|
|
Využití konopí setého ve výuce chemie
Stránská, Adéla ; Holada, Karel (vedoucí práce) ; Beneš, Pavel (oponent)
Diplomová práce se zabývá problematikou konopí setého. Cílem je zaměřit se na využití konopí setého ve výuce chemie. Teoretická část práce popisuje botaniku konopí, zpřehledňuje fytokanabinoidy, látky v konopí obsažené, a věnuje se i širokému využití rostliny v zemědělství a průmyslu. Praktická část se zabývá výběrem a uspořádáním možného učiva o chromatografii jako nejdostupnější separační technice analýzy konopí ve škole včetně vypracování metodiky edukačního pokusu pomocí tenkovrstvé chromatografie extraktu konopí setého prokazujícího přítomnost fytokanabinoidů konopí. V praktické části práce je rovněž vytvořeno schéma výukového projektu na téma konopí a popsány nejmodernější techniky, ale i metodiky práce s nimi, které jsou vhodné pro analýzu fytokanabinoidů konopí setého.
|
|
|
Vizualizace edukačních experimentů
Zvelebilová, Rosana ; Holada, Karel (vedoucí práce) ; Beneš, Pavel (oponent)
Anotace: Diplomová práce vizualizuje edukační experimenty pomocí různých vizualizačních prostředků - video, kresba, tabulka, schéma, rovnice, popis. Slouží k vzdělávání učitelů chemie a tutoruje je k živému předvádění pokusů v hodinách chemie a při laboratorních cvičení. Klíčová slova: Vizualizace, edukační, experiment, pokus, kategorizace, demonstrace, laborace, model.
|
|
|
Regulace aktivity a aktivace kathepsinu D
Máša, Martin ; Mareš, Michael (vedoucí práce) ; Jonáková, Věra (oponent) ; Holada, Karel (oponent)
Disertační práce SOUHRN REGULACE AKTIVITY A AKTIVACE KATHEPSINU D Martin Máša školitel: Michael Mareš Katedra biochemie Přírodovědecká fakulta Univerzity Karlovy Ústav organické chemie a biochemie Akademie věd České republiky PRAHA 2009 Úvod Kathepsin D (KD) je lysozomální aspartátová peptidasa přítomna ve všech savčích organizmech, její hlavní funkcí je katabolická degradace proteinů. Dále je zapojen v řadě fyziologických procesů jako jsou apoptóza a tkáňová homeostáze, podílí se na regulaci angiogeneze a na tvorbě peptidových antigenů. Z hlediska patofyziologie je KD studován ve spojitosti s několika chorobami jako jsou Alzheimerova choroba a rakovina. Alzheimerova choroba je neurodegenerativní onemocnění mozku obecně považované za nejběžnější příčinu senilní demence. V průběhu nemoci dochází k ukládání plaků β-amyloidních peptidů (β-AP) na povrch neuronů, což vede postupně k jejich atrofii a rozpadu. β-AP vznikají proteolytickým štěpením amyloidního prekurzorového proteinu (APP) nejčastěji tzv. sekretasami1 . U pacientů s Alzheimerovou chorobou byly nalezeny vysoké koncentrace KD v mozkomíšním moku2 . Bylo ukázáno, že KD je schopen štěpit APP za vzniku patogenního β-AP a přispívat tak k rozvoji Alzheimerovy choroby3 . U pacientů s Alzheimerovou chorobou byl v genu KD nalezen minoritní polymorfizmus,...
|
|
|
Expression and function of cellular prion protein in blood cells
Glier, Hana ; Holada, Karel (vedoucí práce) ; Živný, Jan (oponent) ; Rusina, Robert (oponent)
Buněčný prionový protein (PrPc) je nezbytný pro patogenezi neurodegenerativních prionových onemocnění. V současné době jsou známy čtyři případy přenosu variantní Creutzfeldt-Jakobovy choroby krevní transfuzí. Objasnění vlastností a množství PrPc na krevních buňkách je předpokladem pro vývoj testu pro detekci prionových chorob v krvi. Průtoková cytometrie představuje potenciální detekční metodu, nicméně výsledky studií zabývajících se množstvím PrPc na lidských krevních buňkách jsou rozporuplné. V této práci jsme ukázali, že většina PrPc v klidových destičkách se nachází intracelulárně a je přítomna v α-granulích. Lidské destičky a červené krvinky nesou významné množství PrPc a mohou tak hrát roli při přenosu prionů krevní transfuzí. Naše výsledky naznačují, že PrPc na červených krvinkách je modifikován. Podobná modifikace patologického prionového proteinu by mohla ovlivnit detekci prionových chorob v krvi. Dále jsme ukázali, že skladování krve před vlastní analýzou a výběr prionových protilátek výrazně ovlivňuje detekci PrPc metodou průtokové cytometrie, a že destičkový satelitismus ovlivňuje detekci PrPc na krevních buňkách. Prokázali jsme, že část PrPc přítomná na leukocytech cynomolgus monkey (Macaca fascicularis) je s buňkami volně asociovaná a uvolní se během izolace buněk. Dále jsme studovali...
