|
|
Zavedení metody MST pro studium interakcí mezi biomolekulami
Krátký, Josef ; Szotáková, Barbora (vedoucí práce) ; Boušová, Iva (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Bc. Josef Krátký Školitel: prof. Ing. Barbora Szotáková, Ph.D. Název diplomové práce: Zavedení metody MST pro studium interakcí mezi biomolekulami Termoforéza v mikroměřítku (MST) je v současné době uznávanou metodou při studiu interakcí mezi biomolekulami, pomocí usměrněného pohybu biomolekul v teplotním gradientu je možné analyzovat prakticky jakékoliv interakce, kde dochází ke změně vlastností analytů. Tato práce byla zaměřena na zavedení metody pro studium interakcí proteinů s nízkomolekulárními látkami se zaměřením na ověření možnosti využití MST pro sledování interakce glutathion-S-transferasy (GST) s vybranými terpeny ((-)-fenchon, (-)-isopulegol, (+)-isomenthon, (-)-karvon, (+)-karvon, piperiton a thujon). Dalším cílem bylo stanovení vlastností terpenů pomocí klasických spektrofluorimetrických metod a MST. V práci bylo zjištěno spektrofluorimetrickými metodami, že terpeny ovlivňují fluorescenční spektra pro lidský sérový albumin a že neovlivňují fluorescenční spektrum pro barvivo NHS, které je využíváno pro přípravu vzorků pro MST. Dále byla v práci stanovena aktivita GST a bylo studováno její ovlivnění pomocí monoterpenů. GST po přidání terpenů vykazuje nižší aktivu. Metodou MST pak bylo zjištěno,...
|
|
|
Vliv vybraných monocyklických monoterpenů na aktivitu a expresi antioxidačních enzymů v lidských játrech
Fišerová, Romana ; Boušová, Iva (vedoucí práce) ; Skálová, Lenka (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Uchazečka: Romana Fišerová Školitelka: doc. PharmDr. Iva Boušová, Ph.D. Název diplomové práce: Vliv vybraných monocyklických monoterpenů na aktivitu a expresi antioxidačních enzymů v lidských játrech Monocyklické monoterpeny patří mezi sekundární metabolity rostlin, které jsou charakteristické svou vůní a mají široké využití. Přitahují opylovače rostlin, uplatňují se v rostlinné komunikaci, v kosmetickém nebo potravinářském průmyslu. Jsou složkami koření, nápojů a potravin. U některých byla prokázána protinádorová aktivita, avšak neměli bychom zapomínat, že některé mají toxické účinky v různých orgánech lidského organismu, především v játrech. Cílem této diplomové práce bylo zjistit, jaký mají účinek (+)-karvon, (-)-karvon, (+)- isomenthon, (-)-isopulegol a piperiton na aktivitu a expresi mRNA antioxidačních enzymů v lidských játrech. Jaterní tkáň získaná od pacientů obou pohlaví ve věku 50 až 80 let byla použita jako biologický materiál. Nejprve byl hodnocen účinek vybraných monoterpenů (100 µM) na aktivitu enzymů glutathionreduktasy (GR), glutathionperoxidasy (GPx), katalasy (CAT) a glutathion-S-transferasy (GST) v subcelulárních frakcích získaných z lidské jaterní tkáně šesti dobrovolníků. V této části...
|
|
|
Vliv polyfenonu na vybrané biotransformační enzymy u myší
Skorkovská, Jana ; Skálová, Lenka (vedoucí práce) ; Boušová, Iva (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Jana Skorkovská Školitel: Prof. RNDr. Lenka Skálová, Ph.D. Název diplomové práce: Vliv polyfenonu na vybrané biotransformační enzymy u myší Zelený čaj se ve světě užívá již dlouhá století. Mezi hlavní látky v zeleném čaji patří polyfenolové sloučeniny, například katechiny. V poslední době jsou intenzivně studovány možné pozitivní účinky zeleného čaje a jeho obsahových látek na organismus. Mezi tyto účinky patří i možné snížení obezity a patologických stavů souvisejících s obezitou. Cílem této diplomové práce bylo studovat vliv podávání extraktu ze zeleného čaje (polyfenonu) na aktivitu a expresi vybraných biotransformačních enzymů u normálních a obézních myší. Měření byla provedena v subcelulárních frakcích homogenátu jater a tenkého střeva myších samců. Z 8 experimentálních skupin byly dvě skupiny kontrolní (skupina normálních a obézních myší bez podávání polyfenonu). Třem skupinám normálních myší a třem skupinám obézních myší by podáván polyfenon v krmivu v délce 3 nebo 28 dní ve dvou rozdílných koncentracích (0,1 a 0,01 %). Výsledky ukázaly, že třídenní podávání polyfenonu (v koncentraci 0,1 % v dietě) signifikantně zvýšilo aktivitu enzymu AKR1C u obézních myší. Polyfenon podávaný 28 dní v...
