|
|
Vývoj nových izotopově značených sond pro relativní kvantifikaci proteinů
Procházková, Valérie ; Kukačka, Zdeněk (vedoucí práce) ; Vaňková, Pavla (oponent)
Objasnění struktury proteinů v živých organismech je důležitým krokem pro popis jejich úlohy v organismu. Jednou z metod strukturní biologie je chemické zesítění v kombinaci s hmotnostní spektrometrií, která je běžně používaným nástrojem pro charakterizaci terciální struktury proteinů nebo protein-proteinových interakcí. Tato metoda je založena na reakci síťovacího činidla, složeného ze dvou reaktivních skupin propojených raménkem o definované délce za vzniku kovalentní vazby. Hlavním cílem této práce bylo ověřit, zda je možné využít chemické zesítění v kombinaci s izotopově značenými činidly ke kvantifikaci dvou odlišných strukturních stavů. V práci byla využita činidla DSPU (disukcinimidyldipropionát močovina) a izotopově značená forma DSPUx. Činidla DSPU i DSPUx obsahují ve své struktuře labilní molekulu močoviny, která je při kolizně indukované disociaci štěpena na charakteristické fragmenty, díky kterým lze identifikovat zesítěné peptidy. Přístupy shora dolů a zdola nahoru bylo na vybraných proteinech (insulin, lidská karbonická anhydrasa a hovězí sérový albumin) zjištěno, že činidla DSPU a DSPUx interagují s vybranými peptidy a proteiny a jsou vhodná pro jejich kvantifikaci. Na modelu myoglobinu byly následně sledovány strukturní rozdíly v jeho dvou konformačních stavech, v přítomnosti hemu...
|
|
|
Příprava a využití proteas vhodných ke studiu struktury proteinů.
Jirečková, Barbora ; Man, Petr (vedoucí práce) ; Vaňková, Pavla (oponent)
Vodík/deuteriová výměna spojená s hmotnostní spektrometrií (HDX-MS) je metoda, která umožňuje studium struktury a dynamiky proteinů. Pro lokalizaci této výměny je do HDX-MS zařazena proteolýza analyzovaného proteinu, která určuje prostorové rozlišení. Standardně se používá pepsin, který má ale své limitace, a také štěpení pouze jednou proteasou často neposkytuje optimální prostorové rozlišení. V několika publikacích byl akcentován význam alternativních proteas nepenthesinu-2 (Nep-2) a aspergillopepsinu (XIII), které oproti pepsinu štěpí za bazickými aminokyselinami. Při studiu na prolin bohatých proteinů získává význam prolyl endoproteasa z Aspergillus niger (AnPEP). Tato práce se zabývá charakterizací imobilizovaného AnPEPu v kombinaci s proteasami pepsinem, aspergillopepsinem nebo Nep-2 za účelem jejich aplikace v HDX-MS. Nejprve byly na sadě modelových proteinů otestovány kolony s pouze jednou proteasou. Bylo zjištěno, že imobilizovaný AnPEP oproti ostatním proteasám nemá optimální štěpné charakteristiky. Za účelem spojení výhod výše uvedených proteas byly modelové proteiny štěpeny pomocí kolon s AnPEP koimobilizovaným s pepsinem, Nep-2 nebo XIII a také pomocí dvou proteasových kolon v sériovém zapojení (vždy AnPEP kolona s pepsinovou, Nep-2 nebo XIII kolonou v obou směrech). V rámci štěpení...
|
|
|
Exprese rekombinantní rozpustné formy receptoru NKR-P1A
Vaňková, Pavla ; Man, Petr (vedoucí práce) ; Mrázek, Hynek (oponent)
NK buňky jsou velké granulární lymfocyty a jsou součástí přirozeného imunitního systému. Při boji proti nádorovým či virem infikovaným buňkám spouští své cytotoxické mechanismy a produkcí cytokinů dokáží zmobilizovat i pomoc ve formě adaptivní imunitní odpovědi. V poslední době jsou velkou oblastí zájmu, neboť nalezení ligandů k jejich receptorům a pochopení interakce s nimi může vést k významným objevům. Hlavně v oblasti medicíny, kde mohou mimo jiné najít uplatnění při transplantacích, v boji proti nádorovému bujení nebo HIV. Tato bakalářská práce se zabývá receptorem NKR-P1A, který je spolu s dalšími šesti receptory členem NKR-P1 rodiny. Tento protein se řadí mezi aktivační receptory a nedávno byla objevena jeho isoforma, která se od klasické formy liší tím, že postrádá větší část transmembránové domény. Cílem této práce bylo připravit produkční plasmid nesoucí gen pro mNKR-P1A ISO2 s následným testem exprese daného proteinu.