|
|
|
The characterization of blood platelet cellular prion protein
Broučková, Adéla ; Holada, Karel (vedoucí práce) ; Matěj, Radoslav (oponent) ; Suttnar, Jiří (oponent)
Souhrn Centrálním dějem při vzniku transmisivních neurodegenerativních prionových chorob je konformační změna buněčného prionového proteinu (PrPc) na patologickou isoformu (PrPsc). V současnosti jsou už známé čtyři případy přenosu jedné z prionových chorob, variantní Creutzfeldt-Jakobovy choroby, krevní transfúzí. Porozumění vlastnostem a chování PrPc na krevních elementech je proto velmi důležité. Tato práce se zabývá buněčným prionovým proteinem na krevních destičkách. V první části práce jsme charakterizovali PrPc krevních destiček jako protein ukotvený glykosylfosfatidylinositolovou kotvou, který je schopný vázat měďnaté ionty prostřednictvím N-koncové oktapeptidové repetice. Zjistili jsme, že ze tří možných glykoforem PrPc převládá na destičkách diglykosylovaná forma proteinu. Prokázali jsme, že PrPc krevních destiček není resistentní k proteinase K, čímž se odlišuje od patologické formy proteinu. Potvrdili jsme, že krevní destičky i erytrocyty nesou nezanedbatelné množství PrPc, a mohou se tak stát zdrojem infektivity při přenosu prionových chorob krevní transfúzí. V druhé části práce jsme detailně popsali lokalizaci PrPc v krevních destičkách. Pomocí fluorescenčního značení jsme ukázali, že se PrPc nachází jak v -granulích tak na cytoplasmatické membráně. Většina PrPc krevních destiček je součástí...
|
|
|
Molecular mechanisms in homocystinuria: spatial arrangement of human cystathionine β-synthase
Hnízda, Aleš ; Kožich, Viktor (vedoucí práce) ; Holada, Karel (oponent) ; Jiráček, Jiří (oponent)
Chybné sbalování proteinů je považováno za hlavní patogenetický mechanismus homocystinurie z deficitu cystathionin beta-synthasy (CBS). Cílem této práce bylo studium molekulových mechanismů, které vedou k chybnému sbalování mutantních forem CBS. V první části práce jsme studovali prostorové uspořádání normální lidské CBS. Pomocí diferenčního kovalentního značení povrchově dostupných aminokyselinových zbytků jsme identifikovali kontaktní plochu mezi katalytickým jádrem a regulační doménou v lidské CBS a následně jsme navrhli strukturní model plnodélkového enzymu. V další části práce jsme studovali evoluční divergenci proteinových struktur CBS. Provedli jsme fylogenetickou analýzu, která odhalila unikátní uspořádání pro CBS z třídy nematod; doménová architektura CBS z Caenorhabditis elegans byla podrobně studována experimentálně. Nakonec jsme studovali konformační vlastnosti vybraných mutantních forem lidské CBS, které měly do různé míry narušenou tvorbu tetrameru a sníženou enzymovou aktivitu. Pomocí proteolytických technik s využitím thermolysinu jsme analyzovali devět mutantních forem, které byly exprimovány v E.coli. Zjistili jsme, že rozbalení struktury je běžným jevem při chybném sbalování mutantních CBS. Důležitost rozbalení proteinů pro patogenesi deficitu CBS byla dále prokázána pomocí...
|
|
|
Využití konopí setého ve výuce chemie
Mušková, Adéla ; Holada, Karel (vedoucí práce) ; Beneš, Pavel (oponent)
Diplomová práce se zabývá problematikou konopí setého. Cílem je zaměřit se na využití konopí setého ve výuce chemie. Teoretická část práce popisuje botaniku konopí, zpřehledňuje fytokanabinoidy, látky v konopí obsažené, a věnuje se i širokému využití rostliny v zemědělství a průmyslu. Praktická část se zabývá výběrem a uspořádáním možného učiva o chromatografii jako nejdostupnější separační technice analýzy konopí ve škole včetně vypracování metodiky edukačního pokusu pomocí tenkovrstvé chromatografie extraktu konopí setého prokazujícího přítomnost fytokanabinoidů konopí. V praktické části práce je rovněž vytvořeno schéma výukového projektu na téma konopí a popsány nejmodernější techniky, ale i metodiky práce s nimi, které jsou vhodné pro analýzu fytokanabinoidů konopí setého.
