|
Aktivita biotransformačních enzymů u muflonů s dikroceliózou a u zdravých muflonů
Urbánková, Marie ; Szotáková, Barbora (vedoucí práce) ; Gavelová, Martina (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Vědní obor: Patobiochemie a xenobiochemie Titul, jméno, příjmení kandidáta: Mgr. Marie Urbánková Titul, jméno, příjmení konzultanta: Ing. Barbora Szotáková, Ph.D. Název rigorózní práce: Aktivita biotransformačních enzymů u muflonů s dikroceliózou a u zdravých muflonů Abstrakt In vitro aktivita cytochromů P450 (7-alkyl/aryloxyresorufindealkyl(aryl)asy, testosteronhydroxylasa/oxidasa, 7-methoxy-4-trifluoromethyl-kumarindemethylasa), flavinmonooxygenasy (vůči thiobenzamidu), reduktas karbonylové skupiny (vůči oracinu, 4-pyridinkarboxaldehydu, 1-acenaftenolu, DL-glyceraldehydu, ketoprofenu, naloxonu, daunorubicinu, metyraponu) a konjugačních enzymů (p-nitrofenol-UDP- glukuronosyltransferasa, 1-chloro-2,4-dinitrobenzenglutathion-S-transferasa) byla sledována a porovnávána u starých muflonek (Ovis musimon, Bovidae) zdravých a nemocných dikroceliózou, jejímž původcem je motolice kopinatá (Dicrocoelium dendriticum). Byly použity metody spektrofotometrické, spektrofluoritmetrické a metody inkubace enzymů s relativně specifickým substrátem s následnou HPLC analýzou produktů biotransformace. Ke stanovení obsahu bílkovin byla použita metoda redukce BCA, výsledky ukazují, že koncentrace bílkovin jak v mikrosomální tak cytosolické...
|
|
Study of antioxidant and cytoprotective effects of intracellular iron chelators in catecholamine-induced cardiomyocyte injury
Koubková, Lucie ; Šimůnek, Tomáš (vedoucí práce) ; Boušová, Iva (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Hrálové Katedra biochemických věd Kandidát: Lucie Koubková Školitel: Profa . Dra . Natércia Teixeira Profa . Dra . Georgina Correia da Silva Doc. Pharm.Dr. Tomáš Šimůnek, Ph.D. Název diplomové práce: Hodnocení antiaromatázové aktivity isoflavonoidů obsažených v biotransformované soji Rakovina prsu patří u žen mezi nejčastěji diagnostikované nádory. Přibližně 60% nádorů prsu je tzv. hormon dependentní, mající na svém povrchu estrogenní receptory a vyžadující estrogeny ke svému růstu. Estrogeny jsou schopné podporovat transkripci genů účastnících se buněčné proliferace. Aromatáza je enzym katalyzující poslední krok biosyntézy estrogenů a její inhibice je považována za důležitý cíl v léčbě na estrogenu závislých nádorů prsu. Sója je zdrojem tzv. fytoestrogenů jako jsou genistein a daidzein. O těchto látkách se předpokládá, že by mohly být účinné v prevenci karcinomu prsu, avšak mechanismus jejich působení není plně pochopen. Tato práce je zaměřena na zhodnocení efektu extraktu sóji obsahující genistein a daidzein na aktivitu výše zmíněného enzymu. Výsledky ukázaly, že tento extrakt inhibuje aromatázu na dávce závislým způsobem, jednak v pokusech s placentálními mikrozomy, tak i v případě buněčné linie MCF-7aro. V pokusech s placentálními...
|
|
Sledování genetických faktorů ovlivňujících riziko vzniku a průběh karcinomů kolorekta a pankreatu
Mohelníková Duchoňová, Beatrice ; Souček, Pavel (vedoucí práce) ; Skálová, Lenka (oponent) ; Macek, Milan (oponent)
Úvod: Cílem této práce bylo sledování genetických faktorů ovlivňujících riziko vzniku a průběh karcinomů kolorekta a pankreatu. První část se zabývá etiologickými faktory, a to vlivem polymorfismů v biotransformačních enzymech a genetických alterací v genu CHEK2 na vznik těchto malignit. V druhé části jsou analyzovány geny transportu cytostatik jako případné prognostické a prediktivní markery odpovědi na onkologickou léčbu. Materiály a metody: Polymorfismy a další genetické alterace byly zjišťovány pomocí real-time PCR, alel-specifické PCR a PCR-RFLP metody v DNA získané z krve pacientů. Byla hodnocena frekvence polymorfismů a posuzován jejich význam s ohledem na dostupná epidemiologická data. Exprese genů byly stanoveny metodou qPCR v párových vzorcích tkání nádoru a okolního parenchymu. Výsledky: Pro většinu námi sledovaných polymorfismů se nepodařilo prokázat vztah mezi jejich přítomností a rizikem vzniku obou těchto malignit. Variantní alela CYP2A13*7, byla nalezena u 7 z 265 hodnocených zdravých kontrol, ale nebyla nalezena u žádného pacienta s karcinomem pankreatu. Výskyt variantní alely GSTP1-Val a genotypu GSTT1-null byl naopak spojen se zvýšeným rizikem vzniku karcinomu pankreatu (OR=2,38; 95% CI=1,17- 4,83). V souboru pacientů s kolorektálním karcinomem byl genotyp GSTT1-null v kombinaci...