|
|
|
Nové výzvy pro ředitele středních škol v ČR a ve Francii - Projektový management ve sféře školství
Vaňková, Pavla ; Trunda, Jiří (vedoucí práce) ; Voda, Jan (oponent)
Diplomová práce mapuje problematiku projektové činnosti, která se v několika posledních letech stává novou výzvou pro ředitele škol v členských zemích EU. Projekty přispívají nejen k naplňování úkolů výchovně-vzdělávacího procesu, ale také k rozvoji prostředí školy. Cílem práce je komparovat využívání projektových možností v rámci výzkumného vzorku ředitelů středních škol v ČR a ve Francii. Teoretická východiska specifikují projekt a jeho cyklus společně se strategií, nástroji a dotačními možnostmi v rámci vzdělávací a regionální politiky EU. Empirická část šetří rozdíly mezi aktivitou a úspěšností v čerpání dotačních prostředků u vzorku ředitelů českých a francouzských škol a názory na formu mezinárodní spolupráce v rámci podprogramu celoživotního učení Comenius.
|
|
|
Řízení času - možnost implementace principů work and life balance do školského managementu
Vaňková, Pavla ; Svoboda, Jiří (vedoucí práce) ; Nosková, Lenka (oponent)
Závěrečná bakalářská práce mapuje problematiku efektivních strategií v oblasti timemanagementu řídících pracovníků škol a školských zařízení a zamýšlí se nad možnými principy napomáhajícími nastolení rovnováhy mezi pracovním a soukromým životem - work and life balance vedoucích pracovníků ve školství. Výsledky výzkumného šetření na vzorku oslovených respondentů vycházejí ze dvou problémových oblastí: Rozdíl v efektivitě řízení času a schopnosti nastolit rovnováhu mezi pracovním a soukromým životem mezi muži a ženami v manažerských pozicích škol. Možnosti implementace principů work and life balance ze soukromé sféry do práce vedoucích pracovníků ve školství.
|
|
|
Studium struktury a dynamiky proteinů a proteinových komplexů.
Vaňková, Pavla ; Man, Petr (vedoucí práce) ; Obšilová, Veronika (oponent) ; Hernychová, Lenka (oponent)
4 Abstrakt Proteiny v buňce dosahují své nativní konformace za asistence molekulárních chaperonů. Tyto vysokomolekulární dynamické komplexy kromě toho vykonávají další funkce přispívající ke stabilitě buněčného proteomu. Řadí se mezi ně mimo jiné i transport proteinů do cílového kompartmentu nebo obrana proti oxidativnímu stresu. Dynamické strukturní změny chaperonů Hsp70 a NQO1 a ko-chaperonu Tomm34, jež se podílejí na výše zmíněných procesech, a jejich interakce s ligandy jsou zde charakterizovány kombinací strukturní hmotnostní spektrometrie, biofyzikálních a molekulárně biologických technik. V této práci byla popsána ATP-dependentní dimerizace lidské inducibilní formy Hsp70 (HSPA1A) a charakterizováno evolučně konzervované dimerizační rozhraní. Dále byly identifikovány vysoce konzervované aminokyselinové zbytky, které vytvářejí síť kontaktů stabilizující obě krajní konformace HSPA1A (nízko- i vysokoafinitní) v průběhu ATPasového cyklu. Jedním z ko-chaperonů ovlivňujících ATPasový cyklus Hsp70 je TPR ko-chaperon Tomm34 spolupodílející se na transportu jádrem kódovaných mitochondriálních prekurzorů do mitochondrií. Zde je popsán význam jeho fosforylace cAMP-dependentní proteinkinasou A a následná interakce s proteinem 14-3-3γ při regulaci tohoto procesu. V případě chaperonu NQO1, který má kromě...
|
|
|
Strukturní charakterizace intracelulární formy myšího Nkr-p1a proteinu.
