|
|
Vliv vybraných prenylflavonoidů na účinek cytostatik v nádorových buňkách
Pešková, Klára ; Matoušková, Petra (vedoucí práce) ; Skálová, Lenka (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Klára Pešková Školitel: Ing. Petra Matoušková Ph.D. Název diplomové práce: Vliv vybraných prenylflavonoidů na účinek cytostatik v nádorových buňkách Prenylflavonoidy 6-prenylnaringenin a 8-prenylnaringenin a flavonoid naringenin jsou látky s antiproliferačními vlastnostmi. Prenylflavonoidy najdeme především v chmelu a v pivu. Hlavním zdrojem naringeninu jsou především citrusové plody. V této práci byl jejich účinek testován pomocí testu neutrální červeně na buněčných liniích SW480 a SW620. Látky byly testovány na každé linii samostatně a poté každá v kombinaci s cytostatikem oxaliplatinou. Oxaliplatina se používá v léčbě nádorových onemocnění. V testovaných koncentracích se jako nejúčinnější jevil 6-prenylnaringenin u obou buněčných linií. Statistické vyhodnocení výsledků bylo provedeno pomocí programu Graphpad metodou One-way ANOVA v porovnání s kontrolou. Kombinační indexy byly určeny v programu Compusyn metodou dle Chou-Talalay.
|
|
|
Synthesis of epitestosterone and 4-hydroxyestrone glucuronides using recombinant human UDP-glucuronosyltransferases.
Kašparová, Michaela ; Skálová, Lenka (vedoucí práce) ; Matoušková, Petra (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Michaela Kašparová Školitelé: Prof. RNDr. Lenka Skálová, Ph.D., Erkka Järvinen, M.Sc. (Pharm.) Název diplomové práce: Syntéza glukuronidů epitestosteronu a 4-hydroxyestronu pomocí rekombinantních lidských UDP-glukuronosyltransferas Steroidní hormony tvoří důležitou součást lidského endokrinního systému a účastní se celé řady fyziologických i patologických procesů. Biotransformační reakce I. a II. fáze mění tyto lipofilní, biologicky aktivní látky na neaktivní, ve vodě rozpustné metabolity, které jsou snadno vylučitelné do žluči nebo moči. Jednou z nejběžnějších biotransformačních reakcí II. fáze je konjugace s kyselinou glukuronovou, která je umožněna katalytickou aktivitou UDP-glukuronosyltransferas (UGTs). Tato studie je zaměřena na vývoj a optimalizaci enzymatické metody využitelné pro produkci konjugátů kyseliny glukuronové a dvou přirozeně se vyskytujících steroidních hormonů, epitestosteronu a 4-hydroxyestronu. Jako katalyzátor pro produkci 17-glukuronidu epitestosteronu a 4-glukuronidu 4-hydroxyestronu byla použita rekombinantní lidská UGT2B7, zatímco syntéza 3-glukuronidu 4-hydroxyestronu byla uskutečněna pomocí izoformy UGT1A10. Měřítko syntetických reakcí bylo nastaveno tak, aby syntetizované...
|
|
|
Konstitutivní exprese UDP-glukosyltransferas vlasovky slezové
Nekovová, Lucie ; Matoušková, Petra (vedoucí práce) ; Vokřál, Ivan (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Lucie Nekovová Školitel: Ing. Petra Matoušková, Ph.D. Název diplomové práce: Konstitutivní exprese UDP-glukosyltransferas vlasovky slezové Hemonchóza způsobená gastrointestinální hlísticí Haemonchus contortus (vlasovka slezová) je jedním z nejčastějších parazitárních onemocnění malých přežvýkavců. Napadení chovu tímto krev sajícím parazitem znamená nejen závažné poškození zdraví zvířat, ale i s tím související sníženou produktivitu a ekonomické ztráty. Anthelmintika využívaná pro léčbu hemonchóz jsou často nedostatečně účinná z důvodu celosvětově se rozvíjející rezistence. Znalosti mechanismů způsobující rezistenci nejsou stále dostačující, a proto je kladeno velké úsilí na odhalení faktorů, které by mohly být jejich příčinou. Jedním z důvodů vzniku rezistence se zdají být změny biotransformačních enzymů a jejich exprese. U H. contortus bylo nalezeno více jak 40 genů kódujících různé druhy UDP-glukosyltransferas (UGT). UGT jsou hlavními enzymy spojovanými s deaktivací (glykosylací) léčiv u hlístic. Proto se tato práce zaměřuje především na rodinu UGT s cílem analyzovat pomocí qPCR změny v expresi těchto genů u citlivých (ISE) a rezistentních (WR) kmenů vlasovky slezové. 11 genů UGT z kmene ISE a WR,...
