|
Vliv hypolipidemické terapie na endoteliální dysfunkci a časné aterogenní změny ve stěně cévy u experimentálních modelů aterosklerózy II.
Steňková, Miroslava ; Nachtigal, Petr (vedoucí práce) ; Semecký, Vladimír (oponent)
Ateroskleróza, neboli "kornatění tepen", je degenerativním onemocněním cév. Ateroskleróza se někdy označuje jako "nemoc 20. století". Dvojnásobně knokautované myši (apoE/LDL - receptor double - knockout) reprezentují nový model, který je schopen rozvinout závažný stupeň hyperlipidémie a aterosklerózy. Bylo zjištěno, že u myší apoE/LDLr-DKO dokonce i běžná strava vede k výraznější progresi aterosklerózy než u myší, které mají poruchu jen v apoE apoproteinu. Statiny (nebo-li kompetitivní inhibitory 3-hydroxy-3-methylglutarylkoenzym A-reduktázy) patří v současné době mezi nejúčinnější a celosvětově nejpoužívanější hypolipidemika s příznivými účinky na hladiny sérových lipidů i celkovou a kardiovaskulární mortalitu. Snižují především hladiny celkového cholesterolu a LDL cholesterolu. Cílem této diplomové práce bylo ověřit, zda atorvastatin vykazuje u apoE/LDL-receptor deficientních myší podobné účinky, jako je tomu v humánní medicíně. K tomu byly sledovány parametry lipidového spektra v krvi, exprese zánětlivých markerů v aterosklerotických plátech a velikost aterosklerotických lézí. U všech myší byl zahájen výkrm experimentálními dietami ve věku 8 týdnů. Zvířata byla náhodně rozdělena do 2 skupin, kontrolní, které byla podávána pouze aterogenní dieta, a atorvastatinové, které byla podávána aterogenní...
|
|
Vliv hypolipidemické terapie na endoteliální dysfunkci a časné aterogenní změny ve stěně cévy u experimentálních modelů aterosklerózy I.
Tlapalová, Barbora ; Nachtigal, Petr (vedoucí práce) ; Kopecký, Martin (oponent)
Ateroskleróza, neboli "kornatění tepen" je degenerativním onemocněním cév. Ateroskleróza se někdy označuje jako "nemoc 20. století". Dvojnásobně knokautované myši (apoE/LDL - receptor double - knockout) reprezentují nový model pro studium aterogeneze, který je schopen rozvinout závažný stupeň hyperlipidémie a aterosklerózy. Statiny (nebo-li kompetitivní inhibitory 3-hydroxy-3-methyl-glutaryl-koenzym A- reduktázy) patří v současné době mezi nejúčinnější a celosvětově nejpoužívanější hypolipidemika s příznivými účinky na hladiny sérových lipidů i na celkovou a kardiovaskulární mortalitu. Snižují především hladiny celkového cholesterolu a LDL cholesterolu. Cílem této diplomové práce bylo ověřit, zda atorvastatin vykazuje u apoE/LDL- receptor deficientních myší podobné účinky jako je tomu v humánní medicíně. K tomu byly sledovány parametry lipidového spektra v krvi, exprese zánětlivých markerů v aterosklerotických plátech a velikost aterosklerotických lézí. U všech myší byl zahájen výkrm experimentálními dietami ve věku 8 týdnů. Zvířata byla náhodně rozdělena do 2 skupin: kontrolní, které byla podávána pouze aterogenní dieta, a atorvastatinové, které byla podávána aterogenní dieta obohacena o 10 mg atorvastatinu na 1kg váhy denně. Výsledky prokázaly, že osmitýdenní podávání 10 mg/kg atorvastatinu...
