|
|
Hemoprotein Nitric Oxide Synthase in Aplysia Californica
Buganová, Michaela ; Martásek, Pavel (vedoucí práce) ; Pelouch, Václav (oponent) ; Druga, Rastislav (oponent)
Oxid dusnatý (NO) má nezastupitelnou roli v neuronálni signalizaci v řadě eukaryotických a prokaryotických organizmů. NO-syntázy (NOS) jsou hem-obsahujicí monooxygenázy, které v přítomnosti kyslíku katalyzují oxidaci L-argininu na NO a L-citrulin. NO produkovaný NOsyntázou je plynná molekula, která lehce difunduje přes membrány a zprostředkovává jak mezibuněčnou, tak i vnitrobuněčnou komunikaci. NO aktivuje enzymy vážici kovy včetně solubilni guanylátcyklázy (sGC), a tím zvyšuje hladinu druhého posla cyklického guanosinmonofosfátu (cGMP) (1, 2), který dále zprostředkovává řadu fyziologických a patologických procesů v neuronech. Nicméně, detailní charakteristika nitrergních neuronů a funkce NO v centrální nervové soustavě (CNS) není zcela objasněna. Cílem dizertační práce bylo charakterizovat neuronálni NOS, proteiny spojené s metabolismem neuronálni NOS a signální dráhu NO v CNS zeje kalifornského (Aplysia cali/ornica), populárního experimentálního modelu buněčných a systémových neurověd. Na biochemické úrovni byla zjištěná závislost NOS Aplysie (/IcNOS) na kalciu- kalmodulinu (Ca-CaM) a NADPH. Řada reprezentativních inhibitorů savčích NOS isoforem též snížila NOS aktivitu u Aplysie. Polyklonálni protilátky vytvořené proti krysí NOS hybridizovaly na Western blotu s purifikovanou /IcNOS (160 kDa protein) z...
|
|
| |
|
| |
|
|
Úloha NAD(P)H oxidasy v signální transdukci
Vejražka, Martin ; Štípek, Stanislav (vedoucí práce) ; Pelouch, Václav (oponent) ; Zima, Tomáš (oponent)
Reaktivní formy kyslíku se vetšinou vnímají jako nebezpecné, cytotoxické látky, které se podílejí na patogenezi mnoha onemocnení tím, že poškozují biomolekuly. Mají však i nezastupitelnou úlohu pri mnoha fyziologických funkcích. V realtivne nízkých koncentracích se podílejí na signální transdukci. Jsou zapojeny do signálních drah ovlivnujících fosforylaci bílkvin, genovou expresi, dostupnost oxidu dusnatého ci koncentraci intracelulárního vápníku. V konecném efektu se podílejí napr. na rízení bunecného cyklu a apoptzy. Z orgánového hlediska se v poslední dobe venuje velká pozornost jejich úloze pri regulaci napetí cévní steny. Mezi nejvýznamnejší zdroje reaktivních forem kyslíku se dnes pocítají NAD(P)H oxidasy, enzymy blízké fagocytární NADPH oxidase, jež hraje nezastupitelnou roli v imunitní odpovedi. V této práci jsme se venovali srovnání vlastností NAD(P)H oxidasy v cévní stene u normotenzních a hypertenzních laboratorních zvírat. V pokusech s bunkami kultivovanými in vitro jsme ukázali, že se liší aktivity tohoto enzymatického systému mezi bunkami z normotenzních a hypertenzních jedincu. Liší se také regulace NAD(P)H oxidas, prinejmenším pokud jde o jejich ovlivnení angiotensinem II a kyselinou mocovou. Na zacátku experimentálních prací jsme narazili na neocekávané vlastnosti apocyninu, známého...
