| |
|
Úloha genu ATM u karcinomu prsu
Soukupová, Jana ; Pohlreich, Petr (vedoucí práce) ; Souček, Pavel (oponent) ; Foretová, Lenka (oponent)
Incidence zhoubných nádorů prsu má v České republice z dlouhodobého hlediska zvyšující se tendenci. Vývoj nádoru je výsledkem kumulace genových alterací. Postiženy jsou geny, které se podílejí na regulaci (pozitivní i negativní) buněčného růstu a dělení. Dědičné karcinomy představují asi 5-10% všech karcinomů prsu a jsou v 60-80% případů způsobeny dědičnou mutací v hlavních predispozičních genech BRCA1 a BRCA2. V patogenezi karcinomu prsu se uplatňují i další geny s nižší penetrancí, mezi něž je řazen také gen ATM. Jedná se o tumorsupresorový gen, jehož produkt je důležitý pro opravu dvouřetězcových zlomů DNA. Cílem této práce bylo zjistit frekvenci mutací v genu ATM u dědičného karcinomu prsu v naší populaci a dále určit, do jaké míry je tento gen alterován u sporadického karcinomu prsu. To zahrnovalo navržení a optimalizaci metod pro detekci mutací, analýzu výpadků alel a metylace promotorové oblasti genu ATM. Závěrem lze říci, že gen ATM má pravděpodobně význam při vzniku dědičného karcinomu prsu u minoritní části vysoce rizikových pacientek v naší populaci, ale četnost mutací je oproti BRCA1/2 významně nižší a vzhledem k velikosti genu v současné době preventivní screening tohoto genu neprovádíme. Máme zavedenu mutační analýza genu ATM a dosud jako jediní v ČR nabízíme molekulární diagnostiku pacientům...
|
|
Význam transportních proteinů a biotransformačních enzymů pro ochrannou funkci placenty
Vacková, Zuzana ; Štaud, František (vedoucí práce) ; Trejtnar, František (oponent) ; Mičuda, Stanislav (oponent)
SOUHRN Souhrn Placenta je jedinečný orgán zajišťující řadu vitálních funkcí, které jsou nezbytné pro správný průběh těhotenství a vývoj jedince. Vedle hlavní funkce přísunu živin, odvodu zplodin metabolismu a výměny plynů plní placenta také úlohu endokrinní, metabolickou a především ochrannou. Placenta je považována za jednu z fyziologických bariér organismu, která zásadním způsobem reguluje transport endogenních i exogenních látek mezi dvěma kompartmenty - krevním oběhem matky a plodu. Do nedávné doby se předpokládalo, že placentární bariéru tvoří především buněčné vrstvy oddělující krev matky a plodu - syncytiotrofoblast a endotel fetálních kapilár. V současné době se však stále více ukazuje, že vedle této mechanické složky se na placentární bariéře podílí i složka aktivní, realizovaná činností efluxních transportérů a biotransformačních enzymů lokalizovaných ve vrstvě syncytiotrofoblastu. Efluxní transportéry jsou membránové proteiny, které aktivně (za spotřeby ATP) "pumpují" širokou škálu substrátů ven z buňky. Kinetiku transportu látek přes placentu ovlivňují zásadním způsobem především dva transportéry: P-glykoprotein (P-gp) a "breast cancer resistant protein" (BCRP). Oproti transportérům tvoří biotransformace látek v placentě pravděpodobně minoritní, avšak nezanedbatelnou složku aktivní bariéry....
