|
| |
|
|
Post-Translational Modifications of Nuclear and Non-Nuclear Proteins in Spermatozoa
Řimnáčová, Hedvika ; Nevoral, Jan (vedoucí práce) ; Krapf, Dario (oponent) ; Álvarez Rodríguez, Manuel (oponent)
Posttranslační modifikace jaderných a nejaderných proteinů ve spermiích Souhrn Kvůli početí potomka vyhledává pomoc asistovaných reprodukčních technologií (ART) stále více párů. Až za polovinou případů párové neplodnosti, stojí mužská neplodnost, která nezřídka končí diagnózou idiopatická (bez známé příčiny). Hledání nových ukazatelů mužské plodnosti, má proto velký význam pro diagnostiku mužské neplodnisti a případně pro selekci spermiích (ne)vhodných pro použití v ART. Post-translační modifikace (PTM) jaderných a nejaderných proteinů se zdají být vhodnými kandidáty pro takové ukazatele. Na jedné straně jsou PTM jaderných proteinů, protamínů a histonů, které odrážejí zralost chromatinu spermie, jeho připravenost na oplození a také kvalitu budoucího embrya. Na druhé straně jsou PTM nejaderných proteinů, zahrnující cytoplasmatické, cytoskeletární a membránové proteiny, které odrážejí schopnost spermie podstoupit hyperaktivaci, kapacitaci a akrosomální reakci, jinými slovy procesy, které jsou nezbytné pro nalezení a oplození oocytu. V této práci předpokládáme, že PTM jaderných a nejaderných proteinů odrážejí kvalitu spermií, a tak mohou sloužit jako selektivní ukazatele pro využití v ART. Dále předpokládáme, že přidání hydrogen sulfanu (H2S) do in vitro manipulačního média, zlepší motilitu a viabilitu...
|
|
|
Glykoproteinový profil ejakulátu mužů jako marker jeho kvality
Pavlová, Hana ; Postlerová, Pavla (vedoucí práce) ; Krejčová, Tereza (oponent)
Glykoproteiny jsou nepostradatelnou složkou glykokalyxu spermií. Vznikají procesem kotranslační či posttranslační modifikace, glykosylace, při které jsou sacharidové řetězce, takzvané glykany, připojovány na peptidový řetězec. Glykoproteiny participují na reprodukčních procesech a jejich přítomnost je často klíčová pro úspěšnou fertilizaci. Míra glykosylace glykoproteinů je velmi variabilní a je dána zastoupením sacharidových jednotek v glykanech. Již dříve bylo zjištěno, že míra glykosylace může souviset s fertilitou jedince. Diplomová práce je zaměřena na porovnání zastoupení terminálních sacharidů, sialové kyseliny a fukózy, v glykoproteinech spermií a semenné plazmy pacientů s normálními a abnormálními parametry ejakulátu. Zjišťována byla celková míra sialylace a fukosylace v semenné plazmě a dále míra sialylace a fukosylace konkrétních detekovaných glykoproteinů spermií a semenné plazmy. Signifikantní rozdíl byl zaznamenán pouze při detekci celkové fukosylace glykoproteinů semenné plazmy. Následnými korelačními testy však byly zjištěny důležité souvislosti mezi mírou sialylace a fukosylace glykoproteinů a parametry ejakulátu, konkrétně objemem, morfologickými abnormalitami spermií, probíhající apoptózou, a především přítomností protilátek proti spermiím v ejakulátu. Také byly identifikovány...
|
|
|
Fyziologické a hormonální mechanizmy ovlivňující kvalitu ejakulátu u ptáků
Mojžišová, Kateřina ; Tomášek, Oldřich (vedoucí práce) ; Svobodová, Jana (oponent)
Pohlavní výběr je důležitým mechanismem evolučního vývoje. Kromě předkopulačního výběru, kdy většinou samci soupeří o partnerky, existuje ještě pokopulační výběr mezi spermiemi (tzv. kompetice spermií) v případě, že samice kopulují s více samci. I když je většina druhů ptáků sociálně monogamních, značná část z nich je také částečně promiskuitní. U těchto druhů je pokopulační výběr důležitým mechanismem zvyšujícím variabilitu v reprodukční úspěšnosti mezi samci. Kvalita ejakulátu, rozhodující o úspěšnosti samce v kompetici spermií, je určena především koncentrací a celkovým počtem spermií, jejich morfologií a pohyblivostí. Moje bakalářská práce shrnuje dosavadní poznatky o hormonálních a fyziologických mechanismech, které mohou ovlivnit kvalitu ejakulátu. Jedná se především o vliv pohlavních a jiných hormonů, fyziologického a oxidativního stresu, vnějších podmínek, antioxidačních mechanismů a složení buněčných membrán spermií. Kromě jejich vlivu na kvalitu ejakulátu na vnitrodruhové úrovni jsou v práci hodnoceny také jejich odlišnosti mezi ptačími druhy, především ve vztahu k různé intenzitě pokopulačního pohlavního výběru.