|
|
|
Biological activity of antioxidant compounds in monocytes THP-1
Hájek, Jan ; Boušová, Iva (vedoucí práce) ; Szotáková, Barbora (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Univezita Roma Tre Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biologie Katedra biochemických věd Kandidát: Jan Hájek Školitel: PharmDr. Iva Boušová, PhD. Prof. Sandra Incerpi, Prof. Jens Z. Pedersen Název diplomové práce: Biologická aktivita antioxidačních látek v monocytech THP-1 Tato práce byla vytvořena na základě pokusů provedených v Laboratoři fyziologie na Univerzitě Roma Tre v Římě pod vedením prof. Sandry Incerpi. Tým laboratoře se zabývá studiem antioxidantů s různou strukturou a hodnocením jejich schopnosti zabránit tvorbě reaktivních forem kyslíku (ROS). Tyto reaktivní sloučeniny jsou nezbytné v mnoha fyziologických pochodech, ale mohou mít také škodlivé účinky a podílet se na rozvoji rozličných onemocnění. V této práci jsem se zabýval studiem antioxidačních vlastností různých polyfenolických látek (mosloflavon, negletein, 5,6-dihydroxyflavon, bajkalein, kyselina galová a sloučenina 1625) v buněčné kultuře lidských monocytů THP-1 a také v in vitro testu. Použil jsem tři různé metody: stanovení intracelulárních ROS (dichlorofluoresceinový test), test cytotoxicity a elektronovou paramagnetickou rezonanční spektroskopii (EPR). Mosloflavon neukázal žádnou vychytávací aktivitu ani v buněčné linii ani během EPR. Naproti tomu negletein měl dobrou vychytávací...
|
|
|
Modifikace vybraných biotransformačních enzymů v průběhu stárnutí (u potkana)
Vyskočilová, Erika ; Boušová, Iva (vedoucí práce) ; Svobodová, Hana (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Erika Vyskočilová Školitel: PharmDr. Iva Boušová, Ph.D. Název diplomové práce: MODIFIKACE VYBRANÝCH BIOTRANSFORMAČNÍCH ENZYMŮ V PRŮBĚHU STÁRNUTÍ (U POTKANA) Stárnutí je nezastavitelný biologický proces charakterizovaný progresivním útlumem funkce orgánových systémů a současným nárůstem oxidačního poškození v důsledku kumulace reaktivních forem kyslíku (ROS). Zvýšená aktivita antioxidačních enzymů, například peroxidasy a katalasy, v průběhu stárnutí tedy souvisí se zvýšenou produkcí ROS. Aktivita biotransformačních enzymů například cytochromu P450 (CYP) a glutathion-S-transferasy (GST) se také v průběhu stárnutí mění. Zpravidla, u velmi mladých a velmi starých jedinců je aktivita nižší než v období dospělosti. Cílem práce bylo sledovat změny v aktivitě a expresi vybraných jaterních biotransformačních (GST, CYP 1A, 2B, 3A4) a antioxidačních (peroxidasa, katalasa, superoxiddismutasa) enzymů u potkanů v souvislosti s věkem. Potkaní samci kmene Wistar byli utraceni dekapitací v celkové anestezii ve věku 6 týdnů a 21 měsíců (6 jedinců v každé skupině). Následně byla jejich játra zpracována na subcelulární frakce (mikrosomy a cytosol), v nichž byly spektrofluorimetricky a spektrofotometricky stanoveny...