|
|
Studies of NK cell receptors and other proteins using recombinant expressions and mass spectrometry
Kavan, Daniel
Receptor CD69 je považován za marker aktivovaných lymfocytů a je exprimován na všech místech aktivní imunologické odpov diě . Fyziologicky se vyskytuje jako disulfidicky vázaný homodimer, ovšem z modelu je patrné, že k dimerizaci krom disulfidického m stku značnou mírou p ispívá také kontaktě ů ř Q93 jedné a D88 spolu s E87 na druhé podjednotce a ješt výrazn jiě ě R134 jedné a A136 a Y135 druhé. Na základ tohoto pozorování byly Q93, R134 nebo oboje mutoványě na alaniny a následn ukázáno, že jako monomer se chovala jen dvojnásobn zmutovanáě ě forma. Tato skutečnost m la také významný vliv na vazbu sacharidových ligand , neboě ů ť monomerní forma vykazovala výrazn nižší afinitu ke GlcNAcu (ě Kd ádov 10ř ě -5 M), než forma dimerní (Kd ádov 10ř ě -6 M) nebo dokonce delší kovalentn dimerní konstruktyě (Kd ář dov 10ě -7 M). Oproti pozorovanému kratšímu času eluce z gelov filtrační kolonyě po vysycení receptoru ligandem (GlcNAc), který by mohl naznačovat zm nu struktury,ě však experimenty v analytické ultracentrifuze neukázaly žádnou zm nu sedimentačníhoě koeficientu, podobn ani porovnání nam ených HSQC NMR spekter p ed a po vysyceníě ěř ř ligandem neodhalily žádné výrazné zm ny.ě Vodíko-deuteriová vým na je chemický d j, p i kterém je kovalentně ě ř ě vázaný atom vodíku vym n n za deuterium, nebo...
|
|
Expression and function of molecules of innate system in embryonal phagocytes
Vavrochová, Tereza ; Filipp, Dominik (vedoucí práce) ; Černý, Jan (oponent)
(CZ) Embryonální fagocyty představují směs myeloidních buněk, které se liší od linie dospělých makrofágů svým původem, fenotypem a biochemicky. Ukazuje se, že embryo je postupně osidlováno nejméně třemi populacemi makrofágů: první z nich pochází od matky a následující dvě z extraembryonálního žloutkového váčku. Prokázán je také výskyt raných embryonálních fagocytů u evolučně rozdílných druhů v hlavovém mezodermu, jejichž původ není doposud objasněn. Různorodost embryonálních fagocytů ve spojení s nedostatkem jejich specifických markerů neumožnuje rozlišovat tyto buňky na základě fenotypu a znesnadňuje studium jejich potenciálně rozdílných fyziologických funkcí v embryonálním vývoji. Cílem této práce je identifikovat nové markery vhodné pro fenotypovou charakterizaci embryonálních fagocytů. Pomocí analýzy qRT-PCR jsme stanovili kinetiku exprese receptorů skupiny Toll (TLRs) a jejich adaptérových proteinů obsahujících TIR doménu v průběhu rané embryogeneze (E7,5-E12,5) a prokázali jsme, že jsou produkovány fagocytickými buňkami. Pomocí imunohistochemie na celém embryu jsme taktéž prokázali, že Sigirr, negativní regulátor TLR signalizace, je rovnoměrně exprimován v embryonálních tkáních během raného vývoje. Přibližně 0,7-1% buněk v embryu starém 10,5 dne tvoří makrofágy charakterizované povrchovou...
|
|
Immunogenní smrt nádorových buněk způsobená volným a na polymer navázaným doxorubicinem
Kabešová, Martina ; Kovář, Lubomír (vedoucí práce) ; Anděra, Ladislav (oponent)
Imunogenní smrt nádorových buněk způsobená volným a na polymer navázaným doxorubicinem Polymerní vodorozpustné nosiče léčiv založené na N-(2-hydroxypropyl)methakrylamidu (HPMA) byly vyvinuty tak, aby omezily nežádoucí vedlejší účinky volných, systémově působících cytostatických léčiv. Konjugáty na bázi HPMA se samy pasivně akumulují v nádorové tkáni díky efektu zvýšené propustnosti nově vznikajících cév a omezené tvorbě lymfatické drenáže v nádoru (EPR, Enhanced Permeability and Retention Effect). Aktivní akumulace můžeme docílit tím, že na polymerní kostru navážeme směrující strukturu, která rozpoznává nádorově specifický ligand. Konjugace volného doxorubicinu na polymerní nosič HPMA podstatně snižuje jeho nespecifické vedlejší účinky in vivo při zachování efektivního protinádorového účinku in vitro a in vivo. Mimo přímé cytotoxické účinky na nádorové buňky mají HPMA kopolymery s doxorubicinem i imunostimulační vlastnosti a dokážou navodit dlouhodobou protinádorovou imunitu u léčených myší Nedávné studie ukázaly, že volný doxorubicin indukuje v nádorových buňkách imunogenní apoptózu. Takto zabité buňky umírají buněčnou smrtí, která nese charakteristické znaky apoptózy, ale jsou schopny aktivovat imunitní systém a vyvolat tak protinádorovou imunitní reakci. Tento jev byl popsán jako klíčový pro...