|
|
|
Meióza a fertilita juvenilních myších samců
Valtrová, Pavlína ; Trachtulec, Zdeněk (vedoucí práce) ; Reifová, Radka (oponent)
Úkolem této práce je shrnout literaturu zabývající se zvláštnostmi spermatogeneze juvenilních myší (Mus musculus) a možnostmi jejich využití. Spermatogeneze je proces, který vede skrze meiotické dělení ke vzniku spermií. Buňka prochází ve vlnách buněčnými typy: spermatogonie, spermatocyty, spermatidy a spermie. Juvenilní myši (kde množství spermií a velikost testes nedosáhly maxima) jsou často využívané pro studium jednotlivých typů buněk. U juvenilních myší trvá přechod mezi buněčnými typy kratší dobu. Spermie vznikající během první vlny spermatogeneze (zkratka VS) jsou odvozené přímo z prenatálních gonocytů, což umožňuje dřívější produkci spermií. Mají nižší četnost crossing overu (CO) kvůli odlišnému zpracování meiotických meziproduktů CO; následkem mohou být aneuploidie (o chromozom více nebo méně). Spermie z 2.VS mají také nižší četnost CO. Během 3.VS sestupují testes a teplota klesá na 33řC; četnost CO více podobá dospělcům. Až ve 4.VS maturují podpůrné testikulární buňky, které mj. produkují testosteron, a četnost CO je jako u dospělých. U juvenilních myší je též častější výskyt a vyšší závažnost malformací spermií. Nízká četnost CO by neměla mít na fertilitu vliv; chyby jsou eliminovány v kontrolních bodech meiózy. Je ale zajímavé, že potomci mladých mužů mají vyšší riziko aneuploidií,...
|
|
|
Epigenetické a strukturální charakteristiky savčích oocytů a embryí: extrapolace pro humánní asistovanou reprodukci (ART)
Langerová, Alena ; Fulka, Josef (vedoucí práce) ; Pěknicová, Jana (oponent) ; Chod, Jiří (oponent)
Před více jak 35 lety (1978) se ve Velké Británii narodila Louise Brownová, první dítě na světě počaté ve zkumavce - in vitro (IVF - in vitro fertilization). Předpokládá se, že do současné doby se narodilo s pomocí IVF již více než 4 000 000 dětí. První snahy o oplození měly úspěšnost kolem 20%, dnes je ale úspěšnost až dvojnásobná (40%). To je výsledkem zavádění nových metod, standardizace manipulačních a kultivačních médií a v neposlední řadě i získáním řady nových poznatků. I přes zavádění nových metod je základním předpokladem úspěchu IVF profesionální práce pracovníků IVF klinik a IVF laboratoře, jejich znalosti v dané oblasti a schopnost posouzení kvality biologického materiálu. Permanentní trénink na nevyužitém biologickém materiálu (nezralé a méně kvalitní oocyty) a jeho využití k výzkumu, by měly být pak základním předpokladem k tomu, aby příslušná IVF centra mohla zavádět další nové progresivní postupy a zkvalitňovat léčbu infertility. I to je navíc předpokladem pro to, aby bylo možné zodpovědět některé otázky z asistované reprodukce, které nejsou dosud zcela jasně vysvětleny. V prvním okruhu jsme se zaměřili na posouzení kvality oocytů, které byly získány aspirací folikulů po stimulaci vaječníků pacientek gonadotropiny. Pro značení protilátkami proti acetylovaným histonům byly použity...
