|
|
Mechanismus působení protinádorového léčiva ellipticinu v cílových tkáních jeho účinku
Mrízová, Iveta
Ellipticin je alkaloid čeledě Apocynaceae, který vykazuje významný protinádorový a anti-HIV účinek. Na metabolismu ellipticinu se podílí cytochromy P450 (CYP) a peroxidasy za vzniku aktivačních a detoxifikačních metabolitů. Již v dřívějších pracích byly identifikovány jednotlivé isoformy CYP, které se podílí na oxidaci ellipticinu v různých tkáních (játra, plíce, ledviny) laboratorního potkana, vhodného modelu ilustrujícího osud ellipticinu v lidském organismu. V této diplomové práce byl studován vliv ellipticinu na obsah a aktivitu cytochromů P450 a na dalších složek MFO systému v tomto zvířecím modelu. Pro stanovení obsahu CYP a dalších složek MFO systému v isolovaných mikrosomech byly využity spektroskopické a elektrochemické metody. Pro stanovení katalytické aktivity CYP a NADPH:cytochrom P450 reduktasy byly využity reakce se specifickými substráty. Z výsledků vyplývá, že u zvířat premedikovaných ellipticinem dochází k zvýšení exprese i katalytické aktivity CYP podrodiny 1A ve všech testovaných orgánech (játra, ledviny, plíce). V játrech navíc dochází vlivem ellipticinu ke zvýšení exprese cytochromu b5 a zvýšení exprese a katalytické aktivity CYP3A. Podobně se i obsah a katalytická aktivita NADPH:cytochrom P450 reduktasy měnila v závislosti na premedikaci zvířat ellipticinem. Cytochrom P450 2S1...
|
|
|
Studium vlivu vybraných inhibitorů proteinkináz na lékovou rezistenci zprostředkovanou cytochromy P450
Janoušková, Adéla ; Hofman, Jakub (vedoucí práce) ; Novotná, Eva (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Studentka: Adéla Janoušková Školitel: RNDr. Jakub Hofman, Ph.D. Název diplomové práce: Studium vlivu vybraných inhibitorů proteinkináz na lékovou rezistenci zprostředkovanou cytochromy P450 Farmakokinetická léková rezistence často vede k selhání protinádorové léčby. Jedním z mechanizmů je zvýšený eflux léčiv z nádorových buněk, přičemž některé studie naznačují, že dalším mechanizmem by mohlo být zvýšené odbourávání léčiv na neaktivní metabolit. Cílem této práce bylo definovat možnou roli enzymů CYP3A4 a CYP2C8 ve fenoménu farmakokinetické rezistence a prozkoumat možnosti jejího ovlivnění novými cílenými léčivy. V první části jsme využili MTT proliferační metodu spolu s HepG2 buňkami stabilně transdukovanými příslušnými lidskými enzymy a prokázali signifikantní účast CYP3A4 na rezistenci vůči docetaxelu. V navazující části jsme pomocí komerčního kitu zkoumali inhibiční účinky čtyř vybraných inhibitorů tyrozinkináz vůči enzymu CYP3A4 v intaktních buňkách. Kobimetinib a dabrafenib vykazovaly signifikantní inhibiční aktivitu, zatímco osimertinib a brivanib nikoliv. V závěrečné části jsme pomocí MTT testu demonstrovali schopnost prvních dvou zmíněných léčiv modulovat rezistenci k docetaxelu, jež je...
|
|
|
Metabolismus inhibitorů tyrosinkinas, protinádorových léčiv nové generace
Čillíková, Olívia ; Indra, Radek (vedoucí práce) ; Kubíčková, Božena (oponent)
Nádorová onemocnění jsou po infarktu myokardu druhou nejčastější příčinou úmrtí ve světě. V posledních letech se výzkum v rámci cílené chemoterapeutické léčby zaměřil na inhibitory tyrosinkinas. Vandetanib je tyrosinkinasový inhibitor ovlivňující receptor pro epidermální růstový faktor (EGFR), přesmyk během transfekce (RET) a receptor 2 vaskulárního endoteliálního růstového faktoru (VEGFR-2). Primárně se využívá k léčbě medulárního karcinomu štítné žlázy. V lidském organismu je vandetanib biotransformován pomocí cytochromů P450 (CYP) a flavinmonooxygenas. Vandetanib je pomocí CYP oxidován pouze na jeden klinicky stejně účinný metabolit, a to N-desmethylvandetanib. CYP při biotransformaci chemických látek využívají primárně kofaktor NADPH. Předkládaná práce se zaobírá vlivem různých typů kofaktorů na oxidaci vandetanibu pomocí vybraných lidských rekombinantních cytochromů P450, a to CYP2C8 koexprimovaným s cyt b5, CYP2D6, CYP3A4 a CYP3A4 koexprimovaným s cyt b5, u nichž byla dříve prokázána účinná oxidace vandetanibu. Zkoumali jsme jak kofaktory NADPH, NADH a jejich směs v poměru 1:1 ovlivňují množství vzniklého N-desmethylvandetanibu při biotransformaci vandetanibu. Dále byl sledován vliv pH na oxidaci vandetanibu pomocí CYP3A4 a CYP3A4 koexprimovaného s cyt b5. Konkrétně jsme měřili množství...
