|
|
Role karbonylreduktas v biotransformaci léčiva bupropionu
Tomanová, Radana ; Zemanová, Lucie (vedoucí práce) ; Malátková, Petra (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Mgr. Radana Tomanová Školitel: RNDr. Lucie Škarydová, Ph.D. Název rigorózní práce: Role karbonylreduktas v biotransformaci léčiva bupropionu Bupropion je antidepresivum druhé generace, které se v nižších dávkách užívá také při odvykání kouření. Strukturně se jedná o monocyklický aminoketon, který je metabolizován v lidských játrech na tři hlavní farmakologicky aktivní metabolity. Hydroxylací bupropionu vzniká hydroxybupropion, redukcí se tvoří threohydrobupropion a minoritní metabolit erythrohydrobupropion. Cílem této práce bylo určit in vitro aktivitu lidských jaterních subcelulárních frakcí a lidských enzymů redukujících karbonylové sloučeniny vůči bupropionu a stanovit účast enzymů v jaterním metabolizmu bupropionu. Na počátku in vitro biotransformační studie bupropionu byla otestována role všech jaterních subcelulárních frakcí a rekombinantně připravených enzymů redukujících karbonylové sloučeniny z nadrodiny AKR, rodiny CBR a 11β-HSD 1. Posouzením vzniku metabolitů bylo zjištěno, že všechny jaterní subcelulární frakce a enzymy 11β-HSD 1, AKR1C1, AKR1C2, AKR1C3 a CBR1 jsou aktivní v redukci bupropionu. Hlavní in vitro jaterní metabolit byl threohydrobupropion, který se v nejvyšší míře tvořil...
|
|
|
Klonování a exprese lidské AKR1A1
Kořínková, Petra ; Wsól, Vladimír (vedoucí práce) ; Zemanová, Lucie (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Petra Kořínková Školitel: Prof. Ing. Vladimír Wsól, Ph.D. Název diplomové práce: Klonování a exprese lidské AKR1A1 Aldo-ketoreduktasa 1A1 (AKR1A1) je monomerní cytosolický enzym patřící do skupiny karbonyl redukujících enzymů, nadrodiny aldo-ketoreduktas. Rodina aldo- ketoreduktas se významně podílí na redukčních reakcích endogenních substrátů i první fáze biotransformace xenobiotik. V lidském organismu se nachází 15 zástupců této velké rodiny, které lze nalézt v různých tkáních. Největší zastoupení mají v hepatocytech a renálních buňkách. AKR1A1 katalyzuje reakce aromatických i alifatických aldehydů na jejich odpovídající alkoholy. Z endogenních látek je jeho substrátem mevalonát. Jeho významnými substráty jsou i některá léčiva ze skupiny antracyklinových antibiotik - doxorubicin a daunorubicin. Dále se podílí na biotransformaci sorbitolu a rozvoji diabetických komplikací. Příprava rekombinantního enzymu byla provedena v E. coli za pomoci expresního vektoru pET28b(+). Izolovaná cDNA byla namnožena polymerasovou řetězovou reakcí, katalyzována Phusion Hot Start II polymerasou za přítomnosti specifických primerů, obsahujících restrikční místa pro endonukleasy NdeI a XhoI, kterými byly naštěpeny...
|
|
|
Detekce histidinem a FLAG peptidem značených rekombinantních proteinů
Javorská, Lenka ; Zemanová, Lucie (vedoucí práce) ; Novotná, Eva (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Bc. Lenka Javorská Školitel: RNDr. Lucie Škarydová, Ph.D. Název diplomové práce: Detekce histidinem a FLAG peptidem značených rekombinantních proteinů Rekombinantní proteiny jsou proteiny produkované geneticky modifikovanými organismy, prostřednictvím rekombinantní DNA technologie, jejímž principem je vložení DNA sekvence kódující cílový protein do buněk expresního systému, který zajistí jeho produkci. Tato technologie umožňuje připravit v podstatě libovolný protein v jakémkoliv požadovaném množství. Rekombinantní proteiny jsou produkovány často ve formě fúzního proteinu s vhodnou afinitní značkou (např. histidinová nebo FLAG peptidová značka), která usnadní jejich purifikaci a detekci. Cílem této diplomové práce bylo zavést a optimalizovat univerzální metodu pro detekci rekombinantních proteinů značených histidinovou (6x histidin) a FLAG peptidovou značkou. Modelovým rekombinantním proteinem s histidinovou značkou byl enzym karbonylreduktasa 1 (CBR1) produkovaný expresním systémem bakterie Escherichia coli a pro rekombinantní proteiny značené FLAG peptidem enzymy DHRS12, HSD11β1, RODH4, DHRS3, DHRS7, DHRS8 (expresní systém - hmyzí buňky Sf9). Pro separaci proteinů byla zvolena SDS polyakrylamidová...
