Název:
Vliv proteinu Fam84b na homeostázu retiny
Překlad názvu:
The impact of Fam84b in retinal homeostasis
Autoři:
Raishbrook, Miles Joseph ; Procházka, Jan (vedoucí práce) ; Mašek, Jan (oponent) Typ dokumentu: Diplomové práce
Rok:
2021
Jazyk:
eng
Abstrakt: [eng][cze] Fam84b is a largely unstudied protein, where its function in eukaryotic cells is unclear. This thesis work presents a FAM84B knockout mouse model and characterises the resulting retinal phenotype in detail. FAM84B KO mice were morphologically assessed by optical coherence tomography and histological processing, revealing dynamic changes stemming from the photoreceptor and pigmented epithelial layers. This potent phenotype progresses with age, spreading inwards towards the inner retinal layers, as well as laterally to adjacent retinal regions. Comparative localisation of standard retinal cell markers demonstrates that FAM84B KO retinal layering becomes increasingly disorganised, together with deformation of the retinal macrostructure. Due to this, KO mice experience reducing responses to light, as demonstrated by electroretinography, where overall retinal efficiency falls. Fam84b shows homology to the HRASLS enzyme family, which are capable of attenuating Ras-associated signalling. To investigate whether Fam84b possesses a similar function, the level of phosphorylated and activated downstream Ras effectors were compared between wild type and FAM84B KO mouse retinal lysates. A reduction of pERK1 (pY204) in KO lysates suggests that Fam84b holds some function related to this pathway downstream of Ras....Fam84b je jen málo prostudovaný protein, jehož funkce v eukaryotické buňce je stále nejasná. V této práci je představen myší model s vyřazeným genem FAM84B (FAM84B KO) s detailní charakteristikou jeho fenotypu v oční sítnici. Morfologie sítnice byla u FAM84B KO myší studována pomocí optické koherentní tomografie a histologie. Tyto dvě metody ukázaly dynamické změny vycházející z fotoreceptorové a z pigmentové epiteliální vrstvy. Fenotyp se zhoršoval s věkem a patologické oblasti se postupně rozšiřovaly, ale také pronikaly hlouběji do vnitřních retinálních vrstev. Porovnání lokalizace standartních retinálních buněčných markerů ukázalo, že u FAM84B KO myší dochází k postupnému rozrušení vrstev sítnice spolu s deformací retinální makrostruktury. Sítnice mutovaných myší také vykazují nižší reakci na stimulaci světlem, což bylo prokázáno pomocí elektroretinografie. Fam84b je homologní s HRASLS enzymatickou rodinou, která tlumí signalizaci asociovanou s Ras. K ověření, zda má Fam84b podobnou funkci, byly porovnány hodnoty fosforylovaných a aktivovaných downstream Ras efektorů mezi lyzáty sítnice FAM84B KO a kontrolních nemutovaných zvířat. U KO myší byla naměřena redukce pERK1 (pY204), která poukazuje na možnou funkci v rámci downstream Ras signalizace. Předběžné ko-imunoprecipitační pokusy odhalily...
Klíčová slova:
degenerace; Fam84b; knockout; MAPK; myš; Ras; Ras signalizace; retina; degeneration; Fam84b; knockout; MAPK; mouse; Ras; Ras signalling; retina