|
|
Probiotika a jejich využití v potravinářství
Diado, Aleksandra ; Rittich, Bohuslav (oponent) ; Španová, Alena (vedoucí práce)
Probiotické bakterie jsou definovány jako živé mikroorganismy, které, pokud jsou konzumované ve stanoveném množství, mají zdraví prospěšné účinky. Většina probiotik patří k bakteriím rodu Lactobacillus a Bifidobacteria. Tyto a řada jiných mikroorganismů se v současnosti úspěšně využívají v průmyslu, včetně potravinářského. V potravinářství se probiotika využívají v první řadě v mléčných výrobcích a doplňcích stravy. Probiotické bakterie, lze stejně jako ostatní mikroorganismy, idenfikovat metodou PCR, která umožňuje amplifikovat specifické úseky DNA. Polymerázová řetězová reakce byla provedena po izolaci DNA z bakteriálních kulturních kmenů metodou fenolové extrakce. PCR pro doménu Bakteria byla použita pro ověření amplifikovatelnosti DNA a rodově specifická PCR pro důkaz přítomnosti bakterií rodu Lactobacillus.
|
|
| |
|
| |
|
|
Probiotické bakterie mléčného kvašení v potravinových výrobcích
Sásková, Denisa ; Rittich, Bohuslav (oponent) ; Španová, Alena (vedoucí práce)
K identifikaci probiotických mikroorganismů jsou v potravinářství využívány molekulárně genetické metody, které jsou založeny na analýze DNA. Příkladem těchto metod je polymerázová řetězová reakce, při které dochází k amplifikaci specifických úseků DNA pomocí krátkých oligonukleotidových primerů. Tato bakalářská práce se v teoretické části zabývá probiotickými bakteriemi, jejich vlastnostmi, příznivými účinky na zdraví a možnostech využití v potravinářství a klinických aplikacích. Experimentální část práce je zaměřena na analýzu dvou probiotických potravinových doplňků. Z těchto výrobků byla izolována DNA metodou fenolové extrakce. Pomocí PCR byla prokázána přítomnost DNA probiotických bakterií rodů Lactobacillus a Bifidobacterium.
|
|
|
Využití metody PCR v reálném čase při mikrobiologické analýze potravin
Novotná, Eva ; Michaela, Kotianová (oponent) ; Španová, Alena (vedoucí práce)
Probiotické druhy bakterií mléčného kvašení rodu Lactobacillus hrají důležitou roli v trávicím traktu člověka, např. chrání před patogenními mikroorganismy. Laktobacily jsou součástí různých potravinových výrobků. Detekovat a identifikovat baktérie mléčného kvašení rodu Lactobacillus lze pomocí polymerázové řetězové reakce (PCR) se specifickými primery LbLMA1 a R16. V experimentální části této práce byla izolována DNA z probiotického výrobku Actimel Natur metodou fenolové extrakce. Pomocí PCR v reálném čase byly amplifikovány specifické produkty PCR, které byly detegovány pomocí fluorescenčního interkalačního barviva SybrGreen. Specificita amplifikovaných produktů PCR byla ověřena pomocí křivky tání (Tm 85°C) a pomocí agarosové gelové elektroforézy (byl amplifikován produkt velikosti 250 bp).
|
|
|
Identifikace baktérií mléčného kvašení v kysaných mléčných výrobcích s využitím amplifikačních metod
Jurečková, Nela ; Trachtová, Štěpánka (oponent) ; Španová, Alena (vedoucí práce)
Cílem bakalářské práce je izolovat genomovou DNA ze 7 mléčných výrobků (jogurty/ jogurtové mléko) v takové kvalitě, aby bylo možné ji použít pro PCR. K izolaci DNA byly použity magnetického částice (P(HEMA-co¬-GMA)). DNA byla reverzibilně adsorbována na mikročástice v přítomnosti 8% poly(ethylen glykolu) PEG 6000 a 5 M chloridu sodném. Absorbovaná DNA byla z mikročástic uvolněna do TE pufru o nízké iontové síle a použita jako DNA matrice do rodově specifické PCR Lactobacillus. Přítomnost DNA rodu Lactobacillus byla prokázána ve všech analyzovaných výrobcích.