|
|
|
Analýza argininu a jeho methylovaných derivátů v klinických vzorcích pomocí LC-MS/MS
Prokop, Pavel ; Boušová, Iva (vedoucí práce) ; Raisová Stuchlíková, Lucie (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Uchazeč: Bc. Pavel Prokop, DiS. Školitel: doc. PharmDr. Iva Boušová, Ph.D. Název diplomové práce: Analýza argininu a jeho methylovaných derivátů v klinických vzorcích metodou LC-MS/MS Asymetrický dimethylarginin (ADMA) a jeho enantiomer, symetrický dimethylarginin (SDMA), jsou přirozeně se vyskytující aminokyseliny, které vznikají intracelulárně z L-argininu. ADMA je endogenním kompetitivním inhibitorem synthasy oxidu dusnatého. Zvýšené hladiny ADMA a SDMA jsou spojovány s endoteliální dysfunkcí, hypertenzí, kardiovaskulárními a renálními onemocněními. Obě látky se u pacientů s chronickým renálním onemocněním (CKD) hromadí. Cílem této diplomové práce bylo zavedení a validace metody na stanovení L-argininu, ADMA a SDMA v lidské plazmě pomocí ultravysokoúčinné kapalinové chromatografie ve spojení s tandemovou hmotnostní spektrometrií (LC-MS/MS). LC-MS/MS metoda byla následně porovnána s enzymovou imunoanalýzou na imunosorbentech (ELISA) a metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie s fluorescenční detekcí (HPLC-FL). Chromatografická separace probíhala za použití kapalinového chromatografu Dionex UltiMate 3000 UHPLC, následovala hmotnostní detekce na hmotnostním spektrometru amaZon SL. Jako interní standardy byly...
|
|
|
Výběr a validace referenčních genů pro relativní kvantifikaci mRNA v lidských jaterních řezech
Studenovská, Petra ; Boušová, Iva (vedoucí práce) ; Matoušková, Petra (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Bc. Petra Studenovská Školitel: doc. PharmDr. Boušová Iva, Ph.D. Název diplomové práce: Výběr a validace referenčních genů pro relativní kvantifikaci mRNA v lidských jaterních řezech Použití ultratenkých jaterních řezů je často využívaným in vitro systém při biochemických, farmakologických a toxikologických studiích. Důvodem je zejména zachování buněčné architektury tkáně, a tedy i jejích funkcí. Cílem diplomové práce byl výběr a validace referenčních genů pro relativní kvantifikaci mRNA v lidských jaterních řezech. Jako vzorky byla použita jaterní tkán od 3 pacientů s různým věkem, diagnózou a farmakoterapií. Ze vzorků jater byly připraveny jaterní řezy, které byly vystaveny působení dimethylsulfoxidu (kontrola) nebo známým induktorům cytochromu P450, rifampicinu (10 µM) a β-naftoflavonu (10 µM). Následně byla ověřena stabilita exprese referenčních genů pomocí programu RefFinder, který integruje programy geNorm, BestKeeper, NormFinder a komparativní ΔCT metodu. Optimální počet referenčních genů, které by měly být použity k relativnímu hodnocení genové exprese cílových genů, byl zjištěn pomocí programu geNorm. Nejvhodnější kombinací genů pro normalizaci exprese sledovaných genů byla dvojice YWHAZ a B2M....
|
|
|
Interakce antiretrovirálních léčiv s membránovými transportéry
Martinec, Ondřej ; Červený, Lukáš (vedoucí práce) ; Boušová, Iva (oponent) ; Chládek, Jaroslav (oponent)
Univerzita Kalova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Kandidát: Mgr. Ondřej Martinec Školitel: doc. PharmDr. Lukáš Červený, Ph.D. Název disertační práce: Interakce antiretrovirálních léčiv s membránovými transportéry Perorální podávání léčiv je nejběžnější, nejpohodlnější a nejekonomičtější formou aplikace léčiv. Absorpce perorálně podaných léčiv probíhá zejména ve střevě. Jedním z faktorů ovlivňujících střevní absorpci jsou efluxní lékové ABC transportéry lokalizované na apikální membráně střevního epitelu, přičemž dosud nedůležitější se zdá být p-glykoprotein (ABCB1) a breast cancer resistance protein (ABCG2). Pacienti infikovaní HIV jsou odkázáni na celoživotní farmakoterapii, zahrnující kombinaci tří a více antiretrovirotik. Častou ko-infekcí HIV je hepatitida C (HCV). Díky postupnému stárnutí je navíc HIV pozitivní populace zatížena i dalšími komorbiditami. To vše vede u těchto pacientů k nutnosti indikace polyfarmakoterapie, a tedy zvýšenému riziku lékových interakcí. Řada užívaných antiretrovirotik je substrátem, inhibitorem a/nebo induktorem ABCB1. Proto lze předpokládat, že budou kvantitativně ovlivňovat střevní absorpci současně podaných léčiv (substrátů ABCB1), a tím přispívat k efektivitě/bezpečnosti léčby. V rámci řešení disertační práce jsme se...