|
|
|
Vlastnosti specifických protilátek prionových chorob a možnosti jejich využití
Šafaříková, Eva ; Holada, Karel (vedoucí práce) ; Mareš, Michael (oponent) ; Živný, Jan (oponent)
Souhrn Transmisivní spongiformní encefalopatie (TSE) jsou neurodegenerativní onemocnění charakterizovaná ukládáním patologické formy prionového proteinu (PrPTSE ) v mozku. V současnosti je PrPTSE jediný specifický biochemický marker lidských a zvířecích TSE. Laboratorní diagnostika je založena na průkazu rezistentního jádra PrPTSE (PrPres) po štěpení vzorku mozkového homogenátu proteinázou K. PrPres je posléze detekován pomocí western blotu nebo imunometodami. Obě metody jsou však obtížně standardizovatelné, časově náročné a nejsou schopné zachytit k proteolytickému štěpení senzitivní formy PrPTSE . V této práci jsme se zaměřili na přípravu nového typu testů založených na průkazu PrPTSE bez nutnosti štěpení proteinázou K či jiným enzymem. Působením glukózy a jiných redukujících cukrů v organismu vzniká spektrum produktů zvaných koncové produkty glykace. Vzhledem k dlouhodobému ukládání prionových depozit v mozku dochází ke glykaci i u PrPTSE . Detekce glykovaného PrPTSE by tak mohla sehrát roli diagnostického markeru. V rámci první části studie jsme se zaměřili na přípravu monoklonálních protilátek specifických pro glykovaný prionový protein. Připravili jsme bakteriálně exprimovaný rekombinantní lidský prionový protein (rhPrP). Na rhPrP jsme působili kyselinou glyoxalovou za vzniku karboxymethyl...
|
|
|
The Role of Cellular Prion Protein in Erythroid Differentiation
Panigaj, Martin ; Holada, Karel (vedoucí práce) ; Živný, Jan (oponent) ; Rusina, Robert (oponent)
3 Abstrakt Buněčný prionový protein (PrPC ) je evolučně konzervovaný protein, exprimovaný na povrchu buněk různého původu. Přestože PrPC hraje zásadní roli v patogenezi neurodegenerativních chorob, jeho fyziologická funkce zůstává neznáma. Prionové choroby jsou charakteristické dlouhou dobou latence, během které nejsou diagnostikovatelné žádnou konvenční metodou. Krev by mohla být ideálním materiálem pro vývoj takových testů, bohužel vlastnosti PrPC na krevních buňkách a jeho funkce není dosud spolehlivě vysvětlena. Naše práce ukázala, že jednotlivé lidské červené krvinky exprimují pouze malé množství PrPC , ale vzhledem k počtu erytrocytů v krvi představuje tento protein většinu PrPC vázaného na krevní buňky. Na základě našich dat usuzujeme, že PrPC na povrchu erytrocytů je unikátně modifikován. Podobná modifikace by v případě patologického PrP mohla znesnadňovat diagnostiku prionových chorob z krve. Je prokázáno, že v průběhu prionových onemocnění dochází k deregulaci transkripce erytroidních genů a že PrP-/- myši mají oslabenou odpověď vůči experimentálně navozené anémii. Pro objasnění úlohy PrPC v erytropoéze jsme proto sledovali jeho expresi u myších erytroidních prekursorů in vitro i in vivo. Prokázali jsme, že v průběhu diferenciace buněk dochází k regulaci povrchové exprese PrPC na erytroidních...
|
|
|
Studium fotodynamické inaktivace prionů ftalocyaniny.
Kostelanská, Marie ; Holada, Karel (vedoucí práce) ; Zimčík, Petr (oponent) ; Kolářová, Hana (oponent)
Transmisivní spongiformní encefalopatie neboli prionové choroby jsou smrtelná neurodegenerativní onemocnění postihující savce. U postižených jedinců se v CNS hromadí ložiska patologického prionového proteinu (PrPTSE ), která jsou příčinou smrti. Priony vykazují afinitu k různým povrchům a odolnost ke konvenčním sterilizačním procedurám. To zvyšuje riziko nosokomiálního přenosu prostřednictvím chirurgických nástrojů použitých při lékařských zákrocích na jedincích v subklinickém stádiu prionového onemocnění. V disertační práci posuzujeme použitelnost metody fotodynamické inaktivace (PDI) pro dekontaminace prionů. PDI byla iniciována deriváty ftalocyaninu (Pc): AlPcOH(SO3)2, SiPc(OH)2(SO3)1-3 nebo ZnPc(SO3)1-3 pro dekontaminace prionů. Světlem aktivované Pc generují reaktivní formy kyslíku, zejména singletní kyslík (O2(1 ∆g)), který jsme detekovali pomocí jodidové metody, inhibičního testu s NaN3 a oxidační degradací kyseliny močové. PDI v suspenzi infekčního mozkového homogenátu vedla k eliminaci signálu PrPres (fragment PrPTSE rezistentní proteináze K) pod detekční limit western blotu při nanomolární koncentraci AlPcOH(SO3)2. Úplná eliminace signálu PrPres byla doprovázena 20% redukcí koncentrace proteinů mozkového homogenátu, nedocházelo k fragmentaci ani agregaci proteinů. PDI indukovaná deriváty...
|
host ::
RSS.