|
|
Vývoj metody UHPLC pro studium stability venetoclaxu
Máchalová, Jitka ; Křížek, Tomáš (vedoucí práce) ; Kozlík, Petr (oponent)
Tato práce se zabývá vývojem chromatografické metody pro stanovení venetoclaxu a kontrolu jeho čistoty pomocí techniky UHPLC. Venetoclax je nízkomolekulární inhi- bitor antiapoptického proteinu Bcl-2, který hraje důležitou roli při regulaci apoptózy a při vzniku hematologické malignace. Venetoclax se tedy používá pro léčbu chronické lymfocytární leukemie. Kvůli problematické rozpustnosti analytu byl jako rozpouště- dlo vzorku zvolen 10mM vodný roztok H3PO4 : ACN s 40% objemovým zastoupením acetonitrilu. Dále byla nalezena optimální kombinace stacionární a mobilní fáze. Optimalizace byla prováděna především s ohledem na faktor chvostování píku vene- toclaxu a jeho rozlišení od nečistoty eluující v jeho těsné blízkosti. V optimalizované metodě byla použita kolona Acquity UPLC BEH Phenyl (100 × 2,10 mm; 1,7 µm) a jako mobilní fáze směs pufru (10mM H3PO4/NH3 o pH 2,5) s přídavkem 0,5% trifluoroctové kyseliny a ACN. Součástí validace metody bylo testování přesnosti, opa- kovatelnosti, meze detekce a kvantifikace, linearity a lineárního dynamického rozsahu, robustnosti metody a testování stability vzorku. Opakovatelnost retenčního času byla 0,07 % a opakovatelnost plochy píku byla 0,45 %. Hodnota meze detekce metody byla 1,6 · 10−5 mg mm−1 a hodnota meze kvantifikace byla 5,4 · 10−5 mg mm−1 . Linearita...
|
|
|
MS charakterizace komplexů rhenia
Vlk, Mikuláš ; Štícha, Martin (vedoucí práce) ; Kozlík, Petr (oponent)
Komplexy rhenia s organickými ligandy jsou díky svým radiochemickým vlastnostem perspektivní pro nukleární medicínu. Nachází široké využití v radiodiagnostice a paliativní léčbě. Pro použití v klinické praxi je však nutná jejich podrobná charakterizace a dostupnost vhodných analytických metod pro ověření jejich čistoty. V této práci byly připraveny a pomocí HRMS charakterizovány vybrané komplexy rhenia s 1,2-dihydroxybenzenem, 4-methyl-1,2-dihydroxybenzenem a 2,3- dihydroxynaftalenem. U připravených komplexů byly studovány fragmentační mechanizmy k jejichž pochopení výrazně přispěly experimenty uskutečněné v kolizní cele.
|
|
|
Příprava a charakterizace kationických liposomů nesoucích nové imunoadjuvans.
Houšť, Jiří ; Nesměrák, Karel (vedoucí práce) ; Kozlík, Petr (oponent)
Cílem této diplomové práce bylo připravit, charakterizovat a stanovit enkapsulační efektivitu kationických liposomů složených z dimethyldioktadecylamonium bromidu (DDAB) a cholesterolu nesoucích nové léčivo MT05 s imunoadjuvantním účinkem. Byl sledován vliv teploty ultrazvukové lázně a objemu liposomální suspenze na výsledné hodnoty průměrné velikosti liposomů a polydisperzního indexu. Jako nejefektivnější se jevila příprava liposomů pomocí ultrazvukové lázně při 60 řC. Objem liposomů podstupující sonikaci neměl na výsledné hodnoty průměrné velikosti liposomů a polydisperzního indexu vliv, čas sonikace byl šest hodin a mohl by být zkrácen použitím ultrazvukové lázně o vyšším výkonu. Stanovení enkapsulační efektivity metodou HPLC-MS/MS probíhalo ve třech samostatných experimentech. V prvním experimentu byla enkapsulační efektivita kationických liposomů 30,1 ± 8,5 %, ve druhém 43 ± 25 % a ve třetím 32 ± 25 %. Stanovení množství DDAB probíhalo pouze u liposomů připravených při třetím experimentu. Množství DDAB v prvním replikátu očištěných liposomů činilo 78,9 ± 3,7 %, ve druhém 65,4 ± 1,8 % a ve třetím 53,8 ± 1,4 %. Skutečný molární poměr látek MT05 a DDAB u liposomů připravených při třetím experimentu činil u prvního replikátu 1,0:15,8, u druhého 1,0:16,7 a u třetího 1,0:20,5. Klíčová slova:...