|
|
|
Fyziologické a hormonální mechanizmy ovlivňující kvalitu ejakulátu u ptáků
Mojžišová, Kateřina ; Tomášek, Oldřich (vedoucí práce) ; Svobodová, Jana (oponent)
Pohlavní výběr je důležitým mechanismem evolučního vývoje. Kromě předkopulačního výběru, kdy většinou samci soupeří o partnerky, existuje ještě pokopulační výběr mezi spermiemi (tzv. kompetice spermií) v případě, že samice kopulují s více samci. I když je většina druhů ptáků sociálně monogamních, značná část z nich je také částečně promiskuitní. U těchto druhů je pokopulační výběr důležitým mechanismem zvyšujícím variabilitu v reprodukční úspěšnosti mezi samci. Kvalita ejakulátu, rozhodující o úspěšnosti samce v kompetici spermií, je určena především koncentrací a celkovým počtem spermií, jejich morfologií a pohyblivostí. Moje bakalářská práce shrnuje dosavadní poznatky o hormonálních a fyziologických mechanismech, které mohou ovlivnit kvalitu ejakulátu. Jedná se především o vliv pohlavních a jiných hormonů, fyziologického a oxidativního stresu, vnějších podmínek, antioxidačních mechanismů a složení buněčných membrán spermií. Kromě jejich vlivu na kvalitu ejakulátu na vnitrodruhové úrovni jsou v práci hodnoceny také jejich odlišnosti mezi ptačími druhy, především ve vztahu k různé intenzitě pokopulačního pohlavního výběru.
|
|
| |
|
|
Expression of estrogen receptor beta (ERβ) In murine male reproductive tract and sperm
Dostálová, Pavla ; Děd, Lukáš ; Dorosh, Andriy ; Elzeinová, Fatima ; Pěknicová, Jana
Estrogens are steroid hormones that play an important role in reproduction of both sexes. In male, the main source of estrogens are testes where both somatic and germ cells are responsible for testosteron conversion to estrogens. Estrogens are involved in control of spermatogenesis, fluid reabsorption in rete testis and epididymis, and in later maturation steps that sperm undergo in female genital tract (capacitation, acrosome reaction). Generally, estrogen action is mediated through binding to estrogen receptors (ERs) which than lead to classical genomic or rapid non-genomic signaling. Nowadays, two classical estrogen receptors are known – ERα and ERβ. ERβ is a predominant variant in testes, while ERα is more abundant in rete testis and initial segment of epididymis. In addition to classical ERs, several splice variants that can differ in their ligand- or DNA-binding properties were detected in different tissues and cell lines. ERs mostly work as a dimer (homo- and hetero-) and splice variants often „only“ modulate function of classical full-length ERs. Therefore, estrogen action seems to be a very complex. To contribute to understanding of estrogen action in male, we detected ERβ and its potential splice variants in mice testis, epididymis and sperm. According to our results, two variants are present in all analysed tissues and cells. These variants differ in one exon in ligand binding domain which leads to different affinity for estrogens. To analyse these variants also at a protein level, we prepared specific monoclonal antibodies recognizing particular variant of ERβ. Both atibodies detected band(s) in protein extracts from testes or epididymis. Taking together, there are at least two variants of ERβ in mice testes, epididymis and sperm and it seems that both variants are similar in abundance within the same organ or sperm.
|
|
|
The effect of tetrabromobisphenol a on protamination and DNA quality of mouse sperm
Žatecká, Eva ; Castillo, J. ; Elzeinová, Fatima ; Kubátová, Alena ; Děd, Lukáš ; Pěknicová, Jana ; Oliva, R.
Tetrabromobisphenol (TBBPA) is a widely used brominated flame retardant, currently its consumption is 210,000 tons / year and is still growing. In our previous multigenerational in vivo study we have demonstrated that TBBPA is able to induce apoptosis of testicular cells and changes in the expression of genes important for proper spermatogenesis. However the potential effect of TBBPA on epidydimal spermatozoa had not yet been investigated. Therefore, we performed further study to evaluate the effect of on sperm DNA integrity and on the protamines as the major nuclear proteins. C57Bl/6J mice pups (n=10) were exposed to TBBPA (experimental group) during the gestation, lactation, pre-pubertal and pubertal periods up to the age of 70 days and compared control mice pups (n= 10) which were not exposed. Our results demonstrate that TBBPA treatment results in a significantly decreased P1/P2 ratio, increased total protamine/DNA ratio and increased DNA fragmentation observed between TBBPA and control mice, respectively. Protamines have recently been connected to the epigenetic marking of sperm chromatin in human and mouse spermatozoa. Thus, our findings suggest that TBBPA exposure, in addition to result in increased sperm DNA damage, may also alter the epigenetic marking of sperm chromatin.
|
host ::
RSS.