|
|
Antibodies against sand flies saliva in domestic animals from endemic areas of visceral leishmaniasis
Košťálová, Tatiana ; Volf, Petr (vedoucí práce) ; Kopecký, Jan (oponent)
Hlavným cieľom tejto práce bolo testovať séra domácich zvierat z endemických oblastí viscerálnej leishmaniózy v severnej a severozápadnej Etiópii na prítomnosť protilátok proti slinným žľazám predpokladaného vektora P. orientalis a tak objasniť správanie tohto flebotoma a úlohu domácich zvierat v prenose viscerálnej leishmaniózy. Špecifické IgG protilátky proti slinám P. orientalis boli testované u psov, hovädzieho dobytka, kôz, oviec a somárov. Cut-off hodnotu u psov presahovalo 76 % vzoriek, u hovädzieho dobytka 15 %, u kôz 26 %, u oviec 60 % a u somárov 45 % vzoriek. V porovnaní s kontrolnými sérami boli signifikantne vyššie hladiny protilátok proti slinám P. orientalis u etiópskych sér pozorované u psov, hovädzieho dobytka, kôz, oviec a somárov. V prípade kráv, kôz a somárov boli ale hladiny cut-off neobvykle vysoké a je preto otázne nakoľko sú získané výsledky relevantné. U psov boli tiež merané anti-P. orientalis IgG2 protilátky, u 88 % etiópskych sér sme pozorovali signifikantne vyššie hladiny IgG2 v porovnaní s kontrolnými sérami. Ďalším cieľom bolo zistiť pomocou imunoblotingu, či etiópske psie séra s anti-P. orientalis protilátkami reagujú s proteínmi slinných žliaz iného krvsajúceho hmyzu. V slinách flebotoma Sergentomyia schwetzi s častým dominantným zastúpením v Etiópii psy...
|
|
The Role of Gut Microbiota and Lipopolysachaide Content of the Diet in the Development, Maturation and Function of the Immune System
Hrnčíř, Tomáš ; Tlaskalová - Hogenová, Helena (vedoucí práce) ; Prokešová, Ludmila (oponent) ; Macela, Aleš (oponent)
Savci se rodí bezmikrobní, avšak rychle po porodu jsou jejich epitelové povrchy osídleny obrovským množstvím baktérií. Nejrozsáhlejší společenství mikrobů se nachází v distálním střevě. Střevní mikroorganismy svým počtem desetkrát převyšují naše somatické a zárodečné buňky. Vztah mezi hostitelem a mikroorganismy se vyvinul tak, že obě strany z něj profitují. Studie na bezmikrobních myších prokázaly, že střevní mikroorganismy jsou nezbytné pro řádný vývoj imunitního systému. Klíčový význam přirozené imunity při komplexních a dynamických interakcích hostitele a mikroorganismů je stále patrnější. Hlavními cíli této studie bylo: zaprvé, zjistit, zda sterilní dieta s vysokým obsahem lipopolysacharidu může podpořit vývoj imunitního systému u bezmikrobních myší, zadruhé, objasnit, zda střevní mikroorganismy a dieta s vysokým obsahem lipopolysacharidu ovlivňují citlivost k endotoxinovému šoku, a konečně, zhodnotit roli adaptivní imunity při jeho patogenezi. Provedené experimenty jasně dokazují, že jak živé střevní mikroorganismy, tak také sterilní dieta s vysokým obsahem lipopolysacharidu zvyšují citlivost k endotoxinovému šoku. Též bylo prokázáno, že imunodeficitní SCID myši, které postrádají zralé B a T lymfocyty, jsou citlivější k endotoxinovému šoku než imunokompetentní Balb/c myši. Tato studie potvrzuje naši...
|
|
Parallel single-cell analysis of active caspase-3/7 in apoptotic and non-apoptotic cells
Ledvina, Vojtěch ; Klepárník, Karel
Caspases are proteases that play key role in the process of apoptosis, the programmed\ncell death. Among them, caspase-3 and -7 are main executioner caspases that cleave\nmany vital proteins during apoptosis and after their widespread activation, the process\ncannot be reversed. To analyze caspase-3/7 activation within single cells, a miniaturized\ndevice for parallel analysis of eight samples was developed. The assay is based on the\nmodified luciferin-firefly luciferase bioluminescence (BL) system. Individual\nsuspended cells were collected and transferred into detection microvials using a\nmicromanipulator. The bioluminescence was detected using a photon counting head\nwith cooled photcathode. The LOD suitable for detection of active caspase-3/7 in both\napoptotic and non-apoptotic cells was reached.