Vaňková, Pavla ; Novák, Petr (vedoucí práce) ; Kolenko, Petr (oponent)
4 ABSTRAKT NK buňky jsou komponentou přirozeného imunitního systému, která je odvozena od lymfoidního progenitoru. Pomocí sofistikovaného receptorového repertoáru, jež exprimují na svém povrchu, se účastní obrany organismu proti patogenním, virem infikovaným nebo nádorovým buňkám. Současně produkují cytokiny, jejichž prostřednictvím pomáhají spoluutvářet i adaptivní imunitní odpověď. Tato práce je zaměřena na studium struktury rozpustné isoformy myšího receptoru mNkr-p1a, která byla v nedávné době na transkripční úrovni identifikována členem naší laboratoře a nese pracovní označení isoforma 2. Cílem práce bylo vyprodukovat protein mNkr-p1a iso2 v prokaryotickém expresním systému a provést jeho renaturaci a purifikaci in vitro. V další fázi byl získaný produkt analyzován metodami hmotnostní spektrometrie. Jí získané výsledky nás ovšem dovedly k určitým pochybnostem, zda náš protein v roztoku nabývá definovanou 3D strukturu a nejedná se pouze o artefakt. To bylo vyvráceno dalšími biofyzikálními metodami, nukleární magnetickou rezonancí a měřením cirkulárního dichroismu a dynamického rozptylu světla. Klíčová slova: NK buňky Receptor mNkr - p1a Krátká isoforma mNkr - p1a iso2 Alternativní sestřih Biosyntéza proteinů Produkce rekombinantních proteinů Purifikace proteinů Hmotnostní spektrometrie Disulfidové vazby...
|
|
|
Nové výzvy pro ředitele středních škol v ČR a ve Francii - Projektový management ve sféře školství
Vaňková, Pavla ; Trunda, Jiří (vedoucí práce) ; Voda, Jan (oponent)
Diplomová práce mapuje problematiku projektové činnosti, která se v několika posledních letech stává novou výzvou pro ředitele škol v členských zemích EU. Projekty přispívají nejen k naplňování úkolů výchovně-vzdělávacího procesu, ale také k rozvoji prostředí školy. Cílem práce je komparovat využívání projektových možností v rámci výzkumného vzorku ředitelů středních škol v ČR a ve Francii. Teoretická východiska specifikují projekt a jeho cyklus společně se strategií, nástroji a dotačními možnostmi v rámci vzdělávací a regionální politiky EU. Empirická část šetří rozdíly mezi aktivitou a úspěšností v čerpání dotačních prostředků u vzorku ředitelů českých a francouzských škol a názory na formu mezinárodní spolupráce v rámci podprogramu celoživotního učení Comenius.
|
|
|
Exprese rekombinantní rozpustné formy receptoru NKR-P1A
Vaňková, Pavla ; Man, Petr (vedoucí práce) ; Mrázek, Hynek (oponent)
NK buňky jsou velké granulární lymfocyty a jsou součástí přirozeného imunitního systému. Při boji proti nádorovým či virem infikovaným buňkám spouští své cytotoxické mechanismy a produkcí cytokinů dokáží zmobilizovat i pomoc ve formě adaptivní imunitní odpovědi. V poslední době jsou velkou oblastí zájmu, neboť nalezení ligandů k jejich receptorům a pochopení interakce s nimi může vést k významným objevům. Hlavně v oblasti medicíny, kde mohou mimo jiné najít uplatnění při transplantacích, v boji proti nádorovému bujení nebo HIV. Tato bakalářská práce se zabývá receptorem NKR-P1A, který je spolu s dalšími šesti receptory členem NKR-P1 rodiny. Tento protein se řadí mezi aktivační receptory a nedávno byla objevena jeho isoforma, která se od klasické formy liší tím, že postrádá větší část transmembránové domény. Cílem této práce bylo připravit produkční plasmid nesoucí gen pro mNKR-P1A ISO2 s následným testem exprese daného proteinu.
|
|
|
Vybrané biblické symboly, jejich umělecký a teologický význam
Vaňková, Pavla ; Liguš, Ján (vedoucí práce) ; Bravená, Noemi (oponent)
Tato diplomová práce se dotýká vybraných biblických symbolů, jejich teologického a výtvarného významu. Téma jsem zúžila na biblické symboly týkající se zobrazování Krista především v době raně křesťanské. Vychází z mé vlastní výtvarné zkušenosti při práci se symbolikou. K tématu práce mě přivedl hlubší zájem o teologický význam symbolů. V diplomové práci se snažím poukázat na důležitost a propojenost symbolů v umění. V dnešní době, kdy umění přestává být sdělné ve své výpovědi, jsem se chtěla vrátit do prvních staletí raně křesťanské tvorby a začít čerpat z tohoto živého pramene. Vybrala jsem si symbolickou tematiku zpodobování Krista v prvních staletích křesťanských dějin. Symboly jsem řadila do kapitol podle výtvarného vývoje zobrazování Krista od prvních staletí do doby před rozdělením křesťanstva. Používala jsem metody analyticko - explicitní. U teologického významu symbolů jsem se opírala o český ekumenický překlad Bible z roku 1987.
|
host ::
RSS.