|
Studium inkorporace modifikovaných aminokyselin do cytochromu b5
Koberová, Monika ; Hodek, Petr (vedoucí práce) ; Pavlásková, Kateřina (oponent)
Cytochrom b5 (cyt b5) může ovlivňovat reakce katalyzované cytochromy P450, a v důsledku toho se může podílet i na aktivaci látek (například léčiv, karcinogenů) případně ovlivňovat poměry vzniklých metabolitů. Mechanismu působení cyt b5 ještě nebyl zcela objasněn. Přínosem k objasnění mechanismu by mohlo být zjištění protein-proteinových interakcí v monooxygenasovém systému, kterého je tento protein součástí. Pro studium těchto interakcí pomocí síťovacích technik je vhodné připravit fotolabilní cyt b5, který by se po fotoaktivaci stal vysoce reaktivním a vytvořil by komplex s nejbližšími složkami v monooxygenasovém systému.Tato práce se zabývá vypracováním metody pro produkci rekombinantního cyt b5 s modifikovanými aminokyselinami. Cyt b5 byl exprimován v bakteriálním kmeni E.coli BL-21 (DE3) Gold. Před indukcí exprese byly bakterie převedeny do limitního media (DMEM-LM), které neobsahovalo L-leucin a L-methionin. Limitní mediu bylo doplněno modelovou deuterovanou aminokyselinou d3-methyl-L-methioninem a D,L-leucinem. Exprimovaný cyt b5 byl izolován a inkorporace d3-methyl-methioninu byla ověřena hmotnostní spektrometrií. V úvodních experimentech byl cyt b5 získán převážně jako apoprotein (apo-cyt b5). Pro zvýšení inkorporace hemu do apo-cyt b5 byl studován vliv teploty na inkorporaci hemu při...
|
| |
|
Gelace hydroxyethylcelulózy a hyaluronanu kyselinou citronovou
Martinková, Martina ; Krouská, Jitka (oponent) ; Hurčíková, Andrea (vedoucí práce)
Diplomová práce pojednává o gelaci hydroxyethylcelulózy a hyaluronanu netoxickým síťovacím činidlem – kyselinou citronovou. Nejprve byl optimalizován postup gelace samotné hydroxyethylcelulózy s kyselinou citronovou. Po získání produktů splňujících především nerozpustnost v ultračisté deionizované vodě byly připraveny roztoky obsahující směs hyaluronanu a hydroxyethylcelulózy ve dvou různých poměrech. Dále byl připraven roztok obsahující jako polymerní složku pouze hyaluronan. Kyselina citronová byla využita v koncentracích 5 %, 10 % a 20 % (w/w polymeru). Tyto roztoky polymerů a kyseliny citronové byly gelovány za stejných podmínek a následně srovnávány využitím analytických metod diferenční kompenzační kalorimetrie, termogravimetrické analýzy a infračervené spektrometrie s Fourierovou transformací. Za zesítěné hydrogely s požadovanými vlastnostmi byly považovány ty, obsahující ve své struktuře hydroxyethylcelulózu, dále pak hyaluronan a hydroxyethylcelulózu v hmotnostním poměru 3 : 7.
|
|
Geometrie život podporujících forem v architektonickém návrhu
Volnohradský, Radan
Proces vizuálního vnímání, popsaný v první stati, podrobněji zkoumá neuroestetika, která se stává pojítkem k pochopení přijímaných obrazů a reakcí v mozku. V této souvislosti poukazuje na význam a krásu fraktálních struktur. Fraktály a jejich aplikace například v urbanistickém návrhu jsou náplní další kapitoly. Dále je pozornost zaměřena na objasnění harmonických poměrů (především úlohu zlatého řezu) a geometrických forem, kteréžto v sobě často fraktální struktury obsahují. Je nastíněna základní pythagorejská geometrie se svými metafyzickými aspekty. Ty v sobě uchovává i tajemný obrazec květu života a jeho geometrický přerod v platónská tělesa, jakožto matricí vesmíru. Nakonec je odkryt a odůvodněn vztah zmíněných geometrii s architektonickým návrhem.
