| |
|
Účinek parciálních agonistů 5HT1A receptorů na kognitivní funkce v animálním modelu schizofrenii podobného chování
Antošová, Eliška ; Valeš, Karel (vedoucí práce) ; Telenský, Petr (oponent)
Serotonin je neurotransmiter podílející se na regulaci mnoha fyziologických funkcí. Hlavní serotoninergní neurony se vyskytují v rafeálních jádrech mozkového kmene. Rafeální jádra inervují mnoho oblastí mozku včetně mozkové kůry a hipokampu. Tyto struktury jsou důležité pro řízení vyšších kognitivních funkcí. 5HT1A receptor je jedním z mnoha podtypů serotoninových receptorů a jeho aktivací dochází k inhibici vzniku akčních potenciálů. 5HT1A receptor je exprimován presynapticky jako autoreceptor v rafeálních jádrech. Aktivací 5HT1A autoreceptorů dochází ke sníženému výdeji serotoninu v cílových strukturách. Tato klíčová pozice mu tak umožňuje regulovat hladinu serotoninu v mozku. 5HT1A receptor se také vyskytuje postsynapticky jako heteroreceptor v hipokampu a mozkové kůře, kde ovlivňuje výlev mnoha dalších neurotransmiterů. Experimentální studie naznačují, že ovlivněním funkce 5HT1A receptoru může dojít ke zlepšení řady neuropsychiatrických onemocnění například schizofrenie, úzkosti a deprese, a také ke zmírnění kognitivního deficitu. Předpokládá se, že aktivace 5HT1A autoreceptorů a inhibice 5HT1A heteroreceptorů může vést k pozitivnímu ovlivnění kognitivních schopností. Zdá se, že presynaptické 5HT1A autoreceptory jsou citlivější k farmakologickému ovlivnění než postsynaptické 5HT1A heteroreceptory. Proto...
|
|
Dual role of CD9 protein in mast cell activation
Machyna, Martin ; Dráber, Petr (vedoucí práce) ; Černý, Jan (oponent)
Žírne bunky sú známe efektorové bunky imunitného systemu. Ich účasť bola preukázaná v takých dôležitých procesoch ako sú obrana hostiteľa pred baktériami, toxínmi alebo parazitmi. Niekedy však môžu vytvárať neprimeranú reakciu proti neškodným antigénom v našom prostredí a spôsobovať tak alergie. Je práve preto vrcholne dôležité pochopiť signálne deje, ktoré vedú k aktivácii týchto buniek, za účelom vyvýjania nových stratégii liečby. Novovytvorená potkania monoklonálna protilátka izotypu IgG1, špecifická proti myším žírnym bunkám, bola charakterizovaná ako vhodná pre použitie v prietokovej cytometrii, imunoznačení a imunoprecipitácii. Použitie optimalizovaného postupu imunoizolácie v spojení s hmotnostnou spektrometriou umožnilo identifikovať CD9 ako jej cieľový proteín. CD9 je členom rozsiahlej rodiny nazývanej "tetraspanins". Funkčné štúdie ukázali, že väzba tejto protilátky na žírne bunky spôsobila degranuláciu a aktiváciu včasných dejov ako sú zvýšená tyrozínová fosforylácia a zvýšená hladina voľného cytoplazmatického vápnika. Prekvapivé bolo zistenie že, následná aktivácia týchto buniek cez agregáciu FcεRI receptoru pomocou antigénu viedla naopak ku zníženej degranulácii, vápnikovej odpovedi a tyrozínovej fosforylácii niekoľkých substrátov. Anti-CD9 protilátka však neinhibovala tieto bunkové odpovede,...