|
|
|
Vliv NADPH:cytochrom P450 reduktasy a cytochromu b5 na metabolismus vandetanibu cytochromem P450 3A5
Škriabová, Simona ; Indra, Radek (vedoucí práce) ; Mrízová, Iveta (oponent)
Léčba rakoviny je možná několika způsoby. Jedním z nich je chemoterapie, kdy se onkologickým pacientům podává cytostatikum nebo kombinace více druhů léčiv. Cílem této bakalářské práce bylo studium a rozšíření poznatků o metabolismu protinádorového léčiva vandetanibu. Vandetanib je tyrosinkinasový inhibitor, který se od roku 2012 používá v Evropě na léčbu symptomatické nebo progresívní medulární rakoviny štítné žlázy. V předkládané bakalářské práci byla studovaná kinetika oxidace vandetanibu cytochromy P450 3A5. Byla studovaná oxidace dvěma různými systémy, jako první byly použité rekombinantní cytochromy P450 3A5 exprimované v hmyzích buňkách transfekovaných Baculovirem (SupersomyTM ) a jako druhé byly použité lidské rekombinantní cytochromy P450 3A5 exprimované v buňkách E.coli (Bactosomy). Dále byl studován vliv NADPH:CYP reduktasy a cytochromu b5 na oxidaci vandetanibu tímto cytochromem. Oba systémy tvořili demethylovaný metabolit vandetanibu, N-desmethylvandetanib, který byl separovaný pomocí metody HPLC. Studium enzymové kinetiky oxidace vandetanibu katalyzované rekombinantními lidskými CYP3A5R, 3A5BR, 3A5BLR u Bactosomů signalizuje, že do aktivního místa enzymu se mohou vázat dvě molekuly vandetanibu, což vede k efektivnější oxidaci. Získané výsledky také naznačují, že na oxidaci vandetanibu...
|
|
|
Optimalizace metody stanovení enzymové aktivity flavinových monooxygenas
Hovorková, Adéla ; Dračínská, Helena (vedoucí práce) ; Heidingsfeld, Olga (oponent)
Flavinové monooxygenasy, jako biotransformační enzymy katalyzující oxidaci širokého spektra cizorodých látek v organismech, byly dlouho v porovnání s cytochromy P450, rozsáhlejší skupinou biotransformačních enzymů, přehlíženy. Ke studiu metabolismu cizorodých látek se často užívají jaterní mikrosomy, které obsahují oba zmíněné biotransformační enzymy. Jejich katalytická aktivita se může z důvodu potřeby stejných kofaktorů překrývat, a proto je potřebné je vhodně rozlišit. Tato bakalářská práce se zabývá optimalizací metody pro stanovení enzymové aktivity flavinových monooxygenas v jaterních potkaních mikrosomech. Modelovou reakcí pro optimalizaci metody byla oxidace methyl-p-tolylsulfidu na methyl-p-tolylsulfoxid. Pro stanovení aktivity byly stanoveny nejvhodnější podmínky: prostředí o pH 9,5, 2mM methyl-p- tolylsulfid a 10minutová doba inkubace. Bylo zjištěno, že na oxidaci methyl-p-tolylsulfidu se podílejí i cytochromy P450, izoforma 1A1 nejvíce. Testovány byly i různé inhibitory obou výše zmíněných biotransformačních enzymů (kyselina lipoová, methimazol, Brij 35 a Triton X-100). Jako vhodný inhibitor katalytického účinku cytochromů P450 byl vybrán Brij 35, který neměl na rychlost oxidace katalyzovanou flavinovými oxygenasami žádný vliv. V závěru práce byla z prozatím neznámého důvodu opakovaně...
