|
|
Příprava protinádorové vakcíny pro imunoterapii karcinomu ovária za podmínek správné výrobní praxe
Fučíková, Jitka ; Jílek, Petr (vedoucí práce) ; Pávek, Petr (oponent)
Příprava protinádorové vakcíny pro imunoterapii karcinomu ovária za podmínek správné výrobní praxe Úvod: Dendritické buňky (DC) jsou jediné antigen prezentující buňky schopné aktivovat naivní T-lymfocyty. Aby byly schopné aktivovat imunitní odpověď musí DC projít procesem maturace. Nové techniky umožňují přípravu DC z monocytů, a je tedy možné připravovat protokoly protinádorové imunoterapie založené na DC. Principem je podání velkého množství DC, které prezentují nádorové antigeny a následná aktivace specifické imunitní reakce proti nádorové tkáni. Pro zahájení klinických studiích je nezbytný vývoj protokolů, které zaručují přípravu vakcíny za podmínek Správné výrobní praxe podle požadavků Státního ústavu pro kontrolu léčiv. Cíl: Vývoj protokolu pro přípravu DC pro imunoterapii karcinomu ovária za podmínek Správné výrobní praxe. Definice optimálního maturačního stimulu, který zaručí nejlepší aktivaci antigen specifických T lymfocytů. Materiál a metody: Z monocytů periferní krve zdravých dárců byly připraveny nezralé DC. Testovali jsme tři různá média, připadající v úvahu pro klinické použití, Cell Gro, RPMI s 10% fetálního jehněčího séra a RPMI s 5% lidského AB séra. V dalším kroku byly DC aktivovány třemi různými maturačními stimuly (směsí cytokinů, Poly I:C a lipopolysacharidem (LPS)). Po 24h byl...
|
|
|
Zavedení imunodetekční metody pro stanovení aktivace AMPK signální kaskády v buněčné linii LS174T
Dubecká, Michaela ; Pávek, Petr (vedoucí práce) ; Nachtigal, Petr (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Studentka: Michaela Dubecká Školitel: Doc. PharmDr. Petr Pávek, Ph.D. Název diplomové práce: Zavedení imunodetekční metody pro stanovení aktivace AMPK signální kaskády v buněčné linii LS174T LKB1/AMPK je hlavní energetickou dráhou v buňce, která integruje různé extra- a intracelulární signály a jako odpověď na signály reguluje energetický metabolismus a udržuje homeostázu v buňce. AMPK kaskáda má proto zásadní význam pro přežití, růst a vývoj buněk i celého organismu. Tato signální kaskáda má supresivní vliv na nádorové změny v buňce. Metformin, široce užívané léčivo v terapii diabetu mellitu 2. typu, vykazuje významnou protinádorovou aktivitu. Ačkoliv přesný mechanismus účinku metforminu stále není znám. Metformin v buňce indukuje stres podobný metabolickému stresu inhibicí komplexu I mitochondriálního respiračního řetězce, což má za následek zvýšení plazmatických hladin AMP. AMP se váže k AMPKγ subjednotce a aktivuje AMPK, jež je vzápětí prostřednictvím LKB1 fosforylována na Thr172 kinázové domény AMPKα subjednotky, což vede ke spuštění podřazených (angl. downstream) kináz a výsledkem je ovlivnění metabolismu na úrovni genové exprese. Následně dochází ke spuštění katabolických procesů (glykolýza,...
|
|
|
DNA methylation changes in oropharyngeal carcinoma
Birknerová, Natália ; Matoušková, Petra (vedoucí práce) ; Pávek, Petr (oponent)
utická fa á é Katedra biochemických věd Kandidát: Natália Birknerová Školitel: doc. Petra Matoušková, Ph.D. Název diplomové práce: Zmeny v metylácií DNA u orofaryngeáneho karcinó Orofaryngeálny karcinóm sa radí medzi karcinómy hlavy a krku, ktoré sú siedmym ajčastejším malígnym ochorením v celosvetovom meradle. Prevažná väčšina ( sú karcinómy skvamóznych buniek. Orofaryngeálny karcinóm zahŕňa nádory jazyka, mandlí, mäkkého podnebia a hltanu. tradičných rizikových v, ľudský papillomavírus bol aný ako ďalší rizikový faktor pre vývoj týchto nádorov. Epigenetické zmeny sú dedičné zmeny v génovej expresii, pri ktorých nedochádza k zmenám môžu prispievať ku karcinogenéze. Zahrňujú DNA metyláciu, modifikáciu histónov transkripčnú génovú reguláciu pomocou mi Cieľom tejto štúdie bolo preskúmať hladiny metylácie vybraných tumor supresorových génov u spinocelulárneho karcinómu orofaryngeálnych buniek (OPS v porovnaní s nenádorovým kontrolnými Hladiny metylácie DNA vybraných tumor supresorových génov boli analyzované metylačne špecifi amplifikáci sond záv slej od ligácie (MS MLPA) v nádorových vzorkách ich prislúchajúcich metastázach, nemetastázujúcich nádorových vzorkách a kontrolných vzorkách (nenádorové mandle). Pomocou 15% medznej hodnoty pre metyláciu sme pozorovali štatisticky významne vyššiu metyláciu v génoch...