|
|
Vliv aktivace žírných buněk na organizaci mikrotubulů
Hájková, Zuzana ; Dráber, Pavel (vedoucí práce) ; Binarová, Pavla (oponent)
Aktivace žírných buněk kostní dřeně (bone marrow-derived mast cells, BMMC) zahajuje řadu buněčných procesů, jako je uvolnění obsahu intracelulárních váčků, proliferace buňky nebo reorganizace cytoskeletu. Ačkoliv mikrotubuly hrají v těchto procesech důležitou roli, molekulární mechanismy kontrolující změny v organizaci mikrotubulů během aktivačních dějů jsou neznámé. BMMC mohou být aktivovány několika způsoby. Za fyziologických podmínek způsobuje agregace IgE receptorů (FcRI) na povrchu buněk aktivaci specifických signálních drah. BMMC mohou být také aktivovány nespecificky pervanadátem, inhibitorem tyrosinových fosfatáz, nebo thapsigarginem, inhibitorem Ca2+ ATPáz na endoplazmatickém retikulu. V rámci této diplomové práce bylo zjištěno, že pro sledování rychlých morfologických změn, při aktivaci žírných buněk, je vhodné BMMC před aktivací imobilizovat na fibronektin. Bylo prokázáno, že specifická i nespecifická aktivace BMMC vede k reorganizaci mikrotubulů a k tvorbě mikrotubulárních výběžků. Tvorba mikrotubulárních výběžků je za fyziologické aktivace závislá na aktivitě protein tyrosinových kináz Src rodiny a na vnitrobuněčné koncentraci Ca2+. Důležitou roli v tomto procesu hraje protein STIM1, detektor Ca2+ koncentrace v endoplazmatickém retikulu, který se podílí na aktivaci Ca2+ kanálů v plazmatické...
|
|
Studium mechanismu účinku protinádorového léčiva tamoxifenu a jeho vedlejších toxických účinků
Kylarová, Salome ; Stiborová, Marie (vedoucí práce) ; Moserová, Michaela (oponent)
Antiestrogenní (hormonální) terapie je užívána při léčbě nádoru prsu s pozitivním nálezem hormonálních receptorů pro estrogen. Vznik tohoto typu rakoviny je důsledkem dlouhodobé hormonální expozice v průběhu života. Tamoxifen patří mezi nejdůležitější zástupce hormonálních léčiv, které blokují účinky těchto hormonů v prsní nádorové tkáni prostřednictvím kompetitivní vazby na odpovídající receptory. Afinita tamoxifenu k těmto receptorům není dostatečná, avšak v organismu dochází k jeho aktivaci na metabolity, které vykazují afinitu o poznání větší, jmenovitě 4-hydroxytamoxifen a endoxifen. Tvorbu těchto meziproduktů katalyzují enzymy ze skupiny cytochromů P450. Ve druhé fázi jeho biotransformace dochází především k sulfataci těchto produktů katalyzovanou sulfotransferasami a jeho eliminaci z organismu. Vedle těchto aktivních meziproduktů, které svými účinky potlačují další růst nádoru, existují i produkty metabolismu tamoxifenu působící negativně v jiných tkáních organismu. Jedná se především o α-hydroxytamoxifen, který po další aktivaci generuje kovalentní adukty s DNA v jaterní tkáni potkanů a endometriu ženské dělohy. Léčba tamoxifenem je doprovázena četnými vedlejšími účinky, z nichž největší pozornost je věnována možnému vývoji rakoviny endometria či rezistenci nádoru vůči léčbě. Účinky terapie...