|
|
|
Silice řečíku lentišku: in vitro stanovení cytotoxicity a protizánětlivé aktivity
Elstnerová, Marie ; Szotáková, Barbora (vedoucí práce) ; Boušová, Iva (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Marie Elstnerová Školitel: prof. Ing. Barbora Szotáková, Ph.D. Název diplomové práce: Silice řečíku lentišku: in vitro stanovení cytotoxicity a protizánětlivé aktivity Cílem mé práce, která byla zahájena ve spolupráci s University of Sassari (Itálie), bylo zjistit více o biologické aktivitě silice řečíku lentišku (Pistacia lentiscus) a přispět tak k rozhodnutí, zda může být silice této rostliny použita v ústních hygienických přípravcích, konkrétně v ústních vodách. Silice byla získána z listů divoce rostoucích rostlin severní Sardinie. Cytotoxicita a protizánětlivá aktivita nebyly testovány pouze u čisté silice, ale i u silice ve formulaci nanoemulzí (použitými emulgátory byly lecitin a Tween 80) a u dvou nejvíce zastoupených terpenů (−)-α-pinenu a (−)-terpinen-4-olu. Cytotoxicita silice byla měřena kolorimetrickým testem s použitím tetrazoliové soli WST-1 na čtyřech ústních buněčných liniích (gingiválních fibroblastech, periodontálních ligamentových fibroblastech, dysplastických orálních keratinocytech a primárních gingiválních keratinocytech). Životaschopnost lidských orálních buněk byla nejvíce snížena lecitinovou nanoemulzí, čistá silice měla na viabilitu vliv nejmenší. Protizánětlivá aktivita byla...
|
|
|
In vitro effects of 3-hydroxytyrosol on renal hypoxia and inflammation
Kamasová, Terézia ; Boušová, Iva (vedoucí práce) ; Macháček, Miloslav (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických vied Kandidát: Terézia Kamasová Školitel: Doc. PharmDr. Iva Boušová, Ph.D. Prof. Alice Santos-Silva Maria João Valente, Ph.D. Názov diplomovej práce: Účinky 3-hydroxytyrosolu na renální hypoxii a zánět in vitro Chronické zlyhanie obličiek je spôsobené heterogénnou skupinou ochorení postihujúcich obličky. Renálna hypoxia a hypoxiou-vyvolaný oxidatívny stres, renálna fibróza a zápal, sú veľmi častými sprievodnými javmi v postihnutej obličke, prispievajúcimi k zhoršovaniu chronického zlyhania obličiek. Látky rastlinného pôvodu sú neoddeliteľnou súčasťou modernej medicíny v terapií rôznych ochorení. 3-Hydroxytyrosol, fenolická zlúčenina získaná extrakciou z olív a olivových produktov ako napríklad olivový olej, je nositeľom silnej antioxidačnej, protizápalovej, antitrombotickej, baktericídnej a baktériostatickej aktivity. Cieľom tejto práce bolo stanoviť preventívny efekt 3-hydroxytyrosolu v renálnych bunkách a určiť jeho efekt na hypoxiou-vyvolaný zápal, oxidatívny stres a renálnu fibrózu a tak zhrnúť prínos tejto fenolickej zlúčeniny ako sľubného moderného terapeutického prístupu v liečbe chronického zlyhania obličiek. Na skúmanie efektu chemicky-indukovanej hypoxie a hypoxiou vyvolaného zápalu, oxidatívneho stresu,...
|
host ::
RSS.