|
|
Vývoj UHPLC-MS/MS metody vhodné ke stanovení cabozantinibu v krevním séru
Kleinová, Jana ; Kozlík, Petr (vedoucí práce) ; Hraníček, Jakub (oponent)
The aim of this Bachelor thesis was to develop a UHPLC-MS/MS method for the determination of Cabozantinib in blood serum. This method was used to monitor the release of the active substance in a model organism - the rat. First, the mass spectrometer setup was optimized, where MRM transitions for Cabozantinib and isotope-labelled Cabozantinib-D4 were found. For Cabozantinib, an MRM transition of 502.2 → 323.1 was found with optimal energy levels of Q1 = -26.0 V, CE = -40.0 V and Q2 = -22.0 V. For Cabozantinib-D4, the MRM transition of 506.2 → 327.0 was found with optimal energy levels being Q1 = -26.0 V, CE = -39.0 V and Q2 = -22 V. The method setup parameters were as follows: The chromatography column used was a Poroshell 120 EC-C18, 2.1x50 mm, 1.9 um, (Agilent Technologies). The mobile phase consisted of acetonitrile (B) and formic acid (A), the flow rate of the mobile phase was 0.350 ml/min, the analysis time was 5.5 min and the injection volume was 1 μl at gradient elution (time: 0; 0.5; 2.0; 3.0; 3.5; 4.0; 5.5 min, B: 10; 10; 60; 100; 10; 10 %). The method was linear (weighted regression 1/x2 ) with a regression coefficient equal to 0.9978, showing an excellent linearity of the method. The precision (relative standard deviation) of the method was within 14 %. The accuracy (relative error) was...
|
|
|
Validace LC-MS metody a monitoring léčiv ve vodách.
Molnárová, Lucia ; Bosáková, Zuzana (vedoucí práce) ; Kozlík, Petr (oponent)
Výskyt, akumulace a následný osud léčiv v různých složkách životního prostředí představuje v současné době velmi aktuální téma. Celosvětově jsou ročně spotřebovávány tisíce tun různých farmaceutických látek, kdy velká část z nich je, ať už v nezměněné podobě nebo ve formě metabolitů, odváděna do systému odpadních vod. Vzhledem k faktu, že procesy probíhající na čistírnách odpadních vod nedokáží tyto látky účinně odstranit, prolínají farmaka postupně do koloběhu vod a stále tak stoupá zamoření podzemních i povrchových vod. Otázka soustavné kontroly a postupného odstraňování reziduí léčiv ze životního prostředí stále není komplexně a systematicky řešena. Vývoj a dostupnost citlivých komerčních analytických metod jsou tak velmi žádané. V rámci této diplomové práce byla v laboratořích ALS Czech Republic optimalizována a validována multireziduální analytická UHPLC-MS/MS metoda pro stanovení 52 různých léčiv v pitných a odpadních vodách. Metoda byla dále použita pro monitoring těchto léčiv jak v pitných, tak odpadních vodách, a dále byla také stanovena účinnost odstranění těchto látek v čistírnách odpadních vod analýzou dvojic vzorků přítoků a odtoků. Získaná data korespondují s již publikovanými studiemi zabývajícími se danou problematikou. Klíčová slova Léčiva, UHPLC-MS/MS, optimalizace, validace,...
|
|
|
Vývoj UHPLC-MS/MS metody ke stanovení rivaroxabanu v krysím séru
Plášilová, Denisa ; Kozlík, Petr (vedoucí práce) ; Hraníček, Jakub (oponent)
Cílem této bakalářské práce bylo vyvinout specifickou UHPLC-MS/MS metodu pro stanovení rivaroxabanu v krysím séru. Nejprve bylo optimalizováno nastavení hmotnostního spektrometru. Byly nalezeny vhodné MRM přechody pro rivaroxaban a jeho isotopicky značený interní standard. Pro rivaroxaban byl nalezen MRM přechod 436,1 → 145,05 s optimálními hladinami energie Q1 = -12,0 V; CE = -30,0 V; Q2 = -27,0 V. Pro rivaroxaban D4 byl nalezen MRM přechod 440,1 → 145,0 s optimálními hladinami energie Q1 = -22,0 V; CE = -31,0 V; Q2 = -25,0 V. Parametry nastavení iontového zdroje byly následující: průtok nebulizačního plynu 3 l/min; průtok ohřevného plynu 10 l/min; teplota rozhraní 300 řC; desolvatační teplota 526 řC; DL teplota 250 řC; teplota tepelného bloku 400 řC; průtok sušícího plynu 10 l/min. Optimální chromatografická metoda byla následující: Chromatografická kolona Poroshell 120 SB AQ, 100 × 2,1 mm, 2,6 μm (Agilent); mobilní fáze se skládala z acetonitrilu s přídavkem 0,1% kyseliny mravenčí (A) a z destilované vody s přídavkem 0,1% kyseliny mravenčí (B); průtok mobilní fáze 0,5 ml/min; gradientová eluce (čas: 0-1-2-3,5-4-6,5 min, A: 20-20-80-80-20-20 % v/v); teplota na dávkovači 15 řC; teplota kolony 40 řC; doba analýzy 6,5 minut; objem nástřiku 2 μl. Optimalizovaná UHPLC-MS/MS metoda byla lineární...