|
|
|
Studium vzájemného působení inhibitoru tyrosinkinas cabozantinibu a cytotoxického alkaloidu ellipticinu na expresi a aktivitu cytochromů P450 1A1, 1A2 a 1B1
Měkotová, Barbora ; Dračínská, Helena (vedoucí práce) ; Jeřábek, Petr (oponent)
Inhibitory tyrosinkinas jsou v posledních letech stále více využívány pro cílenou léčbu rakoviny, a to díky jejich schopnosti blokovat intracelulární signalizační dráhy, které jsou spojované s vývojem nádorů. Do této skupiny látek patří cabozantinib, který byl schválen pro léčbu karcinomu štítné žlázy a vykazuje účinnost proti několika dalším typům nádorových onemocnění. V protinádorové terapii se však velmi často používá kombinace více léčiv, což může mít za následek jejich vzájemné interakce zprostředkované cytochromy P450, které hrají hlavní roli v jejich metabolismu. Ačkoli tak může dojít k ovlivnění terapeutického účinku a vzniku nežádoucích účinků na organismus, nebylo doposud o vlivu cabozantinibu na biotransformační enzymy mnoho známo. V rámci této práce byl proto studován vliv cabozantinibu nejen samotného, ale také v kombinaci se známým cytostatikem ellipticinem na expresi a aktivitu cytochromů P450 1A1, 1A2 a 1B1 v játrech a ledvinách potkanů in vivo. Pomocí kvantitativní PCR byla nejprve stanovena genová exprese, míra exprese samotného proteinu byla sledována prostřednictvím metody Western blot s následnou imunodetekcí. Specifická aktivita byla sledována za použití specifických markerových reakcí, O-deethylace 7-ethoxyresorufinu pro CYP1A1, O-demethylace 7-methoxyresorufinu pro CYP1A2 a...
|
|
|
Studium role vybraných izoforem cytochromu P450 v cytostatické rezistenci na úrovni apoptózy
Moriová, Magdalena ; Hofman, Jakub (vedoucí práce) ; Novotná, Eva (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Studentka: Magdalena Moriová Školitel: RNDr. Jakub Hofman, Ph.D. Název diplomové práce: Studium role vybraných izoforem cytochromu P450 v cytostatické rezistenci na úrovni apoptózy Cytostatická rezistence je jednou z nejzáludnějších terapeutických překážek v onkologické léčbě. Vedle mechanizmů farmakodynamických hrají v lékové rezistenci důležitou roli též faktory farmakokinetické. Mezi takové mechanizmy zřejmě patří i enzymatická transformace účinné látky na neaktivní metabolit v nádorových buňkách, důkazy o zapojení enzymů ve farmakokinetické rezistenci jsou však dosud veskrze pouze nepřímé nebo zatížené interferenčními elementy. Za využití komparativních experimentů v HepG2 liniích s/bez overexprese CYP3A4 jsme se zaměřili na zhodnocení role tohoto klinicky důležitého enzymu v rezistenci vůči docetaxelu. Metodicky se jednalo o stanovení indukce apoptózy (aktivace kaspáz 3/7, 8 a 9) pomocí komerčních luminiscenčních kitů. Naše výsledky poukazující na signifikantní zapojení enzymu CYP3A4 v omezení účinnosti docetaxelu v intervalu 48 h, přičemž v časnějších intervalech se tento závěr nepotvrdil. Tato zjištění výborně korelují s výsledky našich předchozích studií zaměřených na proliferační úroveň. Získané...
|
|
|
Studium vlivu vybraných inhibitorů proteinkináz na lékovou rezistenci zprostředkovanou cytochromy P450
Janoušková, Adéla ; Hofman, Jakub (vedoucí práce) ; Novotná, Eva (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Studentka: Adéla Janoušková Školitel: RNDr. Jakub Hofman, Ph.D. Název diplomové práce: Studium vlivu vybraných inhibitorů proteinkináz na lékovou rezistenci zprostředkovanou cytochromy P450 Farmakokinetická léková rezistence často vede k selhání protinádorové léčby. Jedním z mechanizmů je zvýšený eflux léčiv z nádorových buněk, přičemž některé studie naznačují, že dalším mechanizmem by mohlo být zvýšené odbourávání léčiv na neaktivní metabolit. Cílem této práce bylo definovat možnou roli enzymů CYP3A4 a CYP2C8 ve fenoménu farmakokinetické rezistence a prozkoumat možnosti jejího ovlivnění novými cílenými léčivy. V první části jsme využili MTT proliferační metodu spolu s HepG2 buňkami stabilně transdukovanými příslušnými lidskými enzymy a prokázali signifikantní účast CYP3A4 na rezistenci vůči docetaxelu. V navazující části jsme pomocí komerčního kitu zkoumali inhibiční účinky čtyř vybraných inhibitorů tyrozinkináz vůči enzymu CYP3A4 v intaktních buňkách. Kobimetinib a dabrafenib vykazovaly signifikantní inhibiční aktivitu, zatímco osimertinib a brivanib nikoliv. V závěrečné části jsme pomocí MTT testu demonstrovali schopnost prvních dvou zmíněných léčiv modulovat rezistenci k docetaxelu, jež je...