|
|
| |
|
|
Ovlivnění buněčné direrenciace u nádorových buněk analýzou exprese proteinu Serca3 jako markeru diferenciace
Šerá, Pavlína ; Pávek, Petr (vedoucí práce) ; Šimůnek, Tomáš (oponent)
V předložené práci jsme studovali proces buněčné diferenciace navozený inhibitory histon deacetyláz v buněčných liniích získaných z různých typů nemalobuněčného karcinomu plic. Cílem práce bylo studovat vzájemné spoluovlivnění procesu buněčné diferenciace a exprese proteinu SERCA (ATPázy Sarko/Endoplazmatického retikula), který zajišťuje transport vápníku z cytozolu do endoplazmatického retikula. Buněčné linie různých plicních nádorů byly kultivovány in vitro za přidání různých inhibitorů histon deacetylázy ze skupiny mastných kyselin s krátkým řetězcem. Exprese SERCA proteinu byla hodnocena pomocí metody Western blot za použití primárních monoklonálních protilátek IID8 a PLIM430, které rozpoznávájí enzymy SERCA2 a SERCA3. Naše experimenty ukazují, že exprese proteinů SERCA a proces buněčné diferenciace jsou vzájemně propojeny ve všech sledovaných buněčných liniích nádoru plic (A549, Calu-3, ChaGoK-1, NCI-H292 and NCI-H460). Po navození buněčné diferenciace inhibitory histon deacetylázy jako jsou butyrát, valerát či fenylbutyrát sodný, byla pozorována především zvýšená exprese proteinu SERCA3. Zvýšení exprese proteinu SERCA3 bylo specifické, neboť úroveň exprese proteinu SERCA2 i po přidání léčiv zůstala nezměněna. Souhrnem lze říci, že naše výsledky potvrzují a rozšiřují původní hypotézu...
|
|
|
Testing of newly synthetized compounds with Constitutive androstane receptor (CAR)
Mouratidis, Ioannis ; Pávek, Petr (vedoucí práce) ; Kovařík, Miroslav (oponent)
Karlova Univerzita v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Kandidát: Ioannis Mouratidis Školitel: Doc. PharmDr. Petr Pávek Ph.D. Testing of newly synthesized compounds with constitutive androstane receptor (CAR) V minulých letech probíhal intenzivní výzkum hledající ligandy nově objevených nukleárních receptorů. Důvodem této intenzivní výzkumné činnosti je případný široký léčebný potenciál jaderných receptorů. Nukleární receptory se podílí na řízení metabolismu a vylučování různých látek, endogenních i exogenních, a tak řídí homeostázu u živých organismů. V mé studii jsem testoval aktivaci konkrétního jaderného receptoru známého jako konstitutivní receptor androstane (CAR). Testoval jsem 11 strukturálně různých sloučeniny. Současně jsem použil známý inhibitor CAR klotrimazol a aktivátor CITCO. Pro testování těchto látek jsem použil metodu two-hybrid assay. Tato metoda umožňuje studovat interakce ligand-protein v prostředí blízkému situaci in vivo. Metoda je založena na Dual-Luciferase Reporter kitu, který umožňuje kvantifikaci interakce ligandu s CAR receptorem prostřednictví luciferázového reportérového konstruktu. Výsledná chemiluminiscence byla měřena na Genios Plus luminometru. Kvantifikace luminiscence testovaných sloučenin ukázala, že látky 21, 22, 23...
