receptory zapojené v excitačním synaptickém přenosu, synaptické plasticitě a excitotoxicitě. Jsou to heteromerní komplexy tvořené GluN1 spolu s GluN2A-D a/nebo GluN3A-B podjednotkami, které jsou aktivovány glutamátem a glycinem. Mnoho alosterických modulátorů může ovlivnit aktivitu těchto receptorů, včetně neurosteroidů. Pregnanolon sulfát (3α5βS) je endogenní neurosteroid, který inhibuje NMDA receptory use-dependentním způsobem a má neuroprotektivní účinek. Vazebné místo pro 3α5βS na molekule NMDA receptoru není dosud známé. Cílem mé práce bylo kinetickou analýzou rychlosti návratu odpovědi po inhibici 3α5βS přispět k poznání vazebného místa, kde steroid působí a dále pomocí bodových mutací určit aminokyselinové zbytky, které by se mohly podílet na vazbě neurosteroidu. Pro studium účinku 3α5βS na NMDA receptory jsme prováděli elektrofyziologická měření na lidských embryonálních ledvinných 293T buňkách exprimujících rekombinantní GluN1/GluN2B receptory. Prokázali jsme napěťovou nezávislost inhibičního účinku 3α5βS na GluN1/GluN2B receptory. Z výsledků mé práce vyplývá, že steroidy mohou dosáhnout vazebného místa na NMDA receptoru spíše prostřednictvím membrány, nežli přímo z vodného prostředí. Podařilo se nám určit aminokyselinový zbytek...
|
|
|
Receptory NK buněk
Hernychová, Lucie ; Novák, Petr (vedoucí práce) ; Pavlů, Barbora (oponent)
NK buňky jsou důležitou součástí vrozeného imunitního systému, mají ovšem mnoho společných vlastností s imunokompetentními buňkami adaptivní imunity a mohou zároveň modulovat jejich činnost. Pomocí širokého spektra receptorů na svém povrchu rozpoznávají "cizí" molekuly (indukované především virovou nákazou či nádorovou transformací), jejich cílem jsou ale také struktury organismu vlastní, MHC glykoproteiny. Podle jejich množství na povrchu cílových buněk rozlišují, zda jsou tyto buňky infikované či transformované, pak indukují jejich apoptózu, nebo je vůči nim ustavena tolerance. Produkcí cytokinů a chemokinů též spouští zánětlivé odpovědi. Podle funkce lze rozdělit NK receptory do pěti skupin: aktivační, inhibiční, adhezivní, cytokinové a chemokinové. Na základě vazby příslušných ligandů na tyto receptory je buď spuštěna cytotoxická aktivita NK buňky, nebo je naopak inhibována. Funkce NK buněk je do jisté míry ovlivněna i mikroprostředím, ve kterém se právě vyskytují. Podle struktury se receptory NK buněk dělí na C-lektinové a imunoglobulinové. Do prvně zmíněné skupiny se řadí tři receptorové rodiny: Ly49, NKG2/CD94 a NKR-P1. Jsou to transmembránové proteiny typu II a převážně rozpoznávají MHC glykoproteiny. Mezi imunoglobulinové receptory patří rodiny KIR, LILR a NCR. Jedná se o transmembránové...