|
|
|
Identifikace baktérií mléčného kvašení v probiotických preparátech (tabletách) s využitím amplifikačních metod
Balogová, Petra ; Trachtová, Štěpánka (oponent) ; Španová, Alena (vedoucí práce)
Laktobacily hrají důležitou roli ve fermentačních procesech již po tisíciletí. Byly prostudovány jejich probiotické vlastnosti a dnes jsou používány při výrobě fermentovaných potravinových výrobků a doplňků stravy včetně farmakologických preparátů. V této práci byla pozornost zaměřena na zástupce rodu Lactobacillus v probiotických preparátech (tabletách). Pro identifikaci laktobacilů v sedmi probiotických preparátech byla použita metoda polymerázové řetězové reakce (PCR), založené na amplifikaci sekvence DNA. Jako DNA matrice byla do PCR směsí použita celková DNA izolovaná z tablet pomocí magnetických nosičů (P(HEMA-co¬-GMA) pokrytých karboxylovými skupinami. Rodově specifické produkty (250 bp) byly detekovány pomocí gelové elektroforézy na agaróse. Přítomnost DNA rodu Lactobacillus byla prokázána ve všech výrobcích kromě jednoho. Na etiketě tohoto výrobku byla uvedena pouze přítomnost probiotických bakterií. Pravděpodobně se jednalo o zástupce jiného rodu než Lactobacillus.
|
|
|
Plasmide DNA Isolation from Bacteria and Transfection to HEK293 Cell Line
Karmazínová, K.
Isolation DNA is a one of the basic methods in molecular biology. There are several methods of DNA amplification and isolation. In this paper phenol-chloroform extraction of three plasmid types is used: Channelrhodopsin-2, ASAP and KIR. Seven plasmids were isolated in total. These plasmids are then validated using gel electrophoresis. Successfully isolated plasmids are then transfected to HEK293 and taken on confocal microscope 24 hours after transfection.
|
|
|
Detekce skrytých přenašečů dědičné katarakty u psů pomocí PCR
FARKOVÁ, Barbora
Dědičná katarakta je jednou z nejrozšířenějších onemocnění očí u psů. U psů plemene Stafordšírský bullteriér došlo k tak masivnímu rozšíření této dědičné nemoci, že je v České republice zavedeno povinné testování alespoň jednoho jedince z chovného páru. Jedná se o degenerativní onemocnění čočky, kdy postižený jedinec do 3 let trvale oslepne. V České republice se již delší dobu nevyskytují jedinci postiženi touto nemocí, ale stále se objevují skrytí přenašeči, které je třeba odhalit, aby nežádoucí alely mohly být vyloučeny z genofondu. Cílem této práce bylo otestovat jednoduché metody odběrů biologického materiálu, vyzkoušet je v praxi a ověřit, zda jsou vhodné k izolaci DNA a dále otestovat alternativní metodu molekulární detekce tohoto onemocnění. Celkem byly odebrány stěry bukální sliznice od 23 psů a fen plemene Stafordšírský bullteriér. Detekce skrytých přenašečů dědičné katarakty se prováděla pomocí PCR analýzy se specifickými primery. Získané amplikony byly detekovány pomocí gelové a čipové elektroforézy a pomocí fragmentační analýzy. Detekce přenašečů byla založena na přítomnosti 2 amplikonů (detekce heterozygotů). V mé práci jsem došla k závěru, že pro detekci skrytých přenašečů je nutné používat fragmentační analýzu z důvodu rozdílu pouze jedné báze ve sledovaném úseku DNA. Gelová ani čipová elektroforéza neposkytuje tak vysoké rozlišení a není možné detekovat dva fragmenty lišící se pouze o jeden bp. Jako nejvhodnější metodu odběru DNA jsem zvolila stěry bukální sliznice cytologickým kartáčkem a izolaci DNA metodou chelex s následným přečištěním vzorku.
|
|
|
Metody extrakce DNA z čerstvého plodu papáji a z kandované papáji: metodika pro praxi
Ovesná, Jaroslava ; Hodek, Jan
Cílem práce je poskytnutí pracovních postupů pro extrakci amplifikovatelné DNA z plodů papáji melounové (Carica papaya), která je chudým zdrojem nukleových kyselin. Metody extrakce byly optimalizovány pro izolaci DNA z dužiny a semen plodů papáji a izolaci DNA z kandované papáji- tyto komodity byly vytipovány jako vhodné pro eventuální skríning nepovolené GM papáji na trhu v ČR. Metodika byla vypracována na základě požadavku referenčních laboratoří státní správy, které se zabývají analýzou GMO a v návaznosti na certifikovanou Metodiku detekce geneticky modifikované papáji linií 55-1 a 63-1 (Hodek, Ovesná, Pavlátová 2008) a na vědeckou publikaci Detection of transgenic papaya lines: extraction protocol optimisation and verification of DNA quality by PCR assay (Ovesná, Hodek 2009).
Plný text:  PDF
|
host ::
RSS.