|
|
|
Vliv inhibitorů tyrosinkinas vandetanibu a lenvatinibu a cytotoxického alkaloidu ellipticinu na biotransformační enzymy
Baráčková, Petra ; Dračínská, Helena (vedoucí práce) ; Václavíková, Radka (oponent)
Inhibitory tyrosinkinas jsou v posledních letech hojně využívanou skupinou látek pro cílenou terapii mnoha typů rakoviny. Doposud byl zkoumán především jejich metabolismus, na druhou stranu o jejich vlivu na expresi a aktivitu biotransformačních enzymů je známo jen velmi málo. Přitom právě změna exprese a aktivity enzymů může mít za následek nežádoucí interakce současně podávaných léčiv a jejich neblahé účinky na organismus. Tato diplomová práce studuje působení inhibitorů tyrosinkinas vandetanibu a lenvatinibu a cytotoxického alkaloidu ellipticinu na vybrané biotransformační enzymy v modelovém organismu laboratorního potkana in vivo. Cílem bylo charakterizovat vliv zkoumaných látek na genovou expresi, proteinovou expresi a aktivitu cytochromů P450 (CYP) 1A1, 1A2 a 1B1 a flavinových monooxygenas FMO1 a FMO3 v ledvinách a játrech. Z ledvin potkanů kontrolních a premedikovaných zkoumanými látkami byly izolovány mikrosomy a RNA. Pomocí elektropřenosu metodou Western blot a následné imunodetekce byla sledována a porovnána míra proteinové exprese CYP1A1/2 v ledvinách a CYP1B1, FMO1 a FMO3 v ledvinách a v játrech. Reverzní transkripcí byla z izolované RNA připravena cDNA, která byla využita jako templát pro kvantitativní PCR, pomocí které byla porovnána relativní míra genové exprese CYP1A1/2 v ledvinách...
|
|
|
Studium mechanismu účinku protinádorových léčiv na neuroblastomy
Černá, Tereza ; Stiborová, Marie (vedoucí práce) ; Souček, Pavel (oponent) ; Mrízová, Iveta (oponent)
Nádorová onemocnění jsou i přes veškeré pokroky v onkologické diagnostice a terapii druhou nejčastější příčinou úmrtnosti. Proto je naší snahou přispět ke zlepšení této situace. Cílem disertační práce bylo studium vlivu dvou protinádorových léčiv ellipticinu (Elli) a doxorubicinu (DOX) na vybrané nádorové i zdravé buněčné linie. Zvláštní zřetel byl kladen na rozšíření současných znalostí o metabolismu a cytostatických účincích Elli v neuroblastomových buněčných liniích. Jednalo se také o objasnění mechanismu vzniku resistence nádorových buněk vůči Elli a vysvětlení, jaký vliv na protinádorovou léčbu mohou vykazovat inhibitory histondeacetylas. V neposlední řadě bylo cílem vyvinout apoferritinový (Apo) nanotransportér, který by byl vhodný pro transport cytostatik do nádorových buněk. V disertační práci bylo zjištěno několik zásadních poznatků. Cytochrom P450 (CYP) 3A4 oxiduje Elli na metabolity, jež tvoří dva kovalentní adukty s DNA. Tvorba aduktů byla pozorována také v případě, kdy byl CYP3A4 enkapsulován do nanočásticových systému, konkrétně systémů liposomů či SupersomůTM . Množství aduktů bylo závislé na koncentraci enkapsulovaného CYP3A4. SupersomálníTM CYP3A4, ve srovnání s liposomálním CYP3A4, generuje větší množství aduktů s DNA díky přítomnost určitých typů lipidů a proteinů nebo cytochromu...
|
host ::
RSS.