|
|
Vliv imunologických faktorů na úspěšnost IVF/ET
Růžičková, Žaneta ; Madar, Jindřich (vedoucí práce) ; Pěknicová, Jana (oponent)
4 Abstrakt Cílem této práce bylo zjistit přítomnost receptorů (CD16, CD161, NKG2D, KIR2DL4 a CD85j) na povrchu imunokompetentních buněk, a zda má přítomnost těchto receptorů nějakou souvislost s úspěšností in vitro fertilizace (IVF) a následného embryotransferu (ET). Pozorovali jsme signifikantní rozdíl ve věku úspěšných proti neúspěšným pacientkám. Tento rozdíl pozorovaný v naší studii potvrzuje dříve studovaný jev závislosti věku na úspěšnosti IVF. Výsledek cytotoxické eseje nám potvrdil, že ani stimulační protokol, ani zdroj PBMC nemá vliv na cytotoxickou efektorovou funkci izolovaných buněk. Poté jsme provedli rozsáhlou analýzu povrchových znaků odlišných buněčných subpopulací. V první řadě bylo podstatné srovnání pacientek se zdravými dárkyněmi. Buňky nesoucí HLA-G vázající receptory KIR2DL4 i CD85j na které jsme se v této studii zaměřili, se u obou skupin pacientek vyskytují ve snížené míře. Dále jsme pozorovali rozdíly v expresi KIR2DL4 a CD85j na povrchu různých buněčných subpopulací (CD56+dim , CD56+bright , T buněk, cytotoxických T buněk)a v jejich zastoupení. Zde jsme pak pozorovali rozdíly v povrchové expresi CD56 na CD56+bright NK buňkách, výskyt CD56+dim NK buněk v PBMC (exprese CD16 na této subpopulaci), výskyt CD56+dim Další krokem bylo srovnání zastoupení buněčných subpopulací u úspěšných a...
|
|
Implication of the Gabaergic System in Altered Responses to Stress Associated to Maternal Separation
Martišová, Eva ; Pávek, Petr (vedoucí práce) ; Štaud, František (oponent)
IN CZECH (SOUHRN PRÁCE) Summary in Czech (Souhrn práce) 2 Tato práce se zabývá zapojením GABAergního systému do změněné reakce na stres vyvolané maternální separací u potkana. Cílem práce bylo studovat vliv maternální separace na GABAergní systém, přesneji na biochemické markery tohoto systému (hladiny GABA neurotransmiteru, exprese GABAA receptorů), a studovat na pohlaví závislé rozdíly v chování a neurochemických procesech u potkana indukované maternální separací. Aby bylo možné sledovat výše zmíněné cíle, nejprve bylo nutné vyvinout model maternální separace u potkana. Mláďata potkana byla separována od matky po dobu tří hodin denně od postnatálního dne 2 do postnatálního dne 21 (v postnatálním období, kdy jsou snížené schopnosti reagovat na stresove stimuly). V postnatální den 23 byla odstavena, rozdělena do skupin stejného pohlaví a bez významných manipulací ponechána vyrůst do dospělosti. Po dosažení dospělosti (> 60 dní) byli potkani rozděleni do dvou skupin. První skupina byla usmrcena dekapitací a jednotlivé regiony mozkové tkáně (přední a spánková kůra mozková, corpus striatum a hippocampus) byly použity ke stanovení hladin GABA vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií a ke stanovení míry exprese GABAA receptorů western blot technikou. Druhá skupina byla podrobena Porsolt forced swimming...
|
|
P-selektin-nový protein hemostáze
Hrachovinová, Ingrid ; Brdička, Radim (vedoucí práce) ; Kvasnička, Jan (oponent) ; Penka, Miroslav (oponent)
P-selektin - nový protein v hemostáze RNDr. Ingrid Hrachovinová ABSTRAKT P-selektin je znám.jako adhezivní glykoprotein se vztahem k zánětlivé reakci organismu. První práce o možném vztahu P-selektinu ke krevnímu srážení byly publikovány v polovině devadesátých let. Popisovaly pokusy, kde inhibující protilátky P-selektinu způsobily blokování vzniku fibrinu a potlačily růst krevních sraženin. Bylo prokázáno, že P-selektin zvyšoval expresi tkáňového faktoru (TF) na monocytech. K potvrzení úlohy P-selektinu v hemostáze také přispělo naše zjištění, že nadprodukce solubilního P-selektinu (sP-sel) vede k hyperkoagulačnímu stavu krevní plazmy. Ve své disertační práci jsem se zabývala patofyziologií sP-sel a funkcí mikropartikulí s navázaným TF. Podrobnou studií účinku sP-sel jsme zjistili, že za hyperkoagulační stav plazmy jsou zodpovědné prokoagulační mikropartikule (MPs), z nichž část nese na svém povrchu TF. Potvrdili jsme, že nedávno popsaný "blood-borne TF", tj. cirkulující aktivní TF, může být indukován sP-sel. Produkce MPs byla potlačena "inhibující" protilátkou proti PSGL-1, což je transmembránový receptor P-selektinu přítomný na monocytech a granulocytech. Tím jsem prokázala, že MPs se rekrutují z monocytárních buněk při vazbě P-selektinu na receptor PSGL-1. Zjištěných skutečností, že sP-sel produkuje...
