Národní úložiště šedé literatury Nalezeno 51 záznamů.  1 - 10dalšíkonec  přejít na záznam: Hledání trvalo 0.00 vteřin. 
Studium mechanismu účinku protinádorového léčiva ellipticinu a jeho metabolismu
Vejvodová, Lucie ; Stiborová, Marie (vedoucí práce) ; Moserová, Michaela (oponent)
Tato bakalářská práce se zabývá studiem protinádorových léčiv a to především jejich mechanismem účinku, vedlejšími účinky, rezistencí a farmakokinetikou. Jako modelové cytostatikum byl pro tuto práci vybrán protinádorový alkaloid ellipticin. Bakalářská práce popisuje metabolismus této látky v organismu a jeho indukční potenciál na enzymy biotransformující léčiva. Protinádorový alkaloid ellipticin představuje léčivo, jehož mechanismus účinku je založen na interkalaci do DNA, inhibici topoisomerasy II a na tvorbě kovalentních aduktů s DNA prostřednictvím enzymové aktivace cytochromy P450 a/nebo peroxidasami v cílových tkáních. Ellipticin je oxidován cytochromy P450 na několik metabolitů (7-hydroxyellipticin, 9-hydroxyellipticin, 12-hydroxyellipticin, 13-hydroxyellipticin a N2 - oxid ellipticinu). Z těchto metabolitů jsou 9-hydroxy- a 7-hydroxyellipticin považovány za detoxikační metabolity, zatímco 12-hydroxyellipticin, 13-hydroxyellipticin a N2 - oxid ellipticinu za aktivační metabolity, které vytvářejí dva hlavní deoxyguanosinové adukty v DNA. Tyto adukty byly nalezeny jak in vitro v leukemických buňkách (HL-60), v buněčných liniích lidského prsního adenokarcinomu (MCF-7), v neuroblastomových buňkách (IMR-32, UKF- NB-3 a UKF-NB-4) a v buňkách glioblastomu (U87MG), tak i in vivo v prsním karcinomu...
Mechanismus vzniku nádorových procesů a jejich ovlivnění ellipticinem
Parisová, Martina ; Stiborová, Marie (vedoucí práce) ; Moserová, Michaela (oponent)
Ellipticin (5,11-dimethyl-6H-pyrido[4,3-b]karbazol) představuje silné protinádorové agens, vykazující vícenásobný mechanismus působení. V této bakalářské práci jsou popsány příčiny vzniku nádorových procesů a informují o mechanismech hlavních farmakologických a cytotoxických účinků ellipticinu spolu s výsledky naší laboratoře ukazující nový mechanismus působení ellipticinu. Cytotoxické a mutagenní působení ellipticinu je přisuzováno především jeho dvěma mechanismům, interkalaci ellipticinu do dvoušroubovicové struktury DNA a jeho působení jako inhibitoru topoisomerasy II. Ellipticin take vytváří kovalentní adukty s DNA, po jeho oxidaci cytochromy P450 a peroxidasami. Cytochromy P450 oxidují ellipticin na pět různých metabolitů, z nichž 13-hydroxyellipticin, 12-hydroxyellipticin a N(2)-oxid ellipticinu vedou ke vzniku dvou majoritních aduktů s DNA. V případě peroxidas je ellipticin oxidován na radikál, poskytující dimer ellipticinu a také na N(2)-oxid ellipticinu. Z důvodu vysoké účinnosti ellipticinu a jeho derivátů proti různým typům nádorových onemocnění stoupá zájem o toto protinádorové léčivo a jsou stále zkoumány nové směry vývoje a přípravy cíleně směřovaných léčiv na bázi ellipticinu.
Interakce proteinů s bromfenolovou modří, možnosti analytického využití
Vodičková, Kateřina ; Hudeček, Jiří (vedoucí práce) ; Moserová, Michaela (oponent)
Jednou z metod stanovení proteinů je spektrofotometrická metoda, založená na proteinové chybě acidobazického indikátoru. Často pro tento účel je používaným barvivem bromfenolová modř, jako standard se obvykle využívá hovězí sérový albumin. Tato bakalářská práce zkoumá vliv močoviny na absorpční spektrum komplexu tohoto proteinu s bromfenolovou modří. Rozdíly v absorbanci, způsobené přídavkem močoviny odpovídající fyziologickým hodnotám v moči (0,2-0,4 mol/l), nepřesáhly 1 % (což odpovídá experimentální chybě). Obdobně je tomu až do koncentrace 4 mol/l. Naopak přídavek močoviny v koncentraci 6 mol/l způsobuje pokles absorbance o téměř 29 %, pravděpodobně v důsledku denaturace albuminu.
