|
| |
|
|
Endokrinní disruptory a jejich vliv na expresi cytochromu P450 1A2
Orlovská, Ľubica ; Dračínská, Helena (vedoucí práce) ; Ječmen, Tomáš (oponent)
Termín "endokrinní disruptor" se používá pro sloučeniny, které napodobují nebo antagonizují účinky endogenních hormonů, mění syntézu a metabolismus přirozených hormonů nebo modifikují hladiny hormonálních receptorů. Syntetický estrogen 17α- ethinylestradiol (EE2) a karcinogenní látka znečišťující životní prostředí, benzo[a]pyren (BaP), patří do skupiny chemikálií, které jsou označeny jako exogenní sloučeniny s endokrinní destrukcí, zatímco estrogenový hormon 17β-estradiol (EST) je přírodní endogenní endokrinní disruptor. V bakalářské práci byl studován vliv těchto endokrinních disruptorů a jejich kombinací na expresi a specifickou aktivitu CYP1A2. V rámci této práce byla izolována RNA z plic potkanů nepremedikovaných a premedikovaných uvedenými endokrinními disruptory. Metodou reverzní transkripce byla RNA převedena na cDNA. Relativní zastoupení CYP1A2 bylo kvantifikováno metodou kvantitativní PCR v játrech, ledvinách a plicích. Ve vzorcích mikrosomální frakce jater byla stanovena míra exprese CYP1A2 metodou Western blot s následnou imunodetekcí. Nakonec byla v játrech stanovena specifická aktivita CYP1A2 měřením O-demethylace 7-methoxyresorufinu. Bylo potvrzeno, že BaP indukuje genovou expresi CYP1A2 v játrech, ledvinách a plicích, a to i v kombinaci s EE2 a EST. Oba estrogeny nicméně snižují...
|
|
|
Indukce a detekce senescence in vitro
Kostílek, Štěpán ; Stiborová, Marie (vedoucí práce) ; Dračínská, Helena (oponent)
V dnešní době jsou, i přes neustálý pokrok novodobé medicíny a terapeutických metod, jedním z nejrozšířenějších a nejzávažnějších problémů nádorová onemocnění. Počet pacientů s nádorovým onemocněním každoročně vzrůstá a navzdory učiněným pokrokům minulých let v této oblasti moderní medicíny jsou tato onemocnění stále velmi špatně léčitelná. Předkládaná práce se zabývá indukcí a detekcí senescence vyvolané u dvou lidských buněčných linií, nádorové a nenádorové - lidské neuroblastomové buněčné linii UKF-NB-4 a lidské fibroblastové linii HDFn. Senescence byla indukována roztokem peroxidu vodíku anebo dlouhodobou kultivací. Detekce takto vyvolané senescence byla prováděna pomocí histochemického barvení X-Gal a rovněž vyhodnocením na základě morfologických změn buněk. V buněčné linii HDFn byly patrné senescentní buňky po obarvení kitem pro X-Gal. Podíl senescentních buněk stoupal s koncentrací peroxidu vodíku. V neuroblastomové linii nebyla senescence prokazatelná pomocí barvení kitem pro X-Gal, i když buňky ošetřené roztokem peroxidu vodíku vykazovaly morfologické rysy spojené se senescencí. Klíčová slova: senescence, peroxid vodíku, fibroblasty, neuroblasty, SA-β-Gal
|
|
|
Molární poměr cytochromu b5 k jeho reduktasam ovlivňuje aktivitu cytochromu P450 1A1 vůči Sudanu I
Netolický, Jakub ; Martínek, Václav (vedoucí práce) ; Dračínská, Helena (oponent)
Cytochromy P450 jsou evolučně velmi starou skupinou enzymů, která zahrnuje celou řadu isoforem a její zástupce lze najít u živočichů, rostlin, hub, bakterií i některých virů. Patří mezi enzymy katalyzující první fázi biotransformace léčiv, polutantů a jiných xenobiotik. Právě z tohoto důvodu patří mezi jedny z nejvíce zkoumaných enzymů a je snahou zmapovat jeho účinky na xenobiotika a léky. Cytochrom P450 potřebuje pro svou funkci donory elektronů, mezi hlavní patří NADPH:cytochrom P450 oxidoreduktasa a cytochrom b5. Alternativní reduktasou která v tomto procesu také participuje je NADH:cytochrom b5 oxidoreduktasa, který je schopná redukovat cytochrom b5. Všechny tyto tři enzymy nacházíme v membránách endoplasmatického retikula, kde spolu přirozeně interagují. Tato práce se zaměřuje na aktivitu lidského rekombinantního cytochromu P450 1A1 vůči karcinogennímu azobarvivu Sudan I, konkrétně mapuje tvorbu hlavních metabolitů v závislosti na vzájemném poměru cytochromu b5 k NADPH:cytochrom P450 oxidoreduktase a také k NADH:cytochrom b5 oxidoreduktase. Klíčová slova: cytochrom P450 1A1, NADPH:cytochrom P450 oxidoreduktasa, cytochrom b5, NADH:cytochrom b5 oxidoreduktasa, Sudan I, HPLC
|
|
| |
|
|
N-oxidy morfinanových alkaloidů
Palušák, Martin ; Dračínská, Helena (vedoucí práce) ; Chmelík, Josef (oponent)