|
|
|
Studium množství antioxidantů v extraktech z Melissa Officinalis
Bartoš, Karel ; Kubíčková, Anna (vedoucí práce) ; Kozlík, Petr (oponent)
Tato diplomová práce se zabývá stanovením vybraných antioxidantů, konkrétně kyseliny rosmarinové, kyseliny kávové, kyseliny skořicové a kyseliny t-4-hydroxyskořicové, ve vodných a ethanolických extraktech z Melissa officinalis. Cílem práce bylo zjistit, zda jsou i v extraktech připravených v domácích podmínkách přítomny výše zmíněné antioxidanty. V rámci práce byla vyvinuta nová UHPLC metoda s UV a MS detekcí ke sledování obsahu kyseliny rosmarinové, kyseliny kávové, kyseliny skořicové a kyseliny t-4-hydroxyskořicové v extraktech. Pro separaci byla vybrána kolona BEH C18 (2,1 mm × 100 mm, velikost částic 1,7 µm), mobilní fáze byla ve složení methanol a 0,1% vodný roztok kyseliny mravenčí o pH 2,6 přičemž poměr složek se měnil dle gradientového programu. Metoda byla po optimalizaci validována a zjištěna opakovatelnost, meze detekce a stanovitelnosti, linearita, výtěžnost a robustnost. Následně byla provedena analýza 20 vodných a 20 ethanolických extraktů lišících se dobou extrakce, typem rozpouštědla a světelnými podmínkami. Na základě porovnání retečních časů a hmotnostních spekter byla potvrzena přítomnost 3 ze 4 vybraných fenolických kyselin a to konkrétně kyseliny rosmarinové, kyseliny kávové a kyseliny skořicové v ethanolických extraktech. Ve vodných extraktech se bohužel přítomnost kyselin...
|
|
|
Validace LC-MS metody a monitoring léčiv ve vodách.
Molnárová, Lucia ; Bosáková, Zuzana (vedoucí práce) ; Kozlík, Petr (oponent)
Výskyt, akumulace a následný osud léčiv v různých složkách životního prostředí představuje v současné době velmi aktuální téma. Celosvětově jsou ročně spotřebovávány tisíce tun různých farmaceutických látek, kdy velká část z nich je, ať už v nezměněné podobě nebo ve formě metabolitů, odváděna do systému odpadních vod. Vzhledem k faktu, že procesy probíhající na čistírnách odpadních vod nedokáží tyto látky účinně odstranit, prolínají farmaka postupně do koloběhu vod a stále tak stoupá zamoření podzemních i povrchových vod. Otázka soustavné kontroly a postupného odstraňování reziduí léčiv ze životního prostředí stále není komplexně a systematicky řešena. Vývoj a dostupnost citlivých komerčních analytických metod jsou tak velmi žádané. V rámci této diplomové práce byla v laboratořích ALS Czech Republic optimalizována a validována multireziduální analytická UHPLC-MS/MS metoda pro stanovení 52 různých léčiv v pitných a odpadních vodách. Metoda byla dále použita pro monitoring těchto léčiv jak v pitných, tak odpadních vodách, a dále byla také stanovena účinnost odstranění těchto látek v čistírnách odpadních vod analýzou dvojic vzorků přítoků a odtoků. Získaná data korespondují s již publikovanými studiemi zabývajícími se danou problematikou. Klíčová slova Léčiva, UHPLC-MS/MS, optimalizace, validace,...