Úloha benzo[a]pyrenu v rozvoji rakovinného bujení
Vaňátková, Petra ; Moserová, Michaela (vedoucí práce) ; Kubíčková, Božena (oponent)
3 ABSTRAKT Rakovina je jedním z nejzávažnějších onemocnění dnešní doby. Rozvoj nádorového bujení je několikastupňovým procesem, při němž účinkem vnitřních a vnějších faktorů dochází k selhání regulačních a obranných mechanismů organismu, a tím k nahromadění vzniklých mutací. Mezi vnější činitele patří vedle biologických a fyzikálních, také chemické karcinogeny. Početnou skupinu chemických karcinogenů tvoří polycyklické aromatické uhlovodíky. Jedním z nejznámějších a nejstudovanějších je benzo[a]pyren. Při testech na laboratorních zvířatech byly prokázány karcinogenní, mutagenní a teratogenní účinky benzo[a]pyrenu. V případě člověka, je nejvíce dáván do souvislosti s rozvojem rakoviny plic při kouření cigaret. Je jedním z hlavních karcinogenů tabákového kouře. Po jeho inhalaci dochází v organismu biotransformačními pochody k jeho aktivaci za účasti systému enzymů monooxygenáz se smíšenou funkcí. Nejdůležitějšími enzymy podílejícími se na aktivaci benzo[a]pyrenu jsou CYP1A1 a CYP1B1. Oxidací vzniklé reaktivní metabolity jsou schopny tvořit kovaletní adukty s DNA, což vede k tvorbě mutací. Nejvýznamnějším konečným karcinogenním produktem benzo[a]pyrenu je benzo[a]pyren-7,8-dihydrodiol-9,10-epoxid, který může způsobit nevratné změny v molekule DNA. KLÍČOVÁ SLOVA Benzo[a]pyren, cytochrom P450, karcinogeneze,...
Fytohormony produkované askomycetou Leptosphaeria maculans jako efektory ovlivňující signální dráhy rostlin
Krutinová, Hana ; Ryšlavá, Helena (vedoucí práce) ; Moserová, Michaela (oponent)
Leptosphaeria maculans je patogenní houba způsobující fómové černání stonků řepky Brassica napus. V rámci této práce bylo zjištěno, že L. maculans produkuje in vitro řadu fytohormonů a dále se soustředila se na auxiny a brassinosteroidy. Z auxinů byla v myceliu nejvíce zastoupena IAA a její oxidační produkt OxIAA. Složení kultivačního media významně ovlivňuje zjištěnou koncentraci IAA. Přítomnost extraktu z rostlin Brassica napus v kultivačním mediu zvyšuje koncentraci IAA. V rostlinách, infikovaných L. maculans, byla zjištěna zvýšená koncentrace OxIAA oproti kontrolním rostlinám ošetřeným vodou. Byly zjištěny významné odlišnosti v produkci IAA mezi dvěma použitými sesterskými izoláty JN2 a JN3. V chemicky definovaném mediu Gamborg JN2 neprodukuje téměř žádnou IAA, JN3 produkuje IAA v koncentraci asi 1000 pmol/g čerstvé hmotnosti. Tato odlišnost byla využita jako model pro studium exprese genů biosyntetické dráhy auxinů v L. maculans. Tyto geny byly nalezeny na základě homologie s geny Arabidopsis thaliana (YUCCA1.1 a NIT1.2) a Ustilago maydis (IAD1.2 a TAM1-2.1). Pomocí ošetření prekurzory IAA (tryptofan a tryptamin) byla v izolátu JN2 pozorována zvýšená transkripce kandidátních genů biosyntézy auxinů. Po ošetření JN2 kultury tryptofanem a tryptaminem se zvýšila produkce IAA. U JN3 nebyla...