Morfinanové alkaloidy patří mezi důležité látky při léčbě a potlačení bolesti. Pochopení účinku těchto látek je důležité pro zdokonalení léčby pomocí těchto alkaloidů, například při syntéze nových derivátů se zvýšenými účinky. Tato práce má za cíl shrnout dosavadní znalosti o těchto látkách od jejich biosyntézy v rostlinách, až po celkový účinek na organismus. Cílem praktické části práce je pak určit relativní konfiguraci morfinanových N- oxidů vzniklých in situ oxidací výchozích alkaloidů pomocí NMR spektroskopie a molekulového modelování. Pomocí NMR spektroskopie byly určeny relativní konfigurace oxidovaných i neoxidovaných forem morfinu, kodeinu a tebainu a zjištěn poměr vzniklých N-oxidů in situ. Tyto výsledky byly porovnány s kvantově chemickými výpočty provedenými metodou DFT. Porovnáním obou metod byla ověřena spolehlivost zvolené výpočetní metody. Klíčová slova: NMR spektroskopie, morfin, kodein, tebain, N-oxidy, metabolismus alkaloidů
|
|
|
Acidobazické a tautomerní rovnováhy bází nukleových kyselin
Kovács, Jakub ; Dračínská, Helena (vedoucí práce) ; Petrželová, Simona (oponent)
Nukleové kyseliny a jejich složky patří mezi nejdůležitější molekuly pro život. Přesunem vodíkového atomu po skeletu pyrimidinových a purinových bází nukleových kyselin vznikají různé tautomerní formy těchto bází. V závislosti na pH prostředí mohou být navíc báze nukleových kyselin protonovány nebo deprotonovány. Protonace/deprotonace bází nukleových kyselin se účastní poměrně velkého množství biochemických dějů. Jedná se hlavně o procesy spojené s regulací, replikací či genovou expresí, ve kterých hrají ionizované báze důležitou úlohu ve stabilizaci sekundárních struktur nukleových kyselin, či v acidobazické katalýze autolytických reakcí jejich fosfodiesterové kostry. Sekundární struktury stabilizované ionizovanými bázemi jsou navíc spojené s různými genetickými chorobami. Protonace a deprotonace jsou však velmi rychlé a dynamické procesy, které je velmi náročné experimentálně detekovat. Tato práce se proto zabývá vypracováním spolehlivé metodiky, pomocí které by bylo možné poměrně rychle zjistit, na kterém atomu dusíku pyrimidinových bází dochází k protonaci. V experimentech byla využita NMR spektroskopie, pomocí které byly nejprve zkoumány pyrymidinové báze, u kterých je místo protonace jednoznačně určeno strukturou. Byly získány experimentální NMR parametry pro neutrální i ionizované formy. NMR...
|
|
|
Homeostáze rostlinných hormonů: vzájemné působení mezi auxiny a cytokininy
Doležálková, Lucie ; Zažímalová, Eva (vedoucí práce) ; Dračínská, Helena (oponent)
4 AbstraktAbstraktAbstraktAbstrakt Vzájemná kooperace fytohormonů je jedním z ústředních témat biologie rostlin už od 19. století. Díky pokrokům v molekulární biologii je v současnosti objasněna řada metabolických drah spojených s jednotlivými skupinami fytohormonů, nicméně jejich kooperace nám z větší části zůstává stále neznámá. Cílem této práce je posouzení účinků exogenní aplikace různých zástupců cytokininů na listové segmenty ovsa setého (Avena sativa) - a to jak specificky na hladiny fytohormonů, tak i v širším fyziologickém kontextu (vzhledem k jejich senescenci) V práci jsme prokázali zvýšení hladin auxinu následkem exogenní aplikace vybraných cytokininů a poukázali na biologickou aktivitu trans-zeatin-9-glukosidu (považovaného dosud za ireverzibilní deaktivační formu) ve vybraném rostlinném modelu. Klíčová slova: fytohormony, auxin, cytokininy, Avena sativa, senescenční biotest
|
|
| |
|
|
Studium metabolismu inhibitorů tyrosinkinas, protinádorových léčiv nové generace
Hromek, Vlastimil ; Stiborová, Marie (vedoucí práce) ; Dračínská, Helena (oponent)
Vandetanib je orální terapeutikum působící jako inhibitor tyrosinkinas. Specificky cílí na receptory signálních drah, jež jsou zodpovědné za vznik a proliferaci medulárního karcinomu štítné žlázy. Léčivo bylo v roce 2011 schváleno FDA (US Food and Drug Administration) pro léčbu symptomatického a progresivního medulárního karcinomu štítné žlázy u pacientů s neoperovatelnou lokálně pokročilou nebo metastázovanou rakovinou štítné žlázy. Nedávné studie naznačují, že jedním z problémů při léčbě pacientů vandetanibem je biotransformace tohoto xenobiotika v lidském organismu. Diplomová práce rozšiřuje poznatky o metabolismu vandetanibu na jeho metabolity. V experimentech byly použity potkaní a lidské jaterní mikrosomy a lidské a potkaní cytochromy P450 (CYP) exprimované v SupersomechTM . Dále byly použity lidské flavimonooxygenasy (FMO), exprimované v SupersomechTM . Použité potkaní mikrosomy byly isolovány z jater potkanů premedikováných induktory jednotlivých forem cytochromů P450 nebo z jater nepremedikovaných zvířat (kontrolní mikrosomy). Pomocí HPLC byly metabolity separovány a následně identifikovány pomocí hmotnostní spektrometrie. Identifikované metabolity, tvořené oxidací vandetanibu potkaními mikrosomy, byly N-desmethylvandetanib a vandetanib N-oxid. Vandetanib N-oxid byl tvořen ve všech...
|
host ::
RSS.