|
|
Metabolická detoxikace karcinogenních aristolochových kyselin cytochromy P450
Levová, Kateřina
Aristolochové kyseliny jsou látky rostlinného původu vyskytující se v rostlinách čeledi podražcovitých (Aristolochiaceae). Karcinogenní a nefrotoxický rostlinný alkaloid, aristolochová kyselina I (AAI), která je v těchto rostlinách zastoupena majoritně, je příčinou onemocnění označovaného jako nefropatie vyvolaná AAI (aristolochic acid nephropathy, AAN). Pro chorobu je charakteristické chronické ledvinné selhání, tubulointersticiální fibrosa a nádory močových cest. AAI participuje také na vývoji podobné fibrosy provázené nádory močových cest, balkánské endemické nefropatie (BEN). Zajímavé je, že ne všichni jedinci vystaveni působení AAI onemocní těmito chorobami. Jedním z možných vysvětlení mohou být rozdílné hladiny a aktivity enzymů metabolizujících AAI. Poznání enzymů participujících na metabolismu AAI a také vliv exprese a aktivit těchto enzymů jsou esenciální pro zhodnocení vnímavosti lidských jedinců vůči tomuto karcinogenu. Jako detoxikační cesta aristolochové kyseliny byla popsána její oxidace (demethylace) cytochromy P450 na aristolochovou kyselinu Ia (AAIa). Tvorba tohoto detoxikačního metabolitu AAI in vitro byla sledována pomocí metody HPLC. Tato práce se zaměřuje na identifikaci mikrosomálních cytochromů P450 jater potkana a člověka oxidujících aristolochovou kyselinu I. Testována byla...
|
|
Studium biotransformace monoterpenických směsí v in vitro kulturách vyšších rostlin
Dvořáková, Marcela
Tato práce je zaměřena na studium biotransformace monoterpenických směsí pomocí in vitro kultur vyšších rostlin. Biotransformace monoterpenů je velmi zajímavou oblastí, neboť oxidované monoterpeny se často používají jako dochucovadla a složky parfémů. Zkoumány jsou také protirakovinné účinky těchto látek. Většina biotransformací se provádí pomocí bakterií, protože se velmi rychle množí a práce s nimi je celkově snažší. Avšak biotransformace rostlinami může vést k cennějším produktům z důvodu rozdílného enzymatického aparátu rostlin a bakterií. V této práci jsou identifikovány produkty biotransformace tří různých monoterpenických směsí. Hlavními produkty biotransformace jsou myrtenol, trans- pinokarveol, trans-verbenol a verbenon. Jsou zde uvedeny i absolutní kvantitativní výtěžky hlavních produktů. V této práci je také vyhodnocena závislost relativního zastoupení produktů ve směsi v průběhu biotransformace (0 - 20 dní) a změna této závislosti se změnou výchozí koncentrace monoterpenické směsi (0,22 - 8,60 g/l). Diskutovány jsou zde enzymy, které mohou rostliny využít pro biotransformaci monoterpenů. Těmito enzymy jsou s největší pravděpodobností enzymy cytochromu P450.
