|
| |
|
|
Příprava a charakterizace terapeutické protilátky Farletuzumab - Thiomab E154C S378C
Mochánová, Michaela ; Brynda, Jiří (vedoucí práce) ; Dračínská, Helena (oponent)
4 Abstrakt Lidský folátový receptor α (FRα) je receptor vázající kyselinu listovou, která je jakožto jeden z vitamínů nutná pro základní buněčné procesy, růst a diferenciaci buněk. Exprese FRα je ve zdravé tkáni přísně regulována, ale v některých nádorových typech je ve vysoké nadprodukci. Proti folátovému receptoru α byla vyvinuta humanizovaná monoklonální protilátka Farletuzumab. Vazba Farletuzumabu na FRα vede k aktivaci imunitního systému přes cytotoxicitu závislou na protilátkách a cytotoxicitu závislou na komplementu. Pro zvýšení protinádorového účinku byly vybrané aminokyseliny v molekuly protilátky Farletuzumab mutovány za cysteiny, které umožňují následnou aplikaci technologie THIOMAB. Tyto cysteiny jsou použity ke specifické konjugaci protilátky s uměle připravenou efektorovou molekulou, která spouští signální dráhu cGAS-STING (synthasa cyklického GMP-AMP - stimulátor interferonových genů, z angl. stimulator of interferon genes). Kombinace vlastního protinádorového účinku protilátky a spuštění imunitní reakce přes signální dráhu cGAS-STING maximalizuje imunitní odpověď vůči rakovinným buňkám. Cílem mé práce proto bylo protilátku exprimovat ve vhodném eukaryotickém buněčném systému a následně udělat základní charakteristiku proteinu. Protilátka Farletuzumab-Thiomab byla připravena heterologní...
|
|
|
Study of the substrate specificity of the LACTB tumour suppressor enzyme
Baudyšová, Alžběta ; Kečkéšová, Zuzana (vedoucí práce) ; Janečková, Lucie (oponent)
Mitochondriální beta-laktamasa (LACTB) je nádorový supresor, jehož exprese způsobuje změny v metabolismu mitochondriálních fosfolipidů a indukuje diferenciaci nádorových buněk v buňky nerakovinné. Tento jev je způsoben down regulací fosfatidylserin dekaboxylasy (PISD), což následně vede ke snížení množství fosfatidyletanolaminů a lysofosfatidyletanolaminů v membráně mitochondrie. PISD ale není LACTB přímo štěpeno a tedy otázka, co je fyziologickým substrátem LACTB, zůstává stále nezodpovězená. Abychom se pokusili zaplnit tuto mezeru v našem poznání o mechanismech a funkci nádorového supresoru LACTB, byla tato diplomová práce zaměřena na nalezení substrátu LACTB pomocí proteomické analýzy PICS. Aby mohla být analýza provedena, bylo třeba nejprve vyizolovat rekombinantní wild-type LACTB a také LACTB se zrušeným katalytickým místem, zjistit, jaké je ideální in vitro prostředí pro práci s rekombinantním LACTB a také jaké podmínky jsou nutné pro to, aby LACTB tvořila multimery. Mé výsledky ukázaly, že aktivita LACTB in vitro stoupá se zvyšujícím se pH a také po přidání vápníku. Také jsem ukázala, že monomery LACTB v multimerních formách jsou spojeny disulfidickými můstky a že se tyto multimery rozpadají po přidání dithiothreitolu. Nejzajímavějším výsledkem práce byl poznatek, že LACTB je svým vlastním...
|
|
|
Kombinace nádorové imunoterapie s blokací inhibitorů apoptózy
HAVLOVÁ, Aneta
Cílem této práce bylo prostudovat možnost kombinace nádorové imunoterapie s blokací inhibitorů apoptózy. Popsala jsem strukturu, funkce a vliv těchto inhibitorů na vývoj rakoviny. Zvláštní pozornost byla věnována způsobům, které by mohly být použity k blokaci inhibitorů apoptózy. Nakonec jsem navrhla kombinaci blokace těchto inhibitorů s MBTA imunoterapií.