|
|
|
VÝVOJ UHPLC-MS/MS METODY KE STANOVENÍ NILOTINIBU V KRYSÍM SÉRU
Černá, Kateřina ; Kozlík, Petr (vedoucí práce) ; Křížek, Tomáš (oponent)
Cílem této bakalářské práce bylo vyvinout UHPLC-MS/MS metodu ke stanovení nilotinibu v krysím séru. Tato UHPLC-MS/MS metoda byla následně použita ke sledování farmakokinetického průběhu uvolňování účinné látky v modelovém organismu - krysa v rámci projektu zaměřeném na formulační vývoj tablety obsahující nilotinib s pomalejším uvolňováním než doposud. Optimální nastavení metody bylo následující. Chromatografická kolona Acquity UPLC BEH PHENYL 100x2,1 mm, 1,7 μm od firmy Waters. Mobilní fáze se skládala z methanolu a destilované vody, obojí s přídavkem 0,1% kyseliny mravenčí při použití gradientové eluce. Průtok mobilní fáze byl 0,3 ml/min, teplota na dávkovači 15 řC, teplota kolony 40 řC, doba analýzy 6,5 minuty a objem nástřiku 2 μl. Byl sledován MRM přechod pro nilotinib: 530,2 → 289,10 (Q1 = -26 V; CE = -31 V; Q3 = -20 V) a pro nilotinib D6: 536,2 → 295,15 (Q1 = -26 V; CE = -31 V; Q3 = -14 V). Nastavení iontového zdroje bylo následující: průtok nebulizačního plynu 3 l/min; průtok sušícího plynu 10 l/min; teplota zdroje 300 řC; teplota desolvatační kapiláry 250 řC. Metoda byla částečně validována. Koeficient determinace 1,0000 ukazuje výbornou linearitu metody. Správnost, vyjádřená relativní chybou, byla do 20 %. Přesnost, vyjádřená pomocí RSD, byla do 9 %. Všechny hodnoty splňují validační...
|
|
|
Vývoj UHPLC-MS/MS screeningové metody pro analýzu benzodiazepinů ve vzorcích moči
Havelková, Lucie ; Bosáková, Zuzana (vedoucí práce) ; Kozlík, Petr (oponent)
Cílem této diplomové práce byl vývoj screeningové metody pro analýzu 17 benzodiazepinů ve vzorcích moči pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie s tandemovou hmotnostní detekcí (UHPLC-MS/MS). Dílčím úkolem bylo optimalizovat podmínky enzymatické hydrolýzy glukuronidů benzodiazepinů v moči s využitím metody plánování experimentů (DOE). Optimalizovaný chromatografický systém se skládal z kolony Zorbax Eclipse Plus Phenyl-Hexyl RRHD (100 × 2,1 mm, 1,8 μm), dvousložkové mobilní fáze tvořené vodou s 0,1% obsahem octové kyseliny (složka A) a acetonitrilem s 0,1% obsahem octové kyseliny (složka B) v různém poměru dle gradientového programu. Průtok činil 0,2 ml/min, teplota kolony byla 40 řC. Celková doba analýzy činila 12 min. Za optimalizovaných podmínek byly proměřeny kalibrační křivky všech analytů v methanolu i v moči. Byly nalezeny optimální detekční podmínky pro oxazepam-glukuronid, který byl v rámci pilotního experimentu hydrolyzován za použití β-glukuronidasy z ušně, čímž byla potvrzena funkčnost enzymu. Optimalizace podmínek enzymatické hydrolýzy prostřednictvím 27 experimentů vygenerovaných programem Minitab 16 podle Box-Behnken design bude realizována později.
|
|
|
Analýza historických léčivých přípravků naloxonu, adrenalinu a efedrinu.
Nováková, Lucie ; Nesměrák, Karel (vedoucí práce) ; Červený, Václav (oponent)
Cílem diplomové práce byla analýza historických léčivých přípravků, zahrnující stanovení obsahu léčivé látky a identifikaci jejích případných degradačních produktů. Historický léčivý přípravek naloxonu byl analyzován hmotnostní spektrometrií. Historické léčivé přípravky adrenalinu a efedrinu byly analyzovány pomocí UHPLC-MS a kvantifikovány metodou kalibrační přímky. V historické injekční formě naloxonu, "NARCAN", datované kolem roku 1980, nebyly pozorovány žádné degradační produkty a naměřené hmotnostní i UV spektrum odpovídalo spektrům pro naloxon. Analyzovaný vzorek naloxonu byl stabilní i po 35 letech skladování. V analyzované historické injekční formě adrenalinu, "Adrenalin Hydrochlor., Dr. Heisler" (datované mezi léty 1917 a 1938) bylo stanoveno 5,26 ± 0,11 % deklarovaného množství adrenalinu. V naměřených spektrech byly patrné degradační produkty, které však zatím nebyly v literatuře popsány a jejich identifikace byla nad rámec této práce. Analyzovaný vzorek adrenalinu byl v průběhu cca devadesáti let téměř kompletně degradován. Stabilitní test prováděný se čtyřmi roztoky standardu adrenalinu prokázal vliv kyslíku, světla, teploty i času na degradaci adrenalinu. V historické injekční formě efedrinu, "Ephedrin" (datovaném mezi léty 1945 a 1948), bylo stanoveno 107,58 ± 0,39 % deklarovaného množství...
|
host ::
RSS.