|
|
Microbial characterization of yoghurts and probiotic foods.
Kocourková, Hana ; Burdychová, Radka (oponent) ; Španová, Alena (vedoucí práce)
The increased consuming of milk fermented products in the last years led to the raising of new trademarks. In fact functional and probiotic foods are at this moment widely diffused too. The aim of the thesis was to evaluate the microbial quality of commercial yoghurts and non-pharmacological probiotic products. It was examined 24 samples of yogurts and 8 samples of probiotic milk products. Investigated was the load of microbial population of each product as well as the viability of the cells. Most of milk products contained viable counts corresponded to minimum required level of 1x107 cfu/ml. However, there were found products which did not contain viable bacteria or contained only its fewer amounts. This holds mainly for some conventional yogurts. Probiotic milk products basically showed larger amount of enumerated bacteria then yogurts as they are required to contain minimum of 1x106cfu/ml of specific microorganisms others than normal starter cultures. The isolates from fermented milk products were identified to belong to species Streptococcus thermophilus and Lactobacillus spp. The isolates were then strain-typed by RAPD using three different primers. It was found out rich variations among strains of Lactobacillus spp. used by different companies.
|
|
|
Optimization of recombinant protein production in animal cell culture
Kyselá, Hana ; Španová, Alena (oponent) ; Ševčík,, Mojmír (vedoucí práce)
The thesis describes successful transient transfections of suspension-adapted HEK 293 cells with linear polyethyleneimines (PEIs) in serum-free medium. The cells were transfected with pcDNA5/SEAP plasmid expressing the secreted form of human placental alkaline phosphatase (SEAP). SEAP concentrations in cell culture supernatants were determined in order to compare efficiencies of individual transfections. The goal of the thesis was to optimize various factors affecting transfection efficiencies, primarily the DNA:PEI ratio.
|
|
|
Probiotics in food products for children
Vozárová, Petra ; Kvasničková, Eva (oponent) ; Španová, Alena (vedoucí práce)
Despite of the high level of science and medicine, people are trying to return to the nature and use it for their lives. For example, they are using probiotics, which are live cultures able to reside in the human intestine and there can start their role. The teoretical part of this bachelor thesis deals with probiotic bacteria, their properties and those properties which are important in the food industry and the main part focuses on the probiotics used in baby food. The experimental part of the thesis targets on an analysis of two probiotic supplements for children (BioLac Baby and Probacílium+). There was a DNA isolated from these two products by method of phenol extraction and using magnetic media. The whole DNA isolated from these products was amplificated by genus-specific PCR.
|
|
|
Příprava a purifikace plasmidových DNA
Němeček, Milan ; Španová, Alena (oponent) ; Rittich, Bohuslav (vedoucí práce)
S rozvojem terapeutických metod v lékařství, jako jsou DNA vakcíny a genová terapie, se zvyšuje poptávka po nových postupech izolace a purifikace vysoce čisté plazmidové DNA. Nejčastěji využívanými metodami purifikace plazmidové DNA jsou metody chromatografické. V experimentální části byla provedena izolace plazmidové DNA pUC 19 metodou alkalické lýze. A následně byla provedena purifikace plazmidové DNA agarózovou gelovou elektroforézou a kapalinovou chromatografií.
|
|
|
Probiotika a jejich využití v potravinářství
Diado, Aleksandra ; Rittich, Bohuslav (oponent) ; Španová, Alena (vedoucí práce)
Probiotické bakterie jsou definovány jako živé mikroorganismy, které, pokud jsou konzumované ve stanoveném množství, mají zdraví prospěšné účinky. Většina probiotik patří k bakteriím rodu Lactobacillus a Bifidobacteria. Tyto a řada jiných mikroorganismů se v současnosti úspěšně využívají v průmyslu, včetně potravinářského. V potravinářství se probiotika využívají v první řadě v mléčných výrobcích a doplňcích stravy. Probiotické bakterie, lze stejně jako ostatní mikroorganismy, idenfikovat metodou PCR, která umožňuje amplifikovat specifické úseky DNA. Polymerázová řetězová reakce byla provedena po izolaci DNA z bakteriálních kulturních kmenů metodou fenolové extrakce. PCR pro doménu Bakteria byla použita pro ověření amplifikovatelnosti DNA a rodově specifická PCR pro důkaz přítomnosti bakterií rodu Lactobacillus.
|
|
|
Vliv buněčné denzity kultury HEK293 na úspěšnost transientní transfekce.
