|
|
Separace fosfolipidů metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie
Erdeová, Karolína ; Čabala, Radomír (vedoucí práce) ; Sobotníková, Jana (oponent)
Fosfolipidy jsou součástí buněčných membrán všech živých organismů. Jedná se o nejvýznamnější skupinu polárních lipidů, vyznačující se amfifilními vlastnostmi. Tyto vlastnosti vyplývají z jejich molekulární struktury, která se skládá z hydrofobních mastných řetězců a polární hlavice. Podle polární hlavice se dělí fosfolipidy do příslušných tříd. Poměr fosfolipidových tříd, zastoupených v bakteriální membráně, značně odráží životní pochody mikroorganismu. Pomocí změn v zastoupení těchto tříd lze sledovat vliv vnějšího prostředí, čehož se využívá v mikrobiologickém výzkumu. Pro sledování fosfolipidového složení vyšlechtěného kmene Bacillus subtilis, který je intenzivně zkoumán pro produkci antibiotik, se stále využívá tenkovrstvá chromatografie. Její časová náročnost výzkum značně zpomaluje, a proto byly podmínky tohoto uspořádání přeneseny na HPLC. Pro tyto účely byla metoda optimalizována formou nelineárního gradientu. Vhodnost metody byla testována na vzorku bakteriálních membránových lipidů, který obsahoval pět fosfolipidových tříd, z čehož dvě majoritní. Jejich poměrné zastoupení lze stanovit, nicméně je nutno pečlivě volit objem nastřikovaného vzorku, aby se zabránilo překročení úzkého koncentračního rozsahu metody. Klíčová slova: fosfolipidy, HPLC, optimalizace, validace, HILIC, NP-HPLC
|
|
|
Vývoj HPLC metody pro hodnocení čistoty a stability fesoterodinu za použití přístupu plánování experimentu
Erdeová, Karolína ; Kozlík, Petr (vedoucí práce) ; Bosáková, Zuzana (oponent)
Cílem této diplomové práce byl vývoj a validace metody pro hodnocení čistoty a stability fesoterodinu pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC). Vývoj HPLC metody byl proveden pomocí metody plánovaných experimentů (DOE), jež umožňuje nalezení optimálních podmínek separace za minimálního počtu experimentálních analýz. Design byl proveden pomocí lineárního modelu L18. Chromatografický systém vyvinuté metody se skládal z oktylové stacionární fáze (SF) XBridge BEH - C8 (100 x 4,6 mm, 2,5 µm), dvousložkové mobilní fáze (MF) složené z 10mM borátového pufru o pH 9,2 a MeOH v různém poměru dle gradientového programu. Průtok činil 0,7 ml/min, teplota na koloně 35 řC a detekce byla provedena pomocí detektoru diodového pole (DAD) při 227 nm. Doba analýza činila 22 min. Vyvinutá metoda byla zvalidována a byla provedena zátěžová studie. Byl sledován vliv zvýšené teploty (60 řC), vlhkosti (10 a 75% relativní vlhkosti (RV)), kyselého a zásaditého prostředí, vzdušného kyslíku a světla. Pro všechny experimenty zátěžových studií byla vyhodnocena čistota hlavního píku. Pomocí vyvinuté metody byla zjištěna citlivost účinné látky na hydrolýzu v rámci rozmezí hodnot pH 2 - 10.
|
|
|
Separace fosfolipidů metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie
Erdeová, Karolína ; Čabala, Radomír (vedoucí práce) ; Sobotníková, Jana (oponent)
Fosfolipidy jsou součástí buněčných membrán všech živých organismů. Jedná se o nejvýznamnější skupinu polárních lipidů, vyznačující se amfifilními vlastnostmi. Tyto vlastnosti vyplývají z jejich molekulární struktury, která se skládá z hydrofobních mastných řetězců a polární hlavice. Podle polární hlavice se dělí fosfolipidy do příslušných tříd. Poměr fosfolipidových tříd, zastoupených v bakteriální membráně, značně odráží životní pochody mikroorganismu. Pomocí změn v zastoupení těchto tříd lze sledovat vliv vnějšího prostředí, čehož se využívá v mikrobiologickém výzkumu. Pro sledování fosfolipidového složení vyšlechtěného kmene Bacillus subtilis, který je intenzivně zkoumán pro produkci antibiotik, se stále využívá tenkovrstvá chromatografie. Její časová náročnost výzkum značně zpomaluje, a proto byly podmínky tohoto uspořádání přeneseny na HPLC. Pro tyto účely byla metoda optimalizována formou nelineárního gradientu. Vhodnost metody byla testována na vzorku bakteriálních membránových lipidů, který obsahoval pět fosfolipidových tříd, z čehož dvě majoritní. Jejich poměrné zastoupení lze stanovit, nicméně je nutno pečlivě volit objem nastřikovaného vzorku, aby se zabránilo překročení úzkého koncentračního rozsahu metody. Klíčová slova: fosfolipidy, HPLC, optimalizace, validace, HILIC, NP-HPLC
|
host ::
RSS.