|
|
Testování ochrany transformátoru
Judas, Jan ; Těžký, Jiří (oponent) ; Orságová, Jaroslava (vedoucí práce)
Cílem bakalářské práce bylo chránění transformátoru, konkrétně pak rozdílová ochrana transformátoru, její princip funkce, stabilizace a vypínací charakteristika. Byl navrhnut způsob měření vypínací charakteristiky ochrany SPAD 346 C od firmy ABB. K měření bylo použito testovací zařízení TZO3, které bylo stejně jako testovaná ochrana nastavováno počítačem, do kterého byli také následně ukládány výsledky jednotlivých měření. Testování bylo provedeno zkouškou typu „TREND“ pro tři různá nastavení vypínací charakteristiky ochrany a zároveň bylo každé nastavení proměřeno pro dvě různé strmosti trendové zkoušky. Byly nastaveny dvě mezní vypínací charakteristiky a třetí charakteristika byla nastavena přibližně doprostřed mezi dvě mezní nastavení. Byl ukázán výpočet chyby měření. A protože byly použity dvě strmosti trendové zkoušky, byl také proveden přibližný výpočet reakční doby ochrany. Všechny naměřené a vypočtené hodnoty byly vyneseny do grafů, z kterých byl vidět rozdíl v jednotlivých měřeních. Také byly vysvětleny a spočítány možnosti eliminace nárůstu proudu během reakční doby ochrany při strmějším růstu trendové zkoušky.
|
|
Syntéza derivátů beta-cyklodextrinu pro medicinální aplikace
Popr, Martin ; Jindřich, Jindřich (vedoucí práce) ; Veselý, Jan (oponent)
Syntéza monosubstituovaných derivátů β -cyklodextrinu pro medicinální aplikace Abstrakt Tato diplomová práce se zabývá syntézou série derivátů β-cyklodextrinu, které jsou potenciálně využitelné pro konstrukci kontrastních látek MRI nové generace. Základní skelet β-CD je nejprve selektivně persubstituován v polohách 6 a vybaven azidovými skupinami. V dalších krocích je per-6-azido-β-CD monosubstituován na sekundárním okraji makrocyklu. Jako vhodná činidla pro derivatizaci byly vybrány (E)-cinnamylbromid a propargylbromid. Monosubstituční reakce poskytuje vždy dva regioisomery, se substituentem v poloze 2I -O- a 3I -O-. Tyto se podařilo, po následné peracetylaci zbylých hydroxylových skupin, od sebe úspěšně separovat pomocí sloupcové chromatografie. Deriváty s cinnamylovou skupinou byly následně oxidativně převedeny na 2I -O-, 3I -O-formylmethyl- a 3I -O-karboxymethyl- deriváty. Dále byla ověřena možnost spojení derivátu obsahující aldehydovou funkci s vhodným substrátem pomocí reduktivní aminace. Klíčová slova: cyklodextriny, monosubstituce, cinnamyl, propargyl, formylmethyl, karboxymethyl, reduktivní aminace, kontrastní látky, tomografie magnetické rezonance
|
|
Klonování a exprese lidské karbonylreduktasy CR-1
Laštovková, Linda ; Wsól, Vladimír (vedoucí práce) ; Šimůnek, Tomáš (oponent)
Purifikace plasmidu pOTB7 s kódovou sekvencí karbonylreduktasy 1 (CBR1) v buňkách Escherichia coli (E. coli) byla provedena metodou alkalické lýze. Sekvence CBR1 byla namnožena metodou polymerasové řetězové reakce (PCR) za přítomnosti navržených primerů. Levý primer obsahoval restrikční místo pro restrikční endonukleasu NdeI a pravý primer pro restrikční endonukleasu XhoI. Správnost výsledků prvního kroku byla potvrzena ověřením velikosti nasyntetizovaného fragmentu a následně restrikční analýzou pomocí restrikční endonukleasy BamHI. Takto připravená kódová sekvence CBR1 byla ligována do vektoru Topo, který byl dále následně transformován do kompetentních buněk E. coli. Po namnožení E. coli byl vektor Topo obsahující kódovou sekvenci CBR1 purifikován metodou alkalické lýze. Úspěšnost druhého kroku byla ověřena porovnáním velikosti cyklického vektoru Topo bez vloženého insertu a vektoru Topo s kódovou sekvencí CBR1 na agarózovém gelu a následnou restrikční analýzou pomocí restrikční endonukleasy BamHI. Posledním krokem byla subklonace kódové sekvence CBR1 z vektoru Topo do expresního vektoru pET15b.