Příprava vektorů pro heterologní expresi lidského cytochromu P450 1B1
Sojka, Pavel ; Martínek, Václav (vedoucí práce) ; Moserová, Michaela (oponent)
Laboratoř molekulární karcinogeneze a vývoje léčiv, pod jejíž záštitou byl tento projekt vypracován, se problematikou cytochromů P450 zabývá již delší dobu. Tyto enzymy se podílejí v drtivé většině na první fázi biotransformace jak xenobiotik, tak endogenních látek, méně často pak na syntéze např. látek steroidní povahy. Práce se zabývá přípravou expresních vektorů založených na plasmidu pET-22b, vhodných pro přípravu lidské formy cytochromu P450 1B1 metodou heterologní exprese. Tento cytochrom P450 je přítomný v endoplasmatickém retikulu především extrahepatálních tkáních a jeho exprese je navíc indukována dioxiny a polycyklickými aromatickými uhlovodíky. K přípravě vektoru byl použit gen pro lidský cytochrom P450 1B1, který byl pomocí metody PCR upraven. Na oba konce genu byla přidána štěpící místa pro restrikční endonukleasy a v jednom případě také úsek kódující histidinovou kotvu pro snadnější izolaci enzymu. Pomocí agarosové elektroforesy byl jak insert, tak štěpený plasmid verifikován a zároveň také purifikován k ligaci a následné transformaci konstruktu do kompetentních buněk E. coli DH5. Klíčová slova: cytochrom P450 1B1, karcinogeneze, plasmid, heterologní exprese
Význam V-ATPasy v rezistenci k cytostatikům a možnosti její inhibice
Belhajová, Marie ; Stiborová, Marie (vedoucí práce) ; Moserová, Michaela (oponent)
Onkologická onemocnění patří mezi nejzávažnější problémy moderní medicíny a jejich výskyt se neustále zvyšuje. Neuroblastom je maligní embryonální nádor dětského věku, vznikající z periferního nervového systému a je to nejčastější nádor u kojenců. I přes významný vývoj léčebných metod v posledních letech zůstává toto onemocnění obtížně léčitelné. K léčbě tohoto nádoru se využívá chirurgická léčba, radioterapie a chemoterapie s použitím cytostatik. Cytostatika, jako je doxorubicin, cisplatina či ellipticin, se stala velmi významná v léčbě zhoubných nádorů. Avšak jednou z největších komplikací chemoterapie je vznik lékové rezistence. Tato práce se zabývá studiem vakuolární H+ -ATPasy (V-ATPasy), která hraje důležitou roli v tvorbě lékové rezistence. Jedná se o protonovou pumpu potřebnou pro acidifikaci vakuol. Senzitivní neuroblastomová buněčná linie (UKF-NB-4) a linie rezistentní vůči doxorubicinu, ellipticinu a cisplatině (UKF-NB-4DOXO , UKF-NB-4ELLI a UKF-NB-4CDDP ) byly vystaveny působení těchto cytostatik. Ovlivnění exprese proteinu V-ATPasy bylo sledováno imunochemicky, metodou Western blot a exprese na genové úrovni pomocí kvantitativní reverzně transkripční polymerasové řetězové reakce (RT-PCR). Ellipticin indukuje zvýšení exprese V-ATPasy v neuroblastomových buňkách jak na proteinové, tak na...
Studium mechanismu účinku protinádorového léčiva tamoxifenu a jeho vedlejších toxických účinků
Kylarová, Salome ; Stiborová, Marie (vedoucí práce) ; Moserová, Michaela (oponent)
Antiestrogenní (hormonální) terapie je užívána při léčbě nádoru prsu s pozitivním nálezem hormonálních receptorů pro estrogen. Vznik tohoto typu rakoviny je důsledkem dlouhodobé hormonální expozice v průběhu života. Tamoxifen patří mezi nejdůležitější zástupce hormonálních léčiv, které blokují účinky těchto hormonů v prsní nádorové tkáni prostřednictvím kompetitivní vazby na odpovídající receptory. Afinita tamoxifenu k těmto receptorům není dostatečná, avšak v organismu dochází k jeho aktivaci na metabolity, které vykazují afinitu o poznání větší, jmenovitě 4-hydroxytamoxifen a endoxifen. Tvorbu těchto meziproduktů katalyzují enzymy ze skupiny cytochromů P450. Ve druhé fázi jeho biotransformace dochází především k sulfataci těchto produktů katalyzovanou sulfotransferasami a jeho eliminaci z organismu. Vedle těchto aktivních meziproduktů, které svými účinky potlačují další růst nádoru, existují i produkty metabolismu tamoxifenu působící negativně v jiných tkáních organismu. Jedná se především o α-hydroxytamoxifen, který po další aktivaci generuje kovalentní adukty s DNA v jaterní tkáni potkanů a endometriu ženské dělohy. Léčba tamoxifenem je doprovázena četnými vedlejšími účinky, z nichž největší pozornost je věnována možnému vývoji rakoviny endometria či rezistenci nádoru vůči léčbě. Účinky terapie...