|
|
Studium složení a organizace enzymového systému cytochromu P450 technikou kovalentního síťování
Koberová, Monika ; Hodek, Petr (vedoucí práce) ; Hansíková, Hana (oponent)
Systém oxygenas se smíšenou funkcí (MFO systém) se významnou rolí podílí na metabolismu endogenních sloučenin i xenobiotik. Tento systém obsahuje cytochrom P450, NADPH:cytochrom P450 reduktasu a také jsou k němu přiřazovány NADH:cytochrom b5 reduktasa a cytochrom b5. Bylo prokázáno, že cytochrom b5 může stimulovat nebo inhibovat reakce katalyzované cytochromy P450, a dokonce může měnit poměr vzniklých metabolitů. Mechanismus působení cytochromu b5 nebyl dosud zcela objasněn. Zjištění protein-proteinových interakcí v MFO systému a určení topologie tohoto systému by mohlo pomoci k objasnění mechanismu působení cytochromu b5. Vhodnou metodou pro identifikaci protein-proteinových interakcí uvnitř membrány je technika kovalentního síťování. Cytochrom b5 obsahuje 3 methioniny, z čehož jsou 2 lokalizovány v C-terminální membránové kotvě. Po záměně těchto dvou methioninů za fotoaktivovatelný analog methioninu (foto-methionin) a následné fotoaktivaci lze určit interakce s cytochromem P450 v membránovém prostředí. Tato práce se zabývá expresí a izolací foto-cytochromu b5 (foto-cyt b5), analogu cytochromu b5 s inkorporovaným foto-methioninem. Podmínky pro inkorporaci foto- methioninu do cytochromu b5 byly optimalizovány a protein byl purifikován s výtěžkem 7,2 mg z 1 l bakteriální suspenze. Izolovaný foto-cyt...
|
|
The effect of tick salivary proteins on innate immunity cells
PÁLENÍKOVÁ, Jana
Saliva of Ixodid ticks contains a whole array of pharmacologically active molecules with vasodilatory, antihemostatic, and immunomodulatory activities. This thesis focuses on two types of salivary proteins, serpins and cystatins, and their role in immunomodulation. These protease inhibitors are known to affect many biological functions. To better understand their role in tick saliva we examined their effect on dendritic cells and their ability to modulate the immune response after pathogen infection. As model pathogens, Borrelia spirochetes and tick-borne encephalitis virus were used.
|
|
Tuková tkáň jako endokrinní orgán: význam při vzniku a rozvoji inzulínové rezistence diabetu
Haluzík, Michal ; Schreiber, Vratislav (vedoucí práce) ; Marešová, Dana (oponent) ; Šeda, Ondřej (oponent)
Endokrinní produkce tukové tkáně je velmi komplexní proces reagující na řadu endogenních i exogenních vlivů. Jedním z důležitých modulátorů, u kterých se předpokládá komplexní působení včetně možného ovlivnění endokrinní funkce tukové tkáně jsou aktivátory receptorů PPAR-. V poslední době byla navíc objevena i řada nových faktorů produkovaných adipocyty, z nichž některé mají schopnost přímé vazby s PPAR. Příkladem takovéhoto faktoru je fatty acid binding protein 4 (FABP4), který kromě vazby s PPAR může jejich aktivaci ovlivňovat i nepřímo modulací dostupnosti jejich endogenních ligandů - volných mastných kyselin. Bližší objasnění těchto vztahů může být velmi důležité pro hledání nových preventivních a/nebo terapeutických postupů u pacientů s diabetes mellitus 2. typu. (...) Celkově výsledky práce ukázaly významný podíl endokrinní funkce tukové tkáně na metabolických regulacích a významnou modulační úlohu PPAR receptorů v těchto procesech.
|
|
Role of Psb28 proteins in the biogenesis of the Photosystem II complex in the cyanobacterium Synechocystis sp. PCC 6803
BEČKOVÁ, Martina
The thesis focuses on the role of Psb28 proteins, namely the Psb28-1 and its homolog Psb28-2, in the biogenesis of the Photosystem II complex (PSII) in the cyanobacterium Synechocystis PCC 6803. The aims of this work were to localize the proteins within the cells, and to determine their function. A fraction of both Psb28 proteins was identified in the monomeric PSII core complexes but most proteins were found in the unassembled protein fraction associated with thylakoid membranes. Psb28-1 was mostly detected as a dimer while Psb28-2 as a monomer. Psb28-1 also differed from Psb28-2 by its higher affinity to the PSII core complex lacking CP43 antenna. Characterization of Psb28-less mutants suggested regulatory function of the proteins in PSII biogenesis in connection with chlorophyll biosynthetic pathway. Analysis of preparations isolated using FLAG-tagged versions of Psb28 proteins showed their association with Photosystem II - Photosystem I supercomplexes, especially under increased irradiance, and supported a role of Photosystem I in the PSII biogenesis.
|
host ::