|
|
Syntax-based extraction of component behavior specifications
Reidinger, Josef ; Šimko, Viliam (oponent) ; Poch, Tomáš (vedoucí práce)
Pro velké softwarové systémy je možné použít komponentový způsob vývoje. Jeho výhody jsou, že lze snadno části použít opakovaně a pokud obsahuje i popis chování, tak lze systém snadněji analyzovat. Komponenty jsou tvořeny popisem rozhraní a volitelně popisem chovaní. Popis chování je možné zkoumat na porušení omezení jiných komponent při jejich použití, jestli chování je očekávané a jestli komponenty k sobě pasují. Popis chování definuje omezení použítí komponenty a jak reaguje na zavolaní každé své poskytované metody. Reakce popisuje pořadí a četnost volání metod požadovaných komponent. Manuální definování chovaní komponenty je náchylné k chybám a mělo by se zautomatizovat. Výsledkem této práce je nástroj který z kódu, který splňuje omezení, je schopen vygenerovat automaticky popis chování. Nástroj je možné použít pro automatické generování popisu chování při převodu běžného softwaru na komponenty nebo při úpravě komponenty ke kontrole změny chování změnené komonenty. Práce také obsahuje prozkoumání možných technologií využitelných pro analýzu. Nástroj je součástí mezinárodního Q-Impress projektu a využívá jeho nástroje pro svoji funkci a naopak.
|
|
REAKCE TRHU PRÁCE MĚSTA KLADNA NA INDUSTRIÁLNÍ ÚPADEK V 90. LETECH MINULÉHO STOLETÍ
Kalousová, Lucie ; Kotýnková, Magdalena (vedoucí práce) ; Vebrová, Ludmila (oponent)
Cílem diplomové práce je určení vlivu úpadku hlavních zaměstnavatelů v regionu Kladno na lokální trh práce. Práce zkoumá vývoj a příčiny změn nezaměstnanosti v tomto regionu v letech 1996 až 2014 a snaží se zhodnotit, nakolik historická zátěž regionu ovlivňuje současný stav trhu práce. Pro tyto účely je diplomová práce rozdělena na dvě části. První část, teoretická, je zaměřena na definici pojmu nezaměstnanost a na vývoj české ekonomiky v období transformace s důrazem na změny struktury zaměstnanosti. Zmíněna je i historie města Kladna, kladenského hutnictví a hornictví. Ve druhé části, praktické, je pak provedena demografická analýza a samotná analýza nezaměstnanosti a trhu práce s pomocí dat ČSÚ, MPSV, strategických dokumentů města Kladna a SWOT analýzy. Součástí jsou rovněž osobní rozhovory s experty z lokálních institucí zabývajících se ekonomicko-sociálními aspekty kladenského regionu, jejichž cílem bylo získat základní stavební kameny analýzy a zároveň potvrdit závěry této práce.
|
|
Modular synthesis of N-heteroaromatic cations by (2+2+2) cycloaddition
Čížková, Martina ; Teplý, Filip (vedoucí práce) ; Kotora, Martin (oponent) ; Potáček, Milan (oponent)
5 Abstract N-Heteroaromatic cations represent a family of compounds with diverse application potentials including natural products, DNA probes, fluorescence dyes, herbicides, ionic liquids, organocatalysts, etc. The preparation of these species proceeds mainly through N-alkylation which is used mostly as a last step of the synthetic sequence. Only limited diversity of cationic substrates can be achieved with this manner, hence, searching for other methods leading to novel Nheteroaromatic cations is of great interest. Some examples of transition metal-catalyzed transformations on organic cations have appeared over the last two decades including Suzuki- Miyaura reaction, Sonogashira and Stille coupling, oxidative homocoupling, ring-closing metathesis, etc. Here, the successful construction of new N-heteroaromatic cations by [2+2+2] cycloaddition is presented. A methodology for the synthesis of novel pyridine-type organic monocations was developed using gaseous acetylene as a reaction partner in the cyclization step. Subsequently, the double [2+2+2] cycloaddition was utilized for the preparation of oligo-p-phenylenes with two to seven para connected phenylene units. Furthermore, the intramolecular version of the cyclization step led to two helical and four linear dications which can be considered as extended...
|
host ::