|
|
|
Studium interakcí přírodních látek polyfenolické povahy s vybranými nukleárními receptory
Dubecká, Michaela ; Pávek, Petr (vedoucí práce) ; Filipský, Tomáš (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Studentka: Školitel: Název rigorózní práce: Mgr. Michaela Dubecká Prof. PharmDr. Petr Pávek, Ph.D. Studium interakcí přírodních látek polyfenolické povahy s nukleárními receptory Farnesoidní X receptor (FXR) je receptor primárních žlučových kyselin v játrech a ve střevě. Bylo demonstrováno, že je FXR hlavním transkripčním regulátorem několika enterohepatických metabolických signálních drah s významem k patofyziologii cholestázy, metabolického syndromu a diabetu mellitu druhého typu, nealkoholické steatózy jater, cholelithiázy a střevního zánětu. Mimoto, FXR hraje důležitou roli ve zpětnovazebné ose střevo-játra regulující lipidovou a glukózovou homeostázu. Apikální na sodíku závislý transportér pro žlučové kyseliny (ASBT; SLC10A2) je transportér žlučových kyselin lokalizovaný na apikální straně terminálních ileálních enterocytů. ASBT hraje důležitou roli v reabsorpci žlučových kyselin v ileu. V játrech hepatocyty zachytí žlučové kyseliny prostřednictvím sinusoidálního kotransportéru taurocholátu sodného (NTCP; SLC10A1). ASBT a NTCP jsou regulovány v ileu a v játrech prostřednictvím FXR receptoru žlučovými kyselinami a takto regulují zásobu žlučových kyselin. V této studii jsem studovala, zda...
|
|
|
Jaderný faktor kappa B a zánětlivá reakce
Klabačková, Sáva ; Jílek, Petr (vedoucí práce) ; Pávek, Petr (oponent)
Sáva Klabačková Jaderný faktor kappa B a zánětlivá reakce Bakalářská práce Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Zdravotní laborant Cíl práce: Navržené systémy LNA sond pro členy rodiny NF-B, jeho inhibitorů a kináz nám umožní porovnat aktivaci imunitního systému mezi skupinami bezmikrobních a konvenčních selat. To zahrnuje izolaci celkové RNA, syntézu cDNA, polymerázovou řetězovou reakci, relativní kvantifikaci genové transkripce NF-B a statistické vyhodnocení případných rozdílů mezi skupinami selat. Metody: 1) Skupiny bezmikrobních a konvečních selat, 2) návrh systémů LNA sond pro PCR genů rodiny NF-B, 3) kolonová metoda izolace celkové RNA z ilea, 4) spektrofotometrické posouzení její koncentrace a čistoty, 5) reverzní transkripce, 6) polymerázová řetězová reakce v reálném čase, 7) potvrzení velikosti amplikonu elektroforézou, 8) stanovení relativní genové exprese za použití referenčních genů. Výsledky: Systémy LNA sond (RelA-85, RelB-1, cRel-63, NF-B1-63, NF-B2-21, NFBIA-27, Bcl3-9, IKK1-7, IKK2-3, NEMO-27) s potvrzením požadované velikosti amplikonu elektroforézou. Mezi skupinami bezmikrobních a konvenčních selat jsme pozorovali rozdíly v aktivaci jednotlivých genů, které však v mnoha případech nebyly statisticky průkazné. Závěr: Navrhli jsme a zavedli systém...
|
|
| |
|
|
Změny exprese dlouhých nekódujících RNA u hepatocelulárního karcinomu
Krhutová, Magdaléna ; Pávek, Petr (vedoucí práce) ; Matoušková, Petra (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra Farmakologie a toxikologie Studentka: Bc. Magdaléna Krhutová Školitel: prof. PharmDr. Petr Pávek, Ph.D. Název diplomové práce: Změny exprese dlouhých nekódujících RNA u hepatocelulárního karcinomu Hepatocelulární karcinom (HCC) je globálně jedním z vysoce prevalentních nádorových onemocnění, jehož počet případů, tak jako počet úmrtí na něj, každoročně narůstá. Molekulární mechanismy vzniku HCC jsou intenzivně studovány, avšak stále nejsou plně pochopeny. Mimo genetických vlivů se na patogenezi HCC podílí i vlivy epigenetické. Dlouhé nekódující RNA (lncRNA) jsou molekuly RNA bez schopnosti kódovat proteiny a s délkou minimálně 200 nukleotidů. Řada studií odhalila lncRNA zapojené do tumorigeneze prostřednictvím vazby na DNA, RNA i proteiny. Nové studie ukazují také na významné změny v expresi biotransformačních enzymů u HCC a i zde na interakce s mikroRNA (miRNA) a lncRNA. Předkládaná diplomová práce se věnuje problematice dlouhých nekódujících RNA ve vztahu k HCC. Shrnuje epidemiologickou situaci, rizikové faktory, aktuální možnosti diagnostiky a terapie tohoto onemocnění. Dále se zabývá genetickými a epigenetickými mechanismy přispívajícími k rozvoji HCC, se zaměřením na miRNA a lncRNA. Předmětem studia této problematiky je také...
|
host ::
RSS.