|
| |
|
Metabolismus karcinogenů a léčiv monooxygenasovým systémem
Moserová, Michaela ; Stiborová, Marie (vedoucí práce) ; Entlicher, Gustav (oponent) ; Čeřovská, Noemi (oponent)
Ellipticin, alkaloid z rostlin čeledi Apocynaceae, vykazuje významný protinádorový a anti-HIV účinek. Je pro-léčivem, jehož farmakologická účinnost a vedlejší genotoxické účinky závisí na metabolické aktivaci cytochromy P450 (CYP) a peroxidasami (Px). Z toho důvodu bylo cílem disertační práce poznání příspěvku jednotlivých CYP a Px k oxidaci ellipticinu v různých tkáních (játra, plíce a ledviny) laboratorního potkana, který byl vybrán jako vhodný model ilustrující osud ellipticinu v lidském organismu. Dále byly využity mikrosomální systémy myší s "deletovanou" reduktasou v játrech (HRNTM ) a myší kotrolní linie (WT) a purifikované enzymy CYP1A1 a 3A4. Sledován byl i vliv cytochromu b5 na produkci jednotlivých metabolitů (aktivačních a detoxikačních) ellipticinu a tvorba aduktů aktivovaného ellipticinu s DNA. Karcinogenní benzo[a]pyren (BaP) je po své aktivaci cytochromy P450 (CYPs) schopný kovalentní vazby na DNA. Sledovali jsme jeho schopnost tvorby aduktů s DNA a indukce enzymů CYP a NADPH:CYP reduktasy (RED) v myších játrech, hlavním orgánu tvorby aduktů BaP s DNA. CYP1A1 je označován za nejdůležitější enzym v metabolické aktivaci BaP. V práci jsme sledovali vliv jednotlivých složek systému monooxygenas se smíšenou funkcí (MFO systému) na metabolismus BaP. V disertační práce byly využity mikrosomální...
|
|
Biotransformace fenolických látek enzymovými systémy kvasinky Candida tropicalis a bakterie Comamonas testosteroni
Vilímková, Lenka ; Stiborová, Marie (vedoucí práce) ; Entlicher, Gustav (oponent) ; Mareš, Jaroslav (oponent)
Kvasinka Candida tropicalis a bakterie Comamonas testosteroni se vyznačují schopností využívat fenol jako jediný zdroj uhlíku a energie. V naší laboratoři se zabýváme zejména studiem cytoplasmatických enzymů zodpovědných za první a druhý krok odbourání fenolu: NADPH-dependentní fenolhydroxylasy C. tropicalis i C. testosteroni a katechol 1,2- dioxygenasy C. tropicalis. Cílem naší práce je izolovat a částečně charakterizovat tyto enzymy. Fenolhydroxylasa C. tropicalis byla purifikována použitím následující kombinace metod: chromatografie a rechromatografie cytosolárních proteinů na DEAE Sepharose, frakční precipitace polyethylenglykolem 6000 a gelové permeační chromatografie na Sephacrylu S-300. Extracelulární fenolhydroxylasa C. testosteroni byla získána frakční precipitací kultivačního média polyethylenglykolem 6000 a gelovou permeační chromatografií na 4B Sepharose a Sephacrylu S-300. Katecholdioxygenasa byla z cytosolu C. tropicalis izolována za použití metod: chromatografie a rechromatografie cytosolárních proteinů na DEAE Sepharose, lyofilizace enzymového preparátu a gelové permeační chromatografie na Sephadexu G-100 Enzymová aktivita byla měřena buď pomocí HPLC nebo spektrofotometricky. Čistota enzymů byla sledována elektroforézou SDS-PAGE. Molekulová hmotnost enzymů byla určena pomocí...
|
| |
|
Physiology and ecology of saprotrophic basidiomycetes degrading dead plant biomass
Valášková, Vendula
Práce se zabývá saprotrofními basidiomycety rozkládajícími odumřelou rostlinou biomasu, které se výraznou měrou podílí na rozkladu organické hmoty v půdě a tím i na koloběhu uhlíku a minerálních látek v prostředí. Pozornost je věnována jejich roli při degradaci opadu a dřeva a jejich vlivu na mikrobiální společenstvo. V experimentech byly použity tři basidiomycete izolované z opadu dubového lesa: Hypholoma fasciculare, Rhodocollybia butyracea a Gymnopus sp. Ačkoli všechny tři kmeny degradovaly dubový opad za sterilních i nesterilních podmínek, rychlost degradace a produkce extracelulárních enzymů zodpovědných za degradaci se mezi jednotlivými izoláty výrazně lišila. Všeobecně však bylo možno rozklad způsobený těmito houbami přirovnat k typu rozkladu způsobeného houbami bílé hniloby. Všechny izoláty produkovaly lakázu, manganovou peroxidázu, endoglukanázu, endoxylanázu, β-glukozidázu a β-xylozidázu. Díky lokálnímu výskytu mohly tyto houby způsobit prostorovou variabilitu širokého spektra produkovaných enzymových aktivit. Prostorová variabilita enzymových aktivit byla v různých hloubkách horizontu pozorována současně s množstvím houbové biomasy a rovněž se složením mikrobiálního společenstva. Gradient těchto veličin byl pozorovatelný v měřítku menším než jsou jednotlivé půdní horizonty. Houby během...
|
host ::