Krzyžanková, Marcela ; Španová, Alena (oponent) ; Ševčík, Mojmír (vedoucí práce)
Rekombinantní proteiny (r-proteiny) se stávají stále žádanější jak na trhu biotechnologickém, tak v průmyslu farmaceutickém. Vyrobit r-protein lze efektivně prostřednictvím metody transientní transfekce a tato metoda byla použita i v této práci. Buněčná kultura 293HEK EBNA 1 byla dočasně geneticky modifikována (tj. transientně transfekována) genem zájmu (AIM) za použití transfekčního agens polyethyleniminu (PEI) ve dvou různých transfekčních denzitách (tzv. denzitě „stávající“ a „testované“). Stávající transfekční denzita byla 20x106 buněk/ml a vyšší testovaná denzita byla 30x106 buněk/ml. Cílem této bakalářské práce bylo zjistit, zda testovaná vyšší transfekční denzita buněk při transientní transfekci (oproti nižší, běžně užívané „stávající“ transfekční denzitě) vede k vyšším výtěžkům r-proteinu. Do buněčné kultuy 293HEK EBNA byl dočasně vložen gen pro protein AIM (apoptotický inhibitor vylučovaný tkáňovými makrofágy). Úspěšně transfekované buněčné kultury byly zpurifikovány na Ni-NTA matrici a množství r-proteinu bylo kvantifikováno. Bylo zjištěno, že r-protein AIM se nacházel ve vyšších koncentracích shodně vždy v suspenzích o stávající transfekční denzitě 20x106 buněk/ml. Dílčími výsledky bylo doloženo, že kultivace buněčné kultury 293HEK EBNA 1 ve čtyřhranných lahvích vede k vyšším buněčným denzitám a viabilitám v průběhu produkce r-proteinu oproti kultivaci produkční kultury v tubách.
|
|
|
Nukleové kyseliny jako terapeutické agens
Ráčková, Lucie ; Španová, Alena (oponent) ; Rittich, Bohuslav (vedoucí práce)
S rozvojem molekulární biologie dochází i k rozvoji v onkoterapii. Hlavním směrem moderní medicíny je genová terapie. V genové terapii jsou používány dvě kategorie vektorů, a to virové vektory a nevirové vektory. K nevirovým vektorům patří plazmidy. Plazmidová DNA využívána v medicíně musí být dokonale čistá. V současnosti jsou k izolaci a purifikaci plazmidové DNA využívány hlavně chromatografické metody. Výzkum a vývoj se ale zabývá i jinými metodami, například dvoufázovými vodnými systémy a magnetickými nosiči. V experimentální části byla provedena izolace plazmidové pUC 19 DNA z kultury buněk Escherichia coli JM 109 (pUC 19) metodou alkalické lýze. Izolovaná plazmidová DNA byla purifikovaná pomocí třech metod: RNA v plazmidové DNA byla vysrážena chloridem lithným, RNA byla degradovaná imobilizovanou RNázou A a plazmidová DNA byla purifikována pomocí dvoufázového systému. Kvalita izolované plazmidové DNA byla ověřena spektrofotomericky a agarózovou gelovou elektroforézou.
|
|
|
Probiotické bakterie mléčného kvašení v potravinových výrobcích
Sásková, Denisa ; Rittich, Bohuslav (oponent) ; Španová, Alena (vedoucí práce)
K identifikaci probiotických mikroorganismů jsou v potravinářství využívány molekulárně genetické metody, které jsou založeny na analýze DNA. Příkladem těchto metod je polymerázová řetězová reakce, při které dochází k amplifikaci specifických úseků DNA pomocí krátkých oligonukleotidových primerů. Tato bakalářská práce se v teoretické části zabývá probiotickými bakteriemi, jejich vlastnostmi, příznivými účinky na zdraví a možnostech využití v potravinářství a klinických aplikacích. Experimentální část práce je zaměřena na analýzu dvou probiotických potravinových doplňků. Z těchto výrobků byla izolována DNA metodou fenolové extrakce. Pomocí PCR byla prokázána přítomnost DNA probiotických bakterií rodů Lactobacillus a Bifidobacterium.
|
|
|
Separace a purifikace nukleových kyselin s využitím magnetických mikročástic
Vlachová, Jana ; Rittich, Bohuslav (oponent) ; Španová, Alena (vedoucí práce)
Použití magnetických mikročástic při izolaci nukleových kyselin z reálných vzorků je moderní a rychlý separační postup, který je vhodný pro použití v běžné laboratorní praxi. Cílem bakalářské práce byla izolace DNA z mléčného výrobku (Activia sladká bílá) v kvalitě vhodné pro PCR. Izolace DNA byla provedena magnetickými mikročásticemi P(HEMA co GMA) v prostředí 2 M NaCl a 16% PEG 6000 nebo 8% PEG 6000. Pomocí PCR byla prokázána přítomnost DNA probiotických bakterií rodu Lactobacillus a Bifidobacterium deklarovaných výrobcem.
|
|
|
Využití metody PCR v reálném čase při mikrobiologické analýze potravin
Novotná, Eva ; Michaela, Kotianová (oponent) ; Španová, Alena (vedoucí práce)
Probiotické druhy bakterií mléčného kvašení rodu Lactobacillus hrají důležitou roli v trávicím traktu člověka, např. chrání před patogenními mikroorganismy. Laktobacily jsou součástí různých potravinových výrobků. Detekovat a identifikovat baktérie mléčného kvašení rodu Lactobacillus lze pomocí polymerázové řetězové reakce (PCR) se specifickými primery LbLMA1 a R16. V experimentální části této práce byla izolována DNA z probiotického výrobku Actimel Natur metodou fenolové extrakce. Pomocí PCR v reálném čase byly amplifikovány specifické produkty PCR, které byly detegovány pomocí fluorescenčního interkalačního barviva SybrGreen. Specificita amplifikovaných produktů PCR byla ověřena pomocí křivky tání (Tm 85°C) a pomocí agarosové gelové elektroforézy (byl amplifikován produkt velikosti 250 bp).
|
host ::
RSS.