|
|
|
Studium významu a mechanismů zapojení získané imunity při nádorové imunoterapii založené na synergii agonistů TLR a ligandů stimulujících fagocytózu
VENHAUEROVÁ, Anna
Tématem této diplomové práce je analýza zapojení získané imunity v průběhu protinádorové MBTA imunoterapie, která je založena na synergii mezi TLR agonisty, agonistickou protilátkou anti-CD40 a fagocytózu stimulujícími ligandy, které jsou na povrch nádorových buněk ukotveny biokompatibilní kotvou BAM. Tato imunoterapie byla testována na pankreatickém adenokarcinomu Panc02. Cílem této práce byla analýza nádorové infiltrace buňkami imunitního systému během terapie, následně bylo studováno zapojení adaptivní imunity na imunodeficientních myších. Poslední část práce byla věnována inhibitoru survivinu YM155, betaglukanům a anti-TGF, jakožto vhodným kandidátům pro zesílení imunoterapeutických účinků stávající MBTA terapie.
|
|
| |
|
|
The preparation and characterization of IGF2 prohormones
Potalitsyn, Pavlo ; Žáková, Lenka (vedoucí práce) ; Obšilová, Veronika (oponent) ; Hudeček, Jiří (oponent)
Insulinu podobné růstové faktory 1 a 2 jsou proteinové hormony, které mají podobné strukturní a funkční vlastnosti s insulinem. Nejčastěji jsou zmiňovány zkratkami jako IGF1 a IGF2. Hrají podstatnou roli jak v prenatálním vývoji, tak i během celé doby života savců. Stimulace růstu všech typů buněk a výrazné metabolické efekty rovněž patří mezi jejich hlavní známé funkce. Deregulace jejich aktivity nebo jejich zvýšené hladiny byly nalezeny u mnoha různých nemocí jako je například diabetes mellitus 2. typu, rakovina, hyperfunkce štítné žlázy, amyotrofická laterální skleróza, svalová dystrofie, akromegalie, Laronův syndrom a další choroby. Funkce IGF2 jsou studovány méně než funkce ostatních členů proteinové rodiny, a ještě méně se ví o funkcích prekurzorů IGF2. Abychom přispěli k lepšímu porozumění funkcím prekurzorů IGF2, začali jsme s vývojem analogů IGF2 se zvýšenou specificitou vůči receptoru insulin (IR) receptoru. Vyprodukovali jsme specifické analogy, modifikované v pozicích důležitých pro vazbu na receptor. IGF2 analog s Phe48His mutací je nejsilnějším známým ligandem pro receptor IR-A zaleženým na molekule IGF2a je schopen aktivovat tento receptoru až do úrovně 60 % aktivity insulinu. Vyvinuli jsme nový, rychlý, robustní a citlivý vazebný protokol pro testování ligandů receptoru pro IGF2...