|
|
Mechanismy vývoje krevních cév v žaberní oblasti
Kolesová, Hana ; Grim, Miloš (vedoucí práce) ; Slípka, Jaroslav (oponent) ; Nečas, Emanuel (oponent)
Žabgní oblast a její cévy prochází v embryonálním vývoji rozsáhlou přestavbou, ktérá odráží také její fylogenetický vývoj. Studovali jsme mechanismy vývoje žaberní oblasti, abychom zjistili, jak se známý morfogen Sonic hedgehog (Shh) podílí na formování a přestavbě této oblasti a jejích cév. Význam Shh pro vývoj žaberní oblasti jsme posuzovali podle změn, které vyvolala jeho inhibice. Funkci Shh jsme u ptačích embryí krátkodobě inhibovali pomocí anti-Shh protilátky produkované do embrya in vivo hybridomovými buňkami 5E1; dále jsme Shh signální kaskádu inhibovali pomocí cyclopaminu. Výsledky ukazují, že Shh je nutný pro tvorbu de novo vznikajících cév v oblasti žaberních oblouků; dále také pro stabilitu cévní stěny, hlavně u vena cardinalis anterior. Shh ovlivňuje i další vývoj a přestavbu cév, jakou je například fůze aorta dorsalis, větvení arteria carotis interna a vývoj výtokového traktu srdečního. Shh nemá při krátkodobé inhibici vliv na proliferační aktivitu a apoptózu v mesenchymu žaberní oblasti. Domníváme se, že Shh ovlivňuje endotel krevních cév přímo, protože jeho receptor ptcl je exprimován v endotelových buňkách a při inhibici Shh exprese ptcl klesá. Zjistili jsme, že Shh neovlivňuje distribuci hladkých svalových buněk ve stěně cév a neovlivňuje ani expresi receptoru růstového faktoru krevních...
|
|
Cytotoxicity of new taxol derivatives in selected tumor cell lines
Némethová, Ingrid ; Skálová, Lenka (vedoucí práce) ; Kvasničková, Eva (oponent)
Univerzita Karlova v Prahe Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických vied Kandidát: Ingrid Némethová Školiteľ: Doc. RNDr. Lenka Skálová, Ph.D. Názov diplomovej práce: Cytotoxicita nových derivátov taxolu vo vybraných nádorových bunkových líniách. Paclitaxel (Taxol, PTX) je prírodný produkt s antitumorovu aktivitou, využívaný v terapii rôznych druhov solídnych nádorov, predovšetkým prsníkov a vaječníkov. Patrí k tzv. mitotickým jedom, ktoré spôsobujú zastavenie bunkového cyklu a apoptózu bunky, zásahom do dynamiky mikrotubulov. Cieľom tejto práce bolo porovnanie antiproliferatívneho účinku PTX a jeho derivátov, ktoré boli pripravené v ÚEB AVČR konjugáciou s peptidovými agonistami receptoru pre hormón uvolňující gonadotropíny (GnRH), v rámci cielenej protinádorovej terapie. Pre experiment bola zvolená bunková línia MCF-7, ktorá je odvodená z prsného adenokarcinómu a má receptory pre GnRH. Výsledky boli hodnotené dvoma rozdielnymi metódami (NRU, MTT). Zo šiestich testovaných látok vykazoval najsignifikantnejší antiproliferatívny efekt derivát MP 265. Pri použití ostatných látok nastával výraznejší pokles životnosti buniek v porovnaní s PTX až pri vyšších koncentráciách.
|
|
Možnosti preemptivní analgézie a zvýšení účinnosti analgetik neurofarmaky
Slíva, Jiří ; Kršiak, Miloslav (vedoucí práce) ; Geršl, Vladimír (oponent) ; Kozák, Jiří (oponent)
Cíle dizertační práce: 1. Přes rozsáhlý preklinický i klinický výzkum nebyla dosud možnost preemtivní analgezie definitivně potvrzena ani vyvrácena. V této souvislosti se nám jevily jako zajímavé a podnětné poznatky o analgetickém působení některých antiepileptik za specifických okolností. Cílem našeho výzkumu proto bylo zjistit zda nové a klinicky již úspěšně používané antikonvulzivum levetiracetam má preemptivní nebo i terapeutické účinky v modelu pooperační bolesti u potkanů. 2. Výhodnost některých lékových kombinací byla již prokázána nejen u analgetik, ale i u mnoha dalších lékových skupin. Dříve bylo v naší laboratoři zjištěno, že guaifenesin zvyšuje analgetickou účinnost paracetamolu a kyseliny acetylsalicylové. Druhým cílem našeho výzkumu proto bylo zjistit zda guaifenesin zvyšuje analgetickou účinnost i u nesteroidních antiflogistik (NSA), a to s rozdílnou selektivitou vůči COX-2 (ibuprofen, nimesulid a celecoxib) v modelu viscerální bolesti u myší. Jelikož dříve bylo zjištěno, že guaifenesin zvyšuje absorpci paracetamolu, zjišťovali jsme, zda guaifenesin neovlivní také plazmatické hladiny jednoho z testovaných NSA, a to nimesulidu. 3. Rozsáhlý výzkum svědčí pro to, že aktivace endogenního kanabinoidního systému tlumí bolest. Třetím hlavním cílem našeho výzkumu proto bylo zjistit zda agonista...