Stanovení proteinů - vliv složení proteinu, možnost použití spektrofotometru pro malé objemy
Vodičková, Kateřina ; Hudeček, Jiří (vedoucí práce) ; Moserová, Michaela (oponent)
V posledních letech se na trhu objevily spektrometry pro měření malých objemů v řádu mikrolitrů. Jejich hlavní aplikační oblastí je stanovení proteinů, resp. proteinů a nukleových kyselin vedle sebe přímou spektrofotometrií, popř. dalšími spektrálními metodami. Jedním z takových přístrojů je i spektrofotometr NanoVueTM Plus (GE Healthcare). V práci byla nejprve ověřována použitelnost tohoto přístroje (stabilita) a optimalizovány podmínky měření (objem vzorku). Pro stanovení proteinů přímou spektrofotometrií byly využity přednastavené programy na tomto přístroji, data byla ověřena nezávislým výpočtem. Dále bylo studováno ovlivnění naměřených hodnot rozdíly ve složení různých proteinů. Jak ukazují výsledky této diplomové práce, nejsprávnějších výsledků se dosahuje s použitím přednastaveného programu E 1%, když se potřebná hodnota E 1% zjistí experimentálně. Naopak použití programu Protein UV poskytuje výsledky často výrazně odlišné od správných hodnot a projevuje se zde vysoká závislost na složení proteinu. Klíčová slova: stanovení proteinů, spektrofotometr NanoVueTM Plus, vliv aminokyselinového složení proteinu
Heterologní exprese a izolace lidského cytochromu P450 1B1
Sojka, Pavel ; Martínek, Václav (vedoucí práce) ; Moserová, Michaela (oponent)
Cytochromy P450 tvoří superrodinu hemových enzymů, jejíž jednotliví zástupci se vyznačují velmi širokou substrátovou specifitou, tudíž dokáží odbourávat desítky až stovky různých substrátů, avšak s různou účinností a kinetikou. Mezi látky, jež jsou schopni zástupci superrodiny cytochromů P450 odbourávat, patří jak eobiotika, tak xenobiotika. U obratlovců se jedná o membránové enzymy vázané v endoplasmatickém retikulu, které se vyskytují ve zvýšené míře v celé řadě tkání, např. v kůži, ledvinách či plicích. Nejvíce a nejčastěji se ovšem vyskytují v játrech. Cytochrom P450 1B1 je inducibilní enzym, který se vyskytuje převážně v plicích a kůži. Jeho exprese je indukována převážně přítomností polycyklických aromatických uhlovodíků a dioxinů. Mezi xenobiotika degradovaná cytochromem P450 1B1 patří rovněž některé heterocyklické aminy. Enzymy superrodiny cytochromů P450 jsou taktéž zodpovědné za metabolickou aktivaci řady karcinogenů na reaktivní látky, jež participují na vzniku aduktů s DNA a zvyšují hladinu oxidačního stresu v buňce. Tato diplomová práce se zabývá (i) přípravou dvou forem expresních vektorů kódujících gen lidské formy cytochromu P450 1B1, (ii) heterologní expresí tohoto proteinu, (iii) jeho následnou izolací doplněnou v jednom případě o štěpení TEV proteasou a (iv) porovnáním aktivity...

Národní úložiště šedé literatury : Nalezeno 51 záznamů.   1 - 10dalšíkonec  přejít na záznam:
Chcete být upozorněni, pokud se objeví nové záznamy odpovídající tomuto dotazu?
Přihlásit se k odběru RSS.