|
|
|
Separace cytostaticky aktivních sloučenin metodou hydrofilní interakční kapalinové chromatografie
Voborná, Markéta ; Kalíková, Květa (vedoucí práce) ; Kozlík, Petr (oponent)
Tato diplomová práce se zabývá nalezením optimálních podmínek pro separaci čtyř skupin analytů odvozených od 7-deazaadenosinu (každá skupina obsahovala 4 derivatizované nukleosidy) pomocí hydrofilní interakční kapalinové chromatografie. Všech 16 studovaných analytů bylo syntetizováno jako potenciální cytostatika. Byl testován vliv typu stacionární fáze chromatografické kolony, poměru organické a vodné složky mobilní fáze, pH použitého pufru v mobilní fázi a koncentrace octanu amonného v tomto pufru v rozsahu 5 - 50 mM. Pro separace těchto analytů byly testovány tři různé stacionární fáze, a to čistě silikagelová (kolona Spherisorb® Silica), amidová (kolona TSKgel Amide-80) a nativní cyklofruktanová (kolona Frulic-N). Rozměry všech kolon byly stejné, tj. 2504,6 mm s velikostí částic 5 µm. Během optimalizace separace byl studován i retenční a separační mechanismus v HILIC. Bylo zjištěno, že ve všech testovaných chromatografických systémech se na mechanismu separace podílí jak rozdělování analytů mezi vodnou vrstvu částečně ukotvenou na povrchu stacionární fáze a mobilní fázi, tak i adsorpce analytů na stacionární fázi. Tři skupiny analytů (SK1, SK3, SK4) se podařilo separovat do 3 píků pouze částečně. Náznak separace do 4 píků byl zaznamenán pouze u směsí analytů SK1 a SK2 na koloně Frulic-N při...
|
|
|
Vývoj HPLC metody pro hodnocení čistoty a stability fesoterodinu za použití přístupu plánování experimentu
Erdeová, Karolína ; Kozlík, Petr (vedoucí práce) ; Bosáková, Zuzana (oponent)
Cílem této diplomové práce byl vývoj a validace metody pro hodnocení čistoty a stability fesoterodinu pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC). Vývoj HPLC metody byl proveden pomocí metody plánovaných experimentů (DOE), jež umožňuje nalezení optimálních podmínek separace za minimálního počtu experimentálních analýz. Design byl proveden pomocí lineárního modelu L18. Chromatografický systém vyvinuté metody se skládal z oktylové stacionární fáze (SF) XBridge BEH - C8 (100 x 4,6 mm, 2,5 µm), dvousložkové mobilní fáze (MF) složené z 10mM borátového pufru o pH 9,2 a MeOH v různém poměru dle gradientového programu. Průtok činil 0,7 ml/min, teplota na koloně 35 řC a detekce byla provedena pomocí detektoru diodového pole (DAD) při 227 nm. Doba analýza činila 22 min. Vyvinutá metoda byla zvalidována a byla provedena zátěžová studie. Byl sledován vliv zvýšené teploty (60 řC), vlhkosti (10 a 75% relativní vlhkosti (RV)), kyselého a zásaditého prostředí, vzdušného kyslíku a světla. Pro všechny experimenty zátěžových studií byla vyhodnocena čistota hlavního píku. Pomocí vyvinuté metody byla zjištěna citlivost účinné látky na hydrolýzu v rámci rozmezí hodnot pH 2 - 10.
|
|
|
Stanovení esterů testosteronu v injekční lékové formě metodou HPLC-DAD
Folprechtová, Denisa ; Kozlík, Petr (vedoucí práce) ; Kubíčková, Anna (oponent)
Anabolické steroidy jsou v současné době velmi kontroverzním tématem nejen pro své terapeutické využití, ale především z důvodu nezákonného zneužívání ve sportovním odvětví. Cílem této bakalářské práce byl vývoj rychlé, selektivní, účinné a jednoduché metody vysokoúčinné kapalinové chromatografie vhodné ke stanovení vybraných anabolických steroidů v injekční lékové formě. Analyzovaný vzorek farmaceutického přípravku Sustamed obsahoval čtyři estery testosteronu - testosteron propionát, testosteron fenylpropionát, testosteron isokaproát a testosteron dekanoát. Optimalizované HPLC-DAD podmínky vhodné ke stanovení vybraných esterů testosteronu byly následující: povrchově porézní kolona Poroshell HPH-C18 (3,0 × 100 mm, 2,7 µm), mobilní fáze složená z 10mmol/l roztoku octanu amonného o pH 4,5 a acetonitrilu za gradientové eluce. Kolona byla temperována na 50 řC, objem nástřiku byl 1 µl, průtok byl nastaven na 1 ml/min a detekce probíhala při 240 nm. Celková doba analýzy byla 6 minut. Klíčová slova anabolické steroidy, estery testosteronu, HPLC-DAD
|
|
|
Analýza farmaceuticky aktivní látky vemurafenibu pomocí LC
Filounová, Barbora ; Kozlík, Petr (vedoucí práce) ; Křížek, Tomáš (oponent)