|
|
Použití vícekanálové průtokové cytometrie v biomedicíně a experimentální biologii
Kideryová, Linda ; Smetana, Karel (vedoucí práce) ; Elleder, Milan (oponent) ; Klíma, Jiří (oponent)
Průtoková cytometrie je laboratorní metoda umožňující kvantitativně i kvalitativně analyzovat velké množství buněk v suspenzi. Zprostředkovává informaci o jejich velikosti a granularitě, identifikuje buňky pomocí fluorescenčně značených protilátek specifických pro jejich povrchové i vnitrobuněčné receptory. Tento projekt byl zaměřen na buněčné populace, jejichž analýza je komplikována nejasným imunofenotypem či extrémně malým zastoupením ve zkoumaném vzorku. Analýza stromálních fibroblastů zkoumaných tumorů (benigní a maligní histiocytomy, bazaliom, spinaliom) přispěla k pochopení regulace genové exprese způsobené nádorovým prostředím. Stromální fibroblasty zkoumaných nádorů vykazují schopnost vytvářet prostředí vážně modifikující fenotyp normálních epiteliálních keratinocytů, které získávají fenotyp podobný nádorovým buňkám. Byla zavedena reprodukovatelná, rychlá a vysoce senzitivní metoda detekce extrémně vzácných nehematopoetických buněk. Počty CFU-En nekorelují s průtokově-cytometricky stanovenými počty CEC ani EPC. Tyto kolonie jsou utvářeny za součinnosti CD14+ monocytů a CD4+ T lymfocytů. Počty CEC a EPC jsou v úzkém vztahu s poškozením cévního endotelu působeného systémovými onemocněními. Jejich zastoupení se dále mění v reakci na aktuální stav onemocnění. Naše pozorování mohou mít značný vliv v...
|
|
Použití vícekanálové průtokové cytometrie v biomedicíně a experimentální biologii
Kideryová, Linda
Linda Kideryová POUŽITÍ VÍCEKANÁLOVÉ PRŮTOKOVÉ CYTOMETRIE V BIOMEDICÍNĚ A EXPERIMENTÁLNÍ BIOLOGII Abstrakt disertační práce SOUHRN Průtoková cytometrie je laboratorní metoda umožňující kvantitativně i kvalitativně analyzovat velké množství buněk v suspenzi. Zprostředkovává informaci o jejich velikosti a granularitě, identifikuje buňky pomocí fluorescenčně značených protilátek specifických pro jejich povrchové i vnitrobuněčné receptory. Tento projekt byl zaměřen na buněčné populace, jejichž analýza je komplikována nejasným imunofenotypem či extrémně malým zastoupením ve zkoumaném vzorku. Analýza stromálních fibroblastů zkoumaných tumorů (benigní a maligní histiocytomy, bazaliom, spinaliom) přispěla k pochopení regulace genové exprese způsobené nádorovým prostředím. Stromální fibroblasty zkoumaných nádorů vykazují schopnost vytvářet prostředí vážně modifikující fenotyp normálních epiteliálních keratinocytů, které získávají fenotyp podobný nádorovým buňkám. Byla zavedena reprodukovatelná, rychlá a vysoce senzitivní metoda detekce extrémně vzácných nehematopoetických buněk. Počty CFU-En nekorelují s průtokově-cytometricky stanovenými počty CEC ani EPC. Tyto kolonie jsou utvářeny za součinnosti CD14+ monocytů a CD4+ T lymfocytů. Počty CEC a EPC jsou v úzkém vztahu s poškozením cévního endotelu působeného...
|
host ::