|
|
Vliv Goeckermanovy terapie na vybrané parametry angiogeneze a zánětu u pacientů s psoriázou
Pohl, David ; Andrýs, Ctirad (vedoucí práce) ; Hernychová, Lenka (oponent) ; Petrisková, Jela (oponent)
Psoriáza je jedna z nejčastějších kožních nemocí, která postihuje okolo 2-3% evropské populace. Její hlavní klinický projev je tvorba charakteristických červených makulózních lézí na kůži. Klíčové patologické znaky psoriatického plaku jsou infiltrace buňkami zánětu, poruchy proliferace a maturace keratinocytů a angiogeneze. Současné strategie léčby psoriázy se soustředí na navození remise. Jeden z historicky nejstarších, účinných, ačkoliv dodnes pouze empirických léčebných přístupů je Goeckermanova terapie (GT). Ta spočívá v kombinaci topické aplikace uhelného dehtu s následným ozářením UV světlem. Cílem této práce bylo zkoumat vliv GT na různé ukazatele zánětu a angiogeneze a tak pomoci rozšířit a prohloubit poznatky o jejích mechanismech účinku a terapeutických terčích. Pro monitorování zánětu byly vybrány pentraxiny CRP a PTX3, jako ukazatele angiogeneze pak VEGF, bFGF a endoglin (CD105). Nemocní a metodiky: Klinická část práce probíhala na Klinice nemocí kožních a pohlavních FN Hradec Králové. Do souboru pacientů byli zahrnuti jak dospělí, tak dětští psoriatičtí pacienti. Aktivita nemoci a účinnost léčby byla hodnocena vyšetřujícím dermatologem pomocí PASI skóre. Vzorky venózní krve byly odebrány před terapií a po jejím ukončení při propuštění z oddělení. Výsledky: PTX3 a CRP: Cílem první práce bylo...
|
|
Studium receptorů NKR-P1A a NKR-P1B exprimovaných v eukaryotických organismech
Ivanova, Lyubina ; Rychlovský, Petr (oponent) ; Bezouška, Karel (vedoucí práce)
Důležitou součástí imunitního systému jsou NK (natural killer) buňky, které mají schopnost identifikovat antigeny a cizorodé látky přítomné v organismu prostřednictvím molekulově rozmanitých receptorů. Mezi receptory přirozených zabíječů patří lektinové proteiny NKR-P1A a NKR-P1B, jejichž ligandy jsou převážně terminální oligosacharidy glykoproteinů na cílových (např. nádorových) buňkách. Po interakci sacharidových struktur na povrchu antigenů s jejich vazebnými partnery na NK receptorech jsou spouštěny výkonné mechanismy NK buněk, které příslušné cílové buňky zabíjí. V současné době jsou poznatky v oblasti NK buněk, jejich receptorů a interakcích s ligandy značně využívány při léčbě nádorů, virových a autoimunitních onemocnění. Exprese heterologních proteinů v eukaryotických organismech s sebou přináší mnoho výhod. Methylotrofní kvasinka Pichia pastoris je, na rozdíl od prokaryotických organismů, schopná post-translačních modifikací, jejichž výsledkem jsou biologicky aktivní molekuly exprimovaných proteinů. Expresní systém P. pastoris má obvykle vysokou úroveň exprese proteinů a je obecně pokládán za rychlejší, snažší a levnější ve srovnání s jinými eukaryotními systémy. V této diplomové práci jsou předkládány výsledky přípravy expresního vektoru, vhodného pro expresi potkaních proteinů NKR-P1A a...
|
host ::