Cílem této práce bylo vyvinout a optimalizovat metodu kapalinové chromatografie se spektrofotometrickou detekcí vhodnou ke stanovení čistoty a obsahu vemurafenibu v pevné lékové formě a provést stabilitní studii daného léčiva. Optimalizovaný separační systém se skládal z kolony Poroshell HPH-C18 (3 × 100 mm, 2,7 μm) temperované na 30 žC a mobilní fáze 10 mM fosfát amonný pH 3,0/acetonitril při průtoku 0,6 ml/min za gradientové eluce. Detekce probíhala při vlnové délce 250 nm. Byla stanovena kalibrační závislost vemurafenibu v koncentračním rozmezí 0,4 - 1,2 mg/ml a určen limit detekce jako 5,0 µg/ml a limit kvantifikace jako 16,5 µg/ml. Byl proveden stabilitní test vlivu samotného tepla (80 žC) a tepla s vlhkostí (80 žC/75 % relativní vlhkost) na práškovou formu vemurafenibu. Dále byla provedena degradační studie působením kyseliny chlorovodíkové (0,1M roztok), hydroxidu sodného (0,1M roztok), a peroxidu vodíku (3% a 0,3% roztok) na roztok vemurafenibu v methanolu. Byla zjištěna významná degradace působením kyseliny chlorovodíkové, naopak hydroxid sodný na vemurafenib žádný vliv neměl. Při oxidaci peroxidem vodíku byla také zaznamenána degradace. Teplo ani vlhko nezpůsobilo žádnou významnou změnu vemurafenibu. Žádný z testovaných excipientů neměl vliv na rozklad vemurafenibu. Na základě provedených...
|
|
|
Strukturní analýza přírodních látek s větvenými alifatickými řetězci pomocí hmotnostní spektrometrie
Strmeň, Timotej ; Cvačka, Josef (vedoucí práce) ; Kozlík, Petr (oponent)
Předkládaná diplomová práce se zabývá analýzou mastných alkoholů pomocí hmotnostní spektrometrie. Teoretická část shrnuje základní poznatky o mastných alkoholech, jejich výskytu, vlastnostech, analýze a využití. Experimentální část se zabývá hledáním vhodného derivatizačního činidla pro mastné alkoholy, které by umožnilo jejich detekci měkkými ionizačními technikami a zároveň jejich strukturní analýzu z fragmentačních spekter připravených derivátů. Hlavním cílem strukturní analýzy je lokalizace methylového větvení v řetězci mastných alkoholů.
|
|
|
Separační vlastnosti klasických porézních kolon a povrchově porézních kolon v analýze ambroxolu a jeho tří nečistot
Slováček, Jan ; Kozlík, Petr (vedoucí práce) ; Tirčová, Barbora (oponent)
Cílem této práce bylo porovnání separace ambroxolu a jeho tří nečistot na koloně s plně porézními částicemi a na kolonách s povrchově porézními částicemi. Byly použity kolony Acquity BEH Shield RP18, Kinetex EVO C18 a Kinetex C18. Byla porovnána separace těchto látek při různých hodnotách pH pufrů (borátový pufr o pH = 9,70 a fosfátový pufr o pH = 7,00 a pH = 3,00) a při různých gradientových programech. Použitím kolon s povrchově porézními částicemi vždy došlo ke zkrácení doby analýzy. Další výhodou bylo snížení zpětného tlaku na koloně oproti koloně s plně porézními částicemi Acquity BEH Shield RP18. V závislosti na druhu kolony a mobilní fáze se také lišila selektivita analytů ke koloně. Nejlepších separačních podmínek bylo dosaženo s kolonou s plně porézními částicemi Acquity BEH Shield RP18 a gradientového programu Metody 2, která obsahovala borátový pufr. Doba analýzy byla 10 minut, poslední pík eluuoval v deváté minutě. Dávkovač vzorků byl temperován na teplotu 10 řC a nástřik byl 2 μl. Kolona byla temperována na 30 řC. Detekce probíhala při vlnové délce 247 nm. Složka A obsahovala 10mM borátový pufr o pH = 9,70 a složkou B byl acetonitril. Při použití fosfátového pufru o pH = 7,00 byly pro separaci nejvhodnější kolony s povrchově porézními částicemi. Docházelo k vyšším účinnostem, menším...
|
|
|
HPLC studie chemických reakcí
Krouská, Hana ; Kubíčková, Anna (vedoucí práce) ; Kozlík, Petr (oponent)
V této práci byla studována hydrolýza fenylisothiokyanátu a následný samovolný rozpad difenylthiomočoviny. Pro sledování těchto reakcí byla vybrána metoda RP-HPLC s UV detekcí. Byla vyvinuta metoda isokratické eluce, kde bylo optimalizováno složení mobilní fáze a rychlost průtoku. Rozpad fenylisothiokyanátu ve vodném prostředí byl sledován v závislosti na pH a na teplotě reakce. Následný samovolný rozpad difenylthiomočoviny byl sledován při teplotě 80 řC a v závislosti na pH.
|
host ::
RSS.