|
|
Protein chemistry and mass spectrometry in biochemical research
Pompach, Petr ; Bezouška, Karel (vedoucí práce) ; Chmelík, Josef (oponent) ; Kovářová, Hana (oponent)
Protein chemistry and mass spectrometry in biochemicul research Petr Pompach Ph. D. Thesis Department of Biochemistry Faculty of Science Charles University Supervisor: Doc. RNDr. Karel Bezouška, CSc. Prague 2006 tEia*iiitg;;tiBiÉ (n OO oO O\ O\ C.l C.l .+ : : : : :ÉGlc.l c.: Ý l.) a z t-r (J Fl E) lra J a U z a Fr tl5 a Fr zr\J) alai P.: ai a - Lr o L d a (|i iť r h t) o() r a a q C) ! - H F (n F íi a o) O a X, o >. C) o .l I +i oL o -O o o l.r U) N z oo - O o I L a Li +i vi ol Ei!t ,ql -l E 3a (n z E F a F z F z U pg ť: šé3; Ei ĚE$áE€EÉEáiz E ÉĚ E Ě s E ; u ; ó =-E5Ě:gd:'i = t Ei giĚg;;:1lV)iĚggĚgEsáEĚi* E Ě=;Éía:š;Éť E É!řěEEEFgg : ií€gáŤÉ5 ž:::š;;i : zi:€ i=ts€ĚiĚišĚÉiš;š5ĚiE.:. = = € .T ŽlĚE g;t$jíigggřEE iuEái E :É€šáĚ g;iÉ{Ě;ítÉÉF€Ě E iĚĚĚi ; š;šš!iiE řě E ši gE ig Ý E giĚE šgig;išiš::gígFĚi+g s E *'suĚšěĚ Ěie *Ěá, uE trE s'' -k*-=a.*:.* g: EPE€'šEEř€9 ěÍ.E ;š e::E;;áe;iÉgřšiE řĚt.E*E$*eE=$[:gř.v :IEF€=áfrE;='2E-ď ?! : g"HEu.:i=ĚE€;ÉE€ř€ Eš,*éEě9t.F;EE.Ě., ťiEEEE*ě:iiEĚgĚ:Éžáx;šš ř 5šEtsť uE.E.= e *n á:; € žEř: € ÉE.: i= ř-g p; i ĚĚ;: € i íEĚ = Hi;2E É*Ě u, Ě y ?' : 6 ě ř ; fij .: .c F=E;-sg&,Ě7Éď€3E€€ -i€E.E =:Í E=bÉ::ň !B:,: E t šáč š 3e = Ě l E ř f L Ei:í:9:*q;€gq3:;:.E: ťšÉI: Ě i ?E Ě ; Éi É.EE E EEE :!rEě45BEE EE.= €Eě íEEra-vĚ=3ň €.E3 iillťlgtššgtgi;g;ggiĚš; iáágá9 $*i;Ě:E; -Eás;t;É$ \o Ěi gi...
|
|
|
Studies of NK cell receptors and other proteins using recombinant expression and mass spectrometry
Kavan, Daniel ; Bezouška, Karel (vedoucí práce) ; Tučková, Ludmila (oponent) ; Řehulka, Pavel (oponent)
Univerzita Karlova v Praze P írodov decká fakultař ě Katedra biochemie Studium receptor NK bun k a jinýchů ě protein pomocí rekombinantní expreseů a hmotnostní spektrometrie Autoreferát dizertační práce Daniel Kavan Školitel: Prof. RNDr. Karel Bezouška, DSc. Praha 2010 Daniel Kavan Úvod Úvod NK bu ky a jeden z jejich receptor CD69ň ů P irození zabiječi (NK bu ky) jsou subpopulacíř ň velkých granulárních lymfocyt , kterým na bun čnémů ě povrchu schází receptory charakteristické pro B a T bu ky.ň Jsou nicmén charakterizovány p ítomností NKp46 a NKp30ě ř [Moretta L. et. al. 2002]. Pojmenování bun k p irozeníě ř zabiječi vzniklo podle funkce v organismu, protože nepot ebují žádnou p edchozí aktivaci a p esto jsou schopnyř ř ř eliminovat nenormální (tedy infikované nebo transformované) bu ky z tkánň ě [Kiessling R. et. al. 1975]. Tato funkčnost je založena na kontrole MHC molekul I. T ídyř okolních bun k. Výsledná akce (zničení nebo nezničeníě cílové bu ky) je výsledkem rovnováhy aktivačních aň inhibičních signál zprost edkovanými povrchovýmiů ř receptory a p evedenými na konkrétní signální dráhyř [Raulet D. H. et. al. 2001]. Specifita NK bun k není závislá na jediném druhuě receptoru, jako je tomu u B a T bun k, ale je dánaě r znorodostí jejich povrchových receptor [Lanier L. L.ů ů 2005]. Tyto receptory pak...
|
|
| |
|
| |
|
| |
|
| |
|
| |
|
| |
|
| |
|
|
Rekombinantní příprava receptorů potkaních NK buněk v expresním systému HEK293T.
Celadová, Petra ; Bezouška, Karel (vedoucí práce) ; Půta, František (oponent)
NK buňky hrají důležitou roli v imunitní odpovědi proti nádorovým a virově infikovaným buňkám. Exprimují široké spektrum různých povrchových receptorů, mezi které patří také NKRP1. Jedná se o rodinu C-lektinových receptorů, která zahrnuje receptory jak s inhibiční, tak s aktivační funkcí. Poměrně nedávno byly pro některé molekuly z této rodiny nalezeny ligandy, které patří taktéž do nadrodiny C-lektinových receptorů . Jedná se mj. o potkaní Clr-b, fyziologický ligand pro NKRP1B. Bylo zjištěno, že inhibiční funkce receptorového komplexu NKRP1B-Clr-b může být nabourána proteinem potkaního cytomegaloviru RCTL, virové verze Clr-b, která slouží jako falešný ligand pro NK buňky. Cílem mé diplomové práce bylo klonování a příprava zmíněných C-lektinových receptorů v transientně transfekované HEK293T buněčné linii v suspenzní kultuře. Tento expresní systém umožňuje získat proteiny s uspokojivým výsledkem, a to v jejich nativní konformaci, čímž je odstraněna potřeba časově náročných a často bezvýsledných pokusů o renaturaci proteinů připravených pomocí bakteriálního expresního systému v E. coli. Úspěchu bylo dosaženo v případě Clr-b a NKRP1B receptorů potkaních kmenů WAG i SD. Proteiny byly purifikovány za pomoci chelatační chromatografie následované gelovou filtrací, identifikovány hmotnostní spektrometrií a...
|
host ::
RSS.