|
|
|
Vývoj stavěcí strategie pro výrobu trubek pomocí 3D tisku kovů
Zemek, Albert ; Zemanová, Lucie (oponent) ; Koutný, Daniel (vedoucí práce)
Tato bakalářská práce se zabývá hledáním vhodných výrobních strategií pro stavbu převislých částí bez použití podpůrných struktur v technologii Selective Laser Melting. Hlavní zaměření studie je na výrobu kruhových částí, které jsou velmi častým konstrukčním prvkem. V práci byly navrženy testovací vzorky pro různé výrobní parametry. Dále byla otestována inovační funkce pro nekonstantní nastavení parametrů při výrobě. Po vyrobení byly vzorky otestovány z hlediska rozměrové přesnosti a výsledky vyhodnoceny.
|
|
|
Způsoby montáže snímačů akustické emise na povrch testovaných konstrukcí
Ščasný, Jakub ; Zemanová, Lucie (oponent) ; Mazal, Pavel (vedoucí práce)
Táto bakalárska práca je zameraná na riešenie problému montáže snímačov akustickej emisie na valcový a guľový povrch skúšaných potrubných segmentov vyrobených z neferomagnetického materiálu. Práca obsahuje prehľad súčasného stavu poznania základov metódy akustickej emisie potrebných na zvládnutie problematiky. V ďalšej časti je spracovaný prehľad postupov používaných pre inštaláciu snímačov. Konštrukčná časť je venovaná návrhom prípravkov pre montáž snímačov na plochy zadaných parametrov, overeniu ich funkčnosti a porovnaniu ich vlastností.
|
|
|
Klonování, exprese a purifikace disulfid oxidoreduktázy Francisella tularensis
Kohlová, Michaela ; Šimůnek, Tomáš (vedoucí práce) ; Zemanová, Lucie (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Bc. Michaela Kohlová Školitel: doc. PharmDr. Tomáš Šimůnek Školitel-konzultant: Mgr. Monika Schmidt Název diplomové práce: Konstrukce, exprese a purifikace disulfid oxidoreduktázy Francisella tularensis Konzervovaný hypotetický lipoprotein s označením FTT1103 (pro Francisella tularensis subsp. tularensis) je jedním z faktorů virulence u gramnegativní intracelulární bakterie Francisella tularensis. Protein FTT1103 je homologem k periplazmatickému proteinu DsbA E. coli, patří do rodiny disulfid oxidoreduktáz a je zodpovědný za tvorbu disulfidických vazeb u nově vzniklých proteinů. Tyto vazby jsou v proteinech nezbytné pro udržení správné konformace a aktivity. Bioinformatická analýza proteinu FTT1103 ukázala, že tento protein obsahuje N-koncovou FKBP doménu, u které se předpokládá dimerizační funkce a/nebo funkce chaperonová. Tyto funkce domény však nebyly dosud zcela potvrzeny. Cílem této diplomové práce bylo ověření, zda je N-koncová FKBP doména skutečně zodpovědná za správnou funkci a aktivitu proteinu DsbA. Pomocí molekulárně biologických metod jsme připravili mutantní gen dsbA s deletovanou FKBP_N doménou (dsbAΔFKBP_N). Tento gen jsme pomocí klonování vložili do plazmidu pET28b a tento...
|
|
|
Efektivita logopedické intervence u dětí před nástupem do 1. tříd ZŠ
Zemanová, Lucie ; Durdilová, Lucie (vedoucí práce) ; Felcmanová, Lenka (oponent)
Anotace: Tato bakalářská práce se zabývá problematikou narušené komunikační schopnosti a efektivitou logopedické intervence u dětí před nástupem do 1. třídy ZŠ. Shrnuje poznatky především ze speciální pedagogiky a logopedie. V teoretické části jsou popsány základní pojmy jako NKS, řečový vývoj, předškolní věk a logopedická intervence. Vysvětluje teoretické souvislosti, srovnává různé přístupy a odlišnosti v terminologii a uvádí do problematiky. Část praktická seznamuje s průběhem a výsledky výzkumného šetření.