|
|
|
Synthesis of epitestosterone and 4-hydroxyestrone glucuronides using recombinant human UDP-glucuronosyltransferases.
Kašparová, Michaela ; Skálová, Lenka (vedoucí práce) ; Matoušková, Petra (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Michaela Kašparová Školitelé: Prof. RNDr. Lenka Skálová, Ph.D., Erkka Järvinen, M.Sc. (Pharm.) Název diplomové práce: Syntéza glukuronidů epitestosteronu a 4-hydroxyestronu pomocí rekombinantních lidských UDP-glukuronosyltransferas Steroidní hormony tvoří důležitou součást lidského endokrinního systému a účastní se celé řady fyziologických i patologických procesů. Biotransformační reakce I. a II. fáze mění tyto lipofilní, biologicky aktivní látky na neaktivní, ve vodě rozpustné metabolity, které jsou snadno vylučitelné do žluči nebo moči. Jednou z nejběžnějších biotransformačních reakcí II. fáze je konjugace s kyselinou glukuronovou, která je umožněna katalytickou aktivitou UDP-glukuronosyltransferas (UGTs). Tato studie je zaměřena na vývoj a optimalizaci enzymatické metody využitelné pro produkci konjugátů kyseliny glukuronové a dvou přirozeně se vyskytujících steroidních hormonů, epitestosteronu a 4-hydroxyestronu. Jako katalyzátor pro produkci 17-glukuronidu epitestosteronu a 4-glukuronidu 4-hydroxyestronu byla použita rekombinantní lidská UGT2B7, zatímco syntéza 3-glukuronidu 4-hydroxyestronu byla uskutečněna pomocí izoformy UGT1A10. Měřítko syntetických reakcí bylo nastaveno tak, aby syntetizované...
|
|
|
Genetické markery pro sledování posttransplantačního chimerismu
Řehounková, Michaela ; Beránek, Martin (vedoucí práce) ; Matoušková, Petra (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Bc. Michaela Řehounková Školitel: doc. PharmDr. Martin Beránek, Ph.D. Název diplomové práce: Genetické markery pro sledování posttransplatačního chimerismu Cíle práce: Zpracování dat pacientů, kteří prodělali alogenní transplantaci krvetvorných buněk v letech 2010 až 2014 ve Fakultní nemocnici Hradec Králové a jejich chimerismus byl sledován na Úseku molekulární biologie v Ústavu klinické biochemie a diagnostiky. Po zpracování dat se studoval možný vztah mezi vybranými klinickými parametry a použitými genetickými markery k vyšetření chimerismu. Na závěr se zhodnotily vlivy vybraných parametrů na úspěšnost léčby a úmrtnost v potransplantačním období. Metody: Pro vyšetření potransplantačního chimerismu byla použita metoda vyšetření lokusů krátkých tandemových repetic (STR), která využívá genetické variability mezi dárcem a příjemcem transplantovaného štěpu. DNA dárce a příjemce je izolována pomocí kolonkové soupravy QIAmp DNA Blood Mini Kit (QIAGEN, SRN), k amplifikaci se využívá souprava AmpFlSTR Identifier Kit (Applied Biosystems, USA) a k separaci kapilární elektroforéza (analyzátor ABI 3130-4, Applied Biosystems, USA) Závěr: Mezi nejinformativnější patřily markery D21S11, D2S1338, THO1, FGA a...