|
|
|
Změny jednotlivých isoforem syntázy oxidu dusnatého u experimentální hypertenze a metabolického syndromu: genetické a molekulárně-biologické aspekty
Hojná, Silvie ; Kuneš, Jaroslav (vedoucí práce) ; Pelouch, Václav (oponent) ; Kittnar, Otomar (oponent) ; Cífková, Renata (oponent)
Kardiovaskulární onemocnění (infarkt myokardu, ischemická choroba srdeční, mozková mrtvice, hypertenze a další) patří mezi nejzávažnější problémy současného světového zdravotnictví. Jejich následky jsou zodpovědné téměř za polovinu veškerých úmrtí (Mackay a Mensah, WHO, 2005). Výjimkou není ani Česká republika, která je Světovou zdravotnickou organizací řazena na jedno z předních míst v úmrtnosti na choroby srdce a cév (Guidelines Committee, 1999). Jak v průmyslově vyspělých zemích, tak i v rozvojovém světě se arteriální hypertenze (HT) společně s některými metabolickými poruchami souhrnně označovanými jako metabolický syndrom stávají značně rozšířenými rizikovými faktory vzniku kardiovaskulárních chorob (Khor, 2001, Vorster, 2002). Může za to významně se prodlužující délka života, během níž se ve zvýšené míře mohou negativně projevit další faktory jako jsou obezita, fyzická inaktivita, nezdravá strava (Singh a kol., 2000, Yusuf a kol., 2001) a zhoršující se životní prostředí. Podle Evropské společnosti pro hypertenzi a Evropské kardiologické společnosti je hypertenze definovaná jako opakované zjištění klidového krevního tlaku (TK) nad hodnoty 139/89 mm Hg (De Backer a kol., 2003). Tato arbitrární hranice systolického a diastolického tlaku byla určena na základě zjištění, že od těchto hodnot prudce narůstá...
|
|
|
The Role of Human Sco1, Sco2, Surf1 and Oxa1l in the Biogenesis of the Mitochondrial Oxidative Phosphorylation System
Stibůrek, Lukáš ; Zeman, Jiří (vedoucí práce) ; Entlicher, Gustav (oponent) ; Pelouch, Václav (oponent)
The thesis was worked out in The laboratory for study of mitochondrial disorders at the Department of Pediatrics, First Faculty of Medicine, Charles University in Prague. The study of human mitochondrial biogenesis, particularly of the oxidative phosphorylation system (OXPHOS), and its pathologies has seen remarkable progress in past decade. The knowledge of the complete sequence of the human genome, together with the results of elegant yeast studies aimed at the identification of respiratory important gene products, enable us to identify and study the molecular and biochemical bases of numerous human mitochondrial pathologies. These studies not only continue to reveal the underlying molecular mechanisms of the disease etiopathogenesis but also shed completely new light on the various processes of mitochondrial assembly and function in humans. The work presented in this thesis was aimed mainly at the understanding of the various roles of mitochondrial assembly factors Sco1, Sco2, Surf1 and Oxa1l in the assembly and/or maintenance of the five multimeric complexes of the OXPHOS system. The presented data indicate that human Sco1 and Sco2 are involved, in a highly tissue-specific manner, in distinct posttranslational steps of maturation of the cytochrome c oxidase (CcO) subunit Cox2. Furthermore, both SCO...
|
|
|
Úloha intrarenálního renin-angiotenzinového systému v rozvoji hypertenze u Ren-2 transgenních potkanů
Husková, Zuzana ; Červenka, Luděk (vedoucí práce) ; Pelouch, Václav (oponent) ; Tesař, Vladimír (oponent) ; Kittnar, Otomar (oponent)
Historie renin-angiotenzinového systému (RAS) sahá až do 19. století. Za nejúčinnější složku RAS je stále považován ANG II. Tento oktapeptid hraje důležitou roli v kontrole objemu tělních tekutin, v regulaci krevního tlaku a v kardiovaskulárním remodelingu prostřednictvím přímých účinků na syntézu proteinů, na buněčný růst a diferenciaci buněk, na indukci růst-podporujících genů a na utlumení syntézy kyslíkových radikálů, prostanoidů či cytokinů. Hlavním cílem této dizertační práce bylo zjistit, jakou úlohu hraje interakce mezi systémovým a intrarenálním RAS v rozvoji hypertenze. Vycházeli jsme z následující hypotézy: u transgenních potkanů dochází v období rozvoje hypertenze k urychlené intrarenální tvorbě ANG II, která není následována přiměřeným útlumem exprese AT1 receptorů v renálním řečišti a v oblasti tubulárního systému ledvin. Kombinace těchto dvou faktorů je odpovědná za zvýšenou renální vaskulární rezistenci, zvýšenou tubulární reabsorpci sodíku a celkové zhoršení funkce tlakově-natriuretického mechanismu ledvin a následný rozvoj hypertenze. Celá práce je rozdělena do několika kapitol. První část je zaměřena na klasický RAS, na jeho známé i nově objevené hlavní složky a na jednotlivé lokální tkáňové RAS. Hlavním tématem druhé části jsou zvířecí modely hypertenze. Jsou zde popsány čtyři modely...