|
|
|
Inhibice Thymidin fosforylasy
Zákoucká, Eva ; Brynda, Jiří (vedoucí práce) ; Obšil, Tomáš (oponent)
1. Abstrakt Thymidin fosforylasa, také známá jako gliostatin nebo endotheliální růstový faktor odvozený z krevních destiček, je důležitý enzym metabolismu nukleosidů podílející se na degradaci a recyklaci DNA. Tento enzym katalyzuje reverzibilní fosforolýzu pyrimidin-2'- deoxynukleosidů na 2-deoxy-D-ribosa-1-fosfát a příslušnou nukleovou bázi a zároveň také katalyzuje přenos deoxyribosylů z pyrimidinových deoxynukleosidů k jiným nukleovým bazím za vzniku nového deoxynukleosidu a uvolnění báze z původního deoxynukleosidu. Thymidin fosforylasa je velmi zajímavým potenciálním terapeutickým cílem, jelikož se účastní se angiogenese, tedy tvorby nových cév, a to obzvláště v pevných nádorech mnoha různých tkání. Napomáhá tím výživě a růstu nádorů stejně jako vzniku metastází, tedy nových ložisek nádorů. Dále také inhibuje apoptózu, tedy řízenou smrt buňky, zejména nádorových buněk a degraduje některá protivirová a protinádorová léčiva. Kromě nádorových onemocnění je thymidin fosforylasa nadměrně produkována u dalších závažných onemocnění charakteristických tvorbou nových cév, jakými jsou například psoriáza, revmatoidní artritida nebo ateroskleróza. Omezení aktivity thymidin fosforylasy zejména selektivně v tkáních postižených uvedenými onemocněními by tedy mělo velmi rozsáhlý terapeutický význam. Proto byla na...
|
|
|
Antibakteriální účinky rostlinných olejů s obsahem mastných kyselin o střední délce řetězce
Laloučková, Klára ; Skřivanová, Eva (vedoucí práce) ; Rondevaldová, Johana (oponent)
Předložená diplomová práce se zabývá studiem antibakteriálních účinků rostlinných olejů s obsahem mastných kyselin o střední délce řetězce (MCFA). Minimální inhibiční koncentrace (MIC) osmi vybraných olejů byly stanoveny jako modus nejnižších zaznamenaných koncentrací olejů, které vedly k 80% úbytku růstu 13 kmenů patogenních a 6 komenzálních bakterií oproti kontrole. Testovány byly kokosový (Cocos nucifera), palmový (Elaeis guineensis), palmový červený (Elaeis guineensis), palmojádrový (Elaeis guineensis), Cuphea (C. lanceolata a C. ignea), babassu (Attalea speciosa, syn. Orbignya speciosa), tucuma (Astrocaryum vulgare) a muru-muru (Astrocaryum murumuru) olej. Jejich antibakteriální aktivita byla stanovena vůči bakteriím Bifidobacterium animalis, B. longum, Campylobacter jejuni, Clostridium perfringens, Enterococcus cecorum, Escherichia coli, Lactobacillus acidophilus, L. fermentum, Listeria monocytogenes, Salmonella enteritidis, S. infantis, S. typhimurium a Staphylococcus aureus. U všech olejů byly plynovou chromatografií identifikovány hodnoty koncentrací jednotlivých mastných kyselin v nich obsažených. MIC jednotlivých olejů byly stanoveny na základě mikrodilučního testu v 96-jamkové mikrotitrační destičce. Byla zjištěna nutnost štěpení vybraných olejů lipázou pro aktivaci jejich antibakteriálních účinků. Žádný z olejů nebyl účinným inhibitorem růstu gramnegativních bakterií ani po naštěpení. Palmový a palmový červený olej nebyl aktivní vůči žádnému z testovaných bakteriálních kmenů. Nejnižší stanovená MIC byla 0,14 mg/ml oleje tucuma vůči C. perfringens; ostatní oleje poté inhibovaly růst C. perfringens v koncentracích od 0,25 do 4,5 mg/ml. Kokosový, babassu, Cuphea, palmojádrový, muru-muru a tucuma olej inhiboval bakterie E. cecorum při koncentracích 1,12 - 4,5 mg/ml. Citlivost L. monocytogenes byla prokázána pouze u oleje ze semen rostliny Cuphea v koncentraci 1,12 mg/ml. MIC olejů inhibujících S. aureus nabývaly hodnot od 0,56 do 2,25 mg/ml a byly jimi kokosový, babassu, Cuphea, palmojádrový, muru-muru a tucuma olej. Příznivým efektem byla nezjištěná citlivost bakterií B. animalis, B. longum, L. acidophilus a L. fermentum vůči žádnému z testovaných olejů. Lze konstatovat, že rostlinné oleje s obsahem MCFA mají po naštěpení lipázou antibakteriální účinky vůči grampozitivním bakteriím, aniž by ovlivňovaly komenzální mikrobiotu trávicího traktu.