|
|
|
Modulační účinek humulenu, karyofylenu a karyofylenoxidu na vybrané biotransformační enzymy v lidských jaterních buňkách
Trnčáková, Veronika ; Boušová, Iva (vedoucí práce) ; Matoušková, Petra (oponent)
1 ABSTRAKT Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Bc. Veronika Trnčáková Školitel: doc. PharmDr. Boušová Iva, Ph.D. Název diplomové práce: Modulační účinek humulenu, karyofylenu a karyofylenoxidu na vybrané biotransformační enzymy v lidských jaterních buňkách Seskviterpeny jsou látky přírodního původu, produkované zejména vyššími rostlinami. Nachází se především v doplňcích stravy a léčivech přírodního původu. Charakteristická je pro tyto látky velká strukturní rozmanitost. Byly u nich popsány také protizánětlivé, antiparazitární a antikancerogenní účinky. Cílem této diplomové práce bylo zjistit, jaký účinek mají seskviterpeny α-humulen (HUM), β-karyofylen (KAR) a β-karyofylenoxid (CAO) na genovou a proteinovou expresi vybraných enzymů I. fáze biotransformace, kterými byly karbonylreduktasa 1 (CBR1), aldoketoreduktasa 1C (AKR1C) a několik isoforem cytochromu P450 (CYP), konkrétně CYP3A4, CYP2B6 a CYP2C. Účinek seskviterpenů na genovou a proteinovou expresi enzymů byl studován v ultratenkých lidských jaterních řezech (průměr 8 mm, tloušťka 150-180 µm). Jaterní vzorky pocházely z resekce od pěti lidí obou pohlaví a věku 58 až 69 let. Jaterní řezy byly inkubovány 24 hodin se studovanými látkami (HUM, KAR, CAO) v 10 µM koncentraci ve 12 jamkové destičce a v atmosféře...
|
|
|
HPLC-high resolution mass spectrometry analysis of in vitro and in vivo metabolism of scoparone
Novák, Filip ; Matoušková, Petra (vedoucí práce) ; Raisová Stuchlíková, Lucie (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Univerzita Východního Finska, Škola farmacie Katedra farmaceutické chemie Kandidát: Filip Novák Školitel: Ing. Petra Matoušková, Ph.D. Konzultant: prof. Seppo Auriola Název diplomové práce: In vitro a in vivo analýza metabolismu skoparonu pomocí HPLC a hmotnostní spektrometrie s vysokým rozlišením Skoparon je účinnou složkou v rostlině Artemisia scoparia používané v tradiční čínské medicíně. Byl předmětem studií pro nejrůznější farmakologické účinky jako upregulace konjugačních enzymů zodpovědných za exkreci bilirubinu, snížení hladin prozánětlivých cytokinů, snížení hladin plasmatických lipidů nebo inhibice agregace krevních destiček. V této práci byl studován metabolismus skoparonu pomocí LC-MS metody využívající Q-ToF analysátor. In vitro oxidace skoparonu byla studována po inkubaci s mikrosomy připravenými ze vzorků jater ze šesti různých savčích druhů. Celkem bylo v in vitro vzorcích identifikováno 6 metabolitů. Skopoletin a isoskopoletin byly identifikovány jako hlavní metabolity u každého z vybraných druhů, nicméně celková míra oxidace skoparonu i poměr vznikajícího isoskopoletinu a skopoletinu se lišily. Dále byly studovány in vivo metabolity skoparonu ve vzorcích moči získaných od dvou zdravých...
|
|
|
Základní charakterizace lidských enzymů DHRS7B a DHRS7C
Tučková, Tereza ; Zemanová, Lucie (vedoucí práce) ; Matoušková, Petra (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Tereza Tučková Školitel: RNDr. Lucie Zemanová, Ph.D. Název práce: Základní charakterizace lidských enzymů DHRS7B a DHRS7C Lidské enzymy z nadrodiny dehydrogenas/reduktas s krátkým řetězcem, anglicky "short-chain dehydrogenase/reductase" (SDR) se účastní mnoha fyziologických pochodů, jako je metabolismus lipidů, sacharidů, aminokyselin, steroidních hormonů, retinoidů, prostaglandinů a dalších. Mimoto hrají roli také v patogenezi některých onemocnění, například hormon-dependentních nádorů, metabolického syndromu a diabetu mellitu. Navíc se některé enzymy podílejí na biotransformaci xenobiotik. Nicméně asi 30 % zástupců SDR bohužel nebylo doposud vůbec charakterizováno. Lidské dehydrogenasy/reduktasy DHRS7B a DHRS7C patří mezi nedostatečně popsané SDR. Na základě bioinformatických dat se předpokládá, že se jedná o membránově vázané proteiny s redukční aktivitou. Cílem této práce bylo určit jejich základní biochemické vlastnosti. Výsledky ukazují, že oba enzymy interagují s membránou endoplazmatického retikula a jsou orientovány do cytosolu. Byl proveden prvotní screening enzymové aktivity. U DHRS7B i DHRS7C převládala redukční aktivita, která dosahovala vyšších hodnot v přítomnosti NADH jako kofaktoru a byla...