|
|
|
Vyšetření významu peptidů regulujících příjem potravy a nutriční stav u dětí a adolescentů
Bronský, Jiří ; Průša, Richard (vedoucí práce) ; Pelouch, Václav (oponent) ; Hyánek, Josef (oponent)
Úvod: Regulace příjmu potravy a nutričního stavu je komplexní děj zprostředkovaný vzájemnou souhrou řady regulačních peptidů centrálního nervového systému, gastrointestinálního traktu a tukové tkáně. Tyto systémy jsou propojeny zpětnými vazbami, které informují o příjmu potravy a množství energetických zásob v organismu. Porucha v některé z těchto oblastí může vést ke změně nutričního stavu organismu. Metody: Radioimunoanalýzou byly stanoveny plazmatické hladiny orexinu A, celkového ghrelinu a sérové hladiny leptinu a enzymovou imunoanalýzou byly stanoveny sérové hladiny adiponektinu u zdravých jedinců a u dětských pacientů s obezitou, mentální anorexií, Crohnovou nemocí a celiakální sprue a byl popsán vliv nutriční intervence na tyto hladiny. Dále byl zhodnocen vztah jednotlivých regulačních peptidů k základním biochemickým a antropometrickým ukazatelům nutričního stavu. Metodou enzymové imunoanalýzy s imunofluorescenční detekcí jsme stanovili plazmatické hladiny celkového a neredukovaného amylinu u dospělých pacientů s osteoporózou, diabetem II. typu a u kontrolní skupiny. Výsledky: Během redukce tělesné hmotnosti u dětských a adolescentních pacientů s obezitou došlo ke statisticky významným změnám plazmatických hladin orexinu A a celkového ghrelinu, zatímco sérové hladiny adiponektinu se významně...
|
|
| |
|
|
Sites and Consequences of Mitochondreal ROS Production
Mráček, Tomáš ; Houštěk, Josef (vedoucí práce) ; Pelouch, Václav (oponent) ; Kolarov, Jordan (oponent)
The thesis consists of 8 articles (6 published and 2 submitted), which may be divided into two major lines. The first (articles 1-4) deals with mitochondrial glycerophosphate dehydrogenase. We have shown that this enzyme is capable of massive ROS production and in the presented works we studied in more detail this ROS production as well as some aspects of enzyme biogenesis, so as to better understand its physiological significance. The second line (articles 5-8) represents our studies on the potential involvement of ROS in pathogenesis of mitochondrial diseases. 1. Glycerophosphate-dependent hydrogen peroxide production by brown adipose tissue mitochondria and its activation by ferricyanide; Drahota Z., Chowdhury SKR., Floryk D., Mráček T., Wilhelm J., Rauchová H., Lenaz G., Houštěk J.; J Bioenerg Biomembr. 2002; 34(2):105-13. Indeed, this was first article to demonstrate ROS production by mammalian mGPDH. We studied oxidation of glycerophosphate by brown adipose tissue mitochondria, which are known to contain high amounts of mGPDH. We found significant GP-dependent AA- stimulated production of H2O2. To further verify our findings, we used three independent methods for H2O2 measurement - fluorescence detection with p-hydroxyphenylacetic acid, antimycine A - insensitive oxygen consumption, and luminometric...
|
host ::
RSS.