|
|
|
Effect of vitamin E on oxidative stress and the basement membrane in lungs in vitamin A-defficient rats
Fabšíková, Katarína ; Wsól, Vladimír (vedoucí práce) ; Zemanová, Lucie (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Katarína Fabšíková Školitel: Prof. Ing. Vladimír Wsól, Ph.D. Název diplomové práce: Efekt vitamínu E na oxidační stres a na bazální membránu plic potkanů s nedostatkem vitamínu A V experimente popísanom v tejto diplomovej práci sa sledoval efekt dlhodobého nedostatku vitamínu A na bazálnu membránu pľúc potkanov. Potkany boli počas celého pokusu rozdelené do viacerých skupín líšiacich sa zložením potravy a pozorovali sa zmeny pľúcnej bazálnej membrány. Následne sa pozoroval efekt vitamínu E a kyseliny retinovej na vzniknuté zmeny v membráne. Počas experimentu bola hodnotená miera oxidačného stresu prostredníctvom hladín glutatiónu a malóndialhedydu, ktoré vystupujú ako jeho markery. Tieto hladiny boli u všetkých zvierat experimentu stanovované chromatografickou metódou HPLC. Taktiež sa hodnotil oxidačný stres pomocou iných ukazovateľov ako je hrúbka bazálnej membrány, depozitá kolagénových vlákien či hladiny retinolu a α-tokoferolu v plazme a v tkanivách. Tento experiment mal potvrdiť významnú úlohu vitamínov plniacich antioxidačnú funkciu ako v prevencii, tak aj v liečbe patologických zmien vzniknutých v dôsledku zvýšeného oxidačného stresu. Podávanie zvýšeného množstva vitamínu E a kyseliny...
|
|
|
Effect of the subchronic and early-life permethrin exposures on rat liver: oxidative stress and endogenous antioxidant responses
Palan, Matyáš ; Zemanová, Lucie (vedoucí práce) ; Dršata, Jaroslav (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Univerzita Camerino Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Farmaceutická fakulta Katedra biochemických věd Katedra molekulární biologie Kandidát: Matyáš Palan Školitel: Associate Prof. of Biochemistry Rosita Gabbianelli, Ph.D. RNDr. Lucie Škarydová, Ph.D. Název diplomové práce: Účinek podání permetrinu po narození a ve formě subchronických dávek na játra potkanů: vliv na oxidační stres a antioxidační odpověď Permetrin je široce používaný a pro savce málo toxický insekticid. Nicméně dlouhodobá expozice nebo expozice v počáteční fázi života může způsobovat problémy. Pro studium vlivu permethrinu na játra byly vybrány dva různé zvířecí modely. V modelu subchronické expozice byli použiti adolescentní potkani, kterým byl podáván permethrin (150 mg/kg tělesné váhy/den) po dobu 60 dní. Byli usmrceni ihned po ukončení expozice. Pro model expozice v počáteční fázi života byla použita mláďata potkanů, kterým byl podáván permethrin (34.05 mg/kg tělesné váhy/den) po dobu 15 po sobě následujících dní. Potkani byli usmrceni po 300 dnech od začátku léčby. Za účelem vyhodnocení dopadu expozice byly měřeny markery oxidačního stresu (peroxidace lipidů, obsah karbonylových skupin), množství superoxid dismutázy, katalázy, glutathion peroxidázy, aktivita glutathion transferázy, množství...
|
|
|
Využití diferenční skenovací fluorimetrie v charakterizaci vybrané karbonylreduktasy
Tomanová, Radana ; Zemanová, Lucie (vedoucí práce) ; Novotná, Eva (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Bc. Radana Tomanová Školitel: RNDr. Lucie Škarydová, Ph.D. Název diplomové práce: Využití diferenční skenovací fluorimetrie v charakterizaci vybrané karbonylreduktasy Diferenční skenovací fluorimetrie (DSF) je jednoduchá a rychlá metoda, která umožňuje stanovit optimální podmínky pro stabilizaci proteinů a určit jejich ligandy. DSF sleduje tepelné rozvíjení proteinu v přítomnosti fluorescenční barvy (např. SYPRO oranž, 2,6-ANS). Barva je vysoce fluorescenční v nepolárním prostředí, jako jsou hydrofobní místa rozvíjejícího se proteinu, které se při postupném zvyšování teploty odkrývají na povrch. Teplota tání (Tm) proteinu vyjadřuje jeho stabilitu. Určení ligandů je založeno na skutečnosti, že s vazbou ligandu se zvyšuje stabilita proteinu (ΔTm > 0). Cílem této práce bylo metodu DSF zavést na našem pracovišti, použít ji pro charakterizaci karbonylreduktasy 1 (CBR1) a zhodnotit získané výsledky s nezávislými metodami a literaturou. Nejprve pomocí citrátsyntasy byla ověřena funkčnost metody a byly optimalizovány podmínky pro CBR1. K výběru optimálního prostředí pro screening ligandů CBR1 byla testována skupina několika pufrů pH 3-10 bez aditiv nebo s přídavkem NaCl nebo glycerolu. Dále byl měřen vliv...
|
host ::
RSS.