|
|
|
IN VITRO assays for investigating nucleic acid delivery.
Mihaličoková, Dajana ; Jirkovská, Anna (vedoucí práce) ; Matoušková, Petra (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové, Katedra biochemických vied University of Vienna, Faculty center for Pharmacy, Department of Pharmaceutical Chemistry, Laboratory of MacroMolecular Cancer Therapeutics Kandidát: Dajana Mihaličoková Školiteľ (Univerzita Karlova): PharmDr. Anna Jirkovská, Ph.D. Školiteľ (University of Vienna): Univ.Prof. Dipl. Ing. Dr. Manfred Ogris Konzultant (University of Vienna): Dr. Haider Sami, Ph.D. Názov diplomovej práce: Hodnotenie transfekcie nukleových kyselin v in vitro podmienkach Kľúčové slová: transfekcia, úprava zostrihu, BCA test, polyplexy Jednou z najdôležitejších úloh súčasného biomedicínskeho výskumu je nájsť správnu cestu ako vyliečiť rakovinu, genetické choroby a iné choroby, ktoré sú stále nevyliečiteľné. Voči tomu, génová terapia je vynikajúca ako potencionálna liečba pomocou ktorej je možné dopraviť genetický materiál do bunky. Reportérové gény založené na transfekčnom procese môžu byť použité na štúdium génovej expresie. Transfekcia je sprostredkovaná pomocou vektorov, buď to virovými alebo nevirovými. Nevirové vektory ponúkajú mnoho výhod oproti virovým proťajškom v jednoduchšej príprave, sú pomerne lacné a najdôležitejšia je ich neimunogénnosť. Kationické polyméry založené na polyethylenimine tvoria komplexy s plazmidovou DNA...
|
|
|
Studium interakcí enzymu DHRS7 s proteiny metodou pull-down
Káchová, Kateřina ; Novotná, Eva (vedoucí práce) ; Matoušková, Petra (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Kateřina Káchová Školitel: RNDr. Eva Novotná, Ph.D. Název diplomové práce: Studium interakcí enzymu DHRS7 s proteiny metodou pull-down Dehydrogenáza/reduktáza nadrodiny SDR 7 (DHRS7) patří mezi méně probádané enzymy této nadrodiny. Bylo prokázáno, že se tento enzym in vitro zapojuje do redukčního metabolismu celé řady sloučenin, jako například steroidů, retinoidů a xenobiotik. V poslední době se také objevují výsledky poukazující na možnou roli tohoto enzymu v patogenezi nádoru prostaty či jiných onemocnění. Proto by bylo vhodné tento enzym podrobněji charakterizovat s cílem objasnit jeho pato/fyziologickou funkci v organismu. Jelikož se v poslední době poukazuje na důležitost protein-protein interakcí pro funkci proteinů, bylo cílem této práce popsat interakční partnery enzymu DHRS7 a tím přispět k prohloubení znalostí o tomto enzymu. K tomu byla použita in vitro metoda pull-down. V prvním kroku byl enzym DHRS7 (návnadový protein) imobilizován na vhodný nosič (magnetické partikule His Mag Sepharose Ni a nemagnetické Protino Ni-IDA partikule). Poté byl nosič s DHRS7 enzymem inkubován s lyzátem buněk Hep G2, zdrojem možných interakčních partnerů. SDS-PAGE elektroforéza vzorků po eluci obsahovala několik...
|
host ::
RSS.