|
|
|
Molecular requirements of LACTB-induced tumor suppression
Jakoubě, Pavel ; Kečkéšová, Zuzana (vedoucí práce) ; Rohlenová, Kateřina (oponent)
LACTB je nedávno objevený tumor supresorový protein fungující v různých typech tkání. Zdá se, že mechanismus jeho působení je závislý na daném kontextu; LACTB dokáže potlačit vznik rakoviny skrze zastavení buněčného cyklu, navození apoptózy, diferenciace či potlačení epiteliálně-mezenchymální přechodu. Tyto procesy mohou dále záviset na změnách v metabolismu lipidů či na interakci s dalšími tumor supresory a signálními drahami. LACTB je odvozený od bakteriálních proteinů vázajících penicilin, lokalizuje do mezimembránového prostoru mitochondrií a má vlastní enzymatickou aktivitu. Také se ukázalo, že tvoří filamenty, které se sestávají ze dvou antiparalelních řetězců a o nichž se předpokládá, že by mohly mít jistou funkci v organizaci mezimembránového prostoru mitochondrií. V první části této diplomové práce jsem pokusil zmapovat molekulárními požadavky pro vznik LACTB filament, s akcentem na roli disulfidických můstků v jejich tvorbě. V druhé části jsem se snažil odhalit interakční partnery LACTB, jež by rovněž mohli sehrávat určitou roli při tvorbě filament. Splnění těchto cílů nám může poskytnout hlubší porozumění biologické aktivitě LACTB a také odhalit podmínky pro jeho správné sbalení. Klíčová slova: LACTB, tumor supresory, rakovina, struktura, disulfidické můstky, interakce proteinů
|
|
|
Danio rerio as a model of serious human diseases
Hason, Martina ; Bartůněk, Petr (vedoucí práce) ; Živný, Jan (oponent) ; Divoký, Vladimír (oponent)
(SLOVENSKY) Za posledných päť desaťročí sa danio pruhované (Danio rerio) stalo užitočným modelovým organizmom v oblasti vývojovej biológie ako aj v štúdiu ľudských ochorení. Používanie dania v xenotransplantačných štúdiách sa stáva čoraz populárnejším a pokročilo smerom k skríningu protirakovinových liečiv. Zebričky sú obzvlášť vhodné pre high-throughput predklinický skríning liečiv vzhľadom na malú veľkosť ich embryí ako aj na vysoký podiel evolučne konzervovaných dráh, súvisiacich s rakovinou. Hodnotenie reakcie rakovinových buniek na liečivá in vivo musí byť rýchle a efektívne, aby mohlo znamenať pokrok pre personalizovanú medicínu. Stále však chýbajú metódy, ktoré by umožňovali rýchle a citlivé hodnotenie rastu nádorových buniek pre high-throughput skríning liečiv v in vivo modeloch. Navrhli sme a experimentálne overili novú bioluminiscenčnú skríningovú platformu, v ktorej sme použili embryá dania transplantované rakovinovými bunkami. Náš model by mohol byt vhodným riešením pre predklinické testovanie liečiv in vivo, prostredníctvom bioluminiscencie. V našich experimentoch sme použili luciferázu NanoLucTM , ktorá nám umožnila rýchly skríning protirakovinových inhibítorov. V porovnaní s konvenčným fluorescenčným signálom má bioluminiscenčný signál veľmi nízke pozadie a je preto vhodným, citlivým...
|
|
|
Role kaspázy-3 při apoptóze
Kolářová, Karolína ; Tlapáková, Tereza (vedoucí práce) ; Anděra, Ladislav (oponent)
Kaspázy zajišťují v organismech protizánětlivé, apoptotické, ale také vývojové procesy. širokou působností ve všech buňkách. Pokud však dojde k narušení jejich správné funkce, může docházet k různým patogenním stavům zajímavým tématem pro vědce, neboť jejich přímá spojitost se spouštěním apoptotických procesů je nadějnou možností terapie chorob, které s apoptózou souvisí, jako je například rakovina, neurodegenerativní onemocnění, ale také srdeční ischemie či diabetes. Kaskáda apoptotických procesů je řízena právě zmíněnými kaspázami, které se nachází v kaskádě. Pokud dojde ke spuštění kaskády v buňce, děje se tak kvůli přítomnému signálu "nebezpečí", který však může být velmi různý. Nejznámějšími spouštěči apoptotické kaskády jsou např. aktivovaný receptor Fas a ligand FasL, cytochrom c přítomný v cytoplazmě, nevyrovnané množství IAPs v buňce, poškozená DNA, a mnoho dalších. Po přijmutí signálu, aktivaci iniciační kaspáz 9, které následně aktivují 7 štěpí mnohé substráty, čímž propagují 3 je tedy efektorovým enzymem zodpovědným za samotné provedení regeneraci i diferenciaci buněk. Kaspáza 3 a její inhibitory lze využít k potlačení či léčbě Klíčová slova: generativní onemocnění
|
host ::
RSS.