|
|
|
Vliv teplotních výkyvů na účinnost procesu deamonifikace při čištění odpadních vod
Fridrichová, Michala ; Švehla, Pavel (vedoucí práce) ; Vojtěch , Vojtěch (oponent)
Deamonifikace je biologický děj, při kterém je amoniakální dusík odstraněn z odpadní vody. Výhody oproti tradiční metodě nitrifikace/denitrifikace spočívají v úspoře energie na provzdušňování a nižší požadavky na organický substrát. Anammox bakterie, které deamonifikaci uskutečňují, jsou velmi citlivé. Jejich optimální teplota se pohybuje mezi 35 °C a 45 °C. Čištění odpadních vod však probíhá v praxi při nižších hodnotách. Tato diplomová práce byla zaměřena právě na vliv teplotních výkyvů na průběh a účinnost deamonifikace.
Pro pokus byl použit model s CSTR reaktorem zpracovávajícím upravenou kalovou vodu z anaerobní stabilizace kalu. Kalová voda z ÚČOV Praha byla ředěna vodovodní vodou a byl do ní přidáván dusitanový dusík. Anammox bakterie byly kultivovány ve formě suspenze (aktivovaného kalu), který byl získán z anammox reaktoru estonské univerzity v Tartu. Pokus trval 280 dní. Byl rozdělen do 3 etap podle měnící se teploty. Během první etapy byla průměrná teplota 23,3 °C, druhá dosahovala průměrně 27,5 °C a během třetí etapy byl nastaven teplotní pokles z 27 °C na 16,2 °C. Objemové zatížení Ncelk se pohybovalo mezi 0,024 až 0,174 kg/(m3.d).
S rostoucí teplotou se zvyšovala účinnost odstranění N-amon a N-NO2-. Byla potvrzena hypotéza, že anammox reaktor je možné úspěšně provozovat při nízkých teplotách (18,3 °C). Inhibice teplotou nastala při poklesu teploty na 16,2 °C. Snížila se účinnost odstranění N-amon, N-NO2-, N-NO3- i Ncelk. Anammox bakterie prokázaly schopnost vyrovnat se s krátkodobým (1 týden) teplotním poklesem. Po opětovném zvýšení z 16,2 °C na 23,9 °C projevily vysokou schopnost odstranění forem dusíku. Průměrná účinnost odstranění Ncelk byla 45,1 %. Vyšší průměrné účinnosti bylo dosaženo u odstranění N-amon, a sice 72,0 %. Během pokusu se podařilo odstranit 88,9 % N-NO2-. Ze získaných výsledků v laboratorním měřítku vyplývá, že anammox reaktor je možné v praxi provozovat při nízkých teplotách do 16,2 °C v případě, že inhibice způsobená poklesem teploty je krátkodobá.
|
|
|
Analysis of Thick Film Amperometrical Sensors Signal and Its Usage for Measurement and Characterization of Enzymes
Ondruch, Vít ; Kizek, René (oponent) ; Masojídek,, Jiří (oponent) ; Vrba, Radimír (vedoucí práce)
The principle of synchronous detection (SD) has been applied to biosensor measurement. SD principle achieves significant increases in the signal-to-noise ratio, limit of detection and overall measurement robustness. Application of SD in biosensor measurements improves the analysis of the response and avoids the influence of interference/noise produced by stirring, electromagnetic effects and influence of parasitic currents. SD also enables to decompose the signal to stimulation response and phenomena with long time of response and last but not least, to identify second-order phenomena in the signal. Linear statistical model was used to develop software for identification of the stimulation signal in the output current. SD was applied to the response signal of a Photosystem II complex (PSII) biosensor. PSII response to light stimulation follows first order kinetics. The inhibition kinetics of PSII has been studied. Kinetic constants of herbicide binding to PSII depend linearly on herbicide concentration and enable measurement of its concentration at low concentrations.
|
host ::
RSS.