|
Capillary electrophoresis with contactless conductivity detection for rapid determination of meldonium in urine
Šlampová, Andrea ; Kubáň, Pavel
A simple, rapid and cheap capillary electrophoresis-capacitively coupled contactless\nconductivity detection (CE-C4D) method for determination of meldonium (MEL) in\nurine samples was developed. Sample pretreatment was minimized to dilution of urine\nsamples with DI water and MEL was determined by CE-C4D in background electrolyte\nconsisting of 2 M acetic acid (pH 2.3) in ng mL−1 to mg mL−1 concentration range.\nSample-to-sample analysis time was less than 4 min, limit of detection and\nquantification was 0.015 and 0.05 μg mL−1, respectively, and the method showed\nexcellent linearity (r2 ≥ 0.9998), recovery (97.6–99.9%) and intraday as well as interday\nrepeatability (RSD ≤ 4.7%).
|
|
Iniciace pohybu byčíku, signalizace a regulace pohyblivosti spermií ryb: fyzikální a biochemické řízení
PROKOPCHUK, Galina
Tato studie se pokouší vrhnout světlo na regulační procesy a uspořádání odezvy rybích spermií v průběhu zrání a iniciace motility. Prvním záměrem této studie bylo zlepšit porozumění mechanismům odpovědných za akvizici potenciálu pro motilitu spermatu u jeseterů. Fyziologické procesy, kterým podléhá dozrávání spermatu, nebyly dosud vůbec u tohoto druhu popsány. Naše výsledky ukazují, že dozrávání spermatu u jesetera nastává mimo testes kvůli zředění spermatu močí a zahrnuje účast sloučenin s vysokou molekulární hmotností stejně jako přítomnost iontů vápníku v seminální tekutině a/nebo moči. Druhým cílem této práce studium vyrovnávacího mechanismu u rybího spermatu s osmotickým a iontovým modem aktivace, stejně jako u spermatu euryhalinních druhů ryb, při různých podmínkách prostředí. Ukázali jsme, že změna osmolality prostředí může ovlivnit rybí sperma různými způsoby, což závisí na druhu ryby a módu aktivace motility spermatu - buď osmotickém či iontovém. V odpovědi na osmotický stres způsobený hypotonicitou, sperma kapra reguluje tok vody napříč buněčnou membránou a zvyšuje svůj cytoplasmatický objem během své krátké periody motility. V kontrastu, nebyla pozorována žádná indikace změn v objemu ani u jesetera malého ani u sivena amerického, oba mající iontový mód aktivace motility. V této studii jsme se zabývali mechanismem, kterým lze přizpůsobit spuštění motility spermatu euryhalinních ryb v odlišném rozsahu salinity prostředí. Naše výsledky ukazují, že sperma euryhalinní tilápie (Sarotherodon melanotheron heudelotii) odchované v sladké, slané i hypersalinní vodě může být aktivováno v hypotonickém, isotonickém i hypertonickém prostředí za předpokladu, že ionty Ca2+ jsou přítomny na různých úrovních. Bylo zjištěno, že čím vyšší salinita při odchovu ryb nebo čím hypertoničtější okolní medium při aktivaci spermatu, tím vyšší extracelulární koncentrace iontů Ca2+ je vyžadována. Zjistili jsme také, že bez ohledu na salinitu při odchovu ryb, mechanismus aktivace spermatu u této euryhalinní tilápie zůstává stejný. Výsledky získané v této studii umožňují domněnku, že osmolalita není hlavní faktor inhibující motilitu uvnitř testes u S. melanotheron heudelotii. Třetím cílem této studie bylo zjištění iniciačního procesu regulace motility a popis iniciace pohybu bičíku u spermatu chrupavčitých ryb. U lososovitých a jeseterů, regulace aktivace motility spermatu je zejména přičítána snížení extracelulární koncentrace K+ při přechodu spermatu ze seminální tekutiny do sladké vody, kde osmolalita stejně jako koncentrace K+ je mnohem nižší. Zjistili jsme, že u spermatu jesetera inhibice K+ může být překlenuta díky pre-expozici buněk spermatu vyššímu osmotickému šoku před jeho přechodem do K+ bohatého prostředí plavacího media. Navíc, po tomto ošetření, motilita spermatu jesetera se stává necitlivá k vysoké koncentraci extracelulárního K+. Proto se domníváme, že sperma jesetera může být aktivováno užitím neočekáváné signální dráhy, nezávisle na pravidelné stimulaci iontů. Postupné aktivační kroky u spermatu jesetera byly zaznamenávány vysokorychlostní kamerou s užitím specifické experimentální situace, kdy iniciace motility spermatu byla zpožděna v čase až o několik sekund. Při iniciaci motility, prvních pár vlnění vznikajících v bazálním regionu se začíná šířit i směrem ke špičce bičíku, ale postupně slábne směrem ke středu bičíku. Toto chování se několikrát opakuje až do stavu, kde amplitudy vlnění postupně dosáhnou podobných hodnot, což eventuálně vede k progresivnímu posunu spermie. Celkový čas potřebný pro přechod bičíku z imobilního stavu s rigidním tvarem do plné aktivity s pravidelně šířeným vlněním se pohybuje v rozmezí 0.4 až 1.2 sek. Závěrem, výsledky této studie přinášejí cenné kousky informací do obecného porozumění procesu dozrávání rybího spermatu, jeho schopnosti přizpůsobit se rozdílným fyzikálním a biochemickým okolnostem, extra i intra celulární signalizaci stejně jako regulačním mechanismům aktivace motility rybího spermatu
|
| |
|
Akvizice nových spotřebitelů z mladé generace pro tradiční českou značku
Javořík, Tomáš ; Koudelka, Jan (vedoucí práce) ; Šíšová, Lenka (oponent)
Diplomová práce se zabývá tématem akvizice nových zákazníků z řad mladé generace. Práce v teoretické části pojednává o kupním chování spotřebitelů, metodách použitých v praktické části práce a zejména pak o trhu kávy. Práce se nejprve zaměřuje na kávu a kávový trh obecně, následně je důraz kladen zejména na trh kávy v České republice, jeho vývoj a specifika. V praktické části přichází na řadu představení konkrétní společnosti, následná analýza tržních dat a spotřebitele. Analýza spotřebitele je provedena za pomoci kvalitativního i kvantitativního marketingového výzkumu. Cílem práce je odhalení potenciálu a adresování problémů dané značky.
|
|
Zaměřování kabelových poruch a trasování kabelů
Marek, Tomáš ; Skalka, Miroslav (oponent) ; Ondrůšek, Čestmír (vedoucí práce)
Bakalářská práce se zaměřuje na problematiku trasování kabelů uložených v zemi. Určení jejich hloubky. Předměření místa poruch na kabelech a určení jejich přesného místa. Dává přehled o různých metodách trasování a zaměření různých typů poruch a volby nejvhodnější metody k jejich lokalizaci. Detailně popisuje různé možnosti trasování a zaměřování vad kabelů.
|
|
Vliv parametrů ekvilibrace a mrazení ejakulátu býků na motilitu spermií po rozmrazení
Beránková, Monika ; Stádník, Luděk (vedoucí práce) ; Zuzana, Zuzana (oponent)
Hypotézou práce je předpoklad průkazných rozdílů v životaschopnosti spermií charakterizované vyšší motilitou a podílem živých spermií po rozmrazení inseminačních dávek vyrobených při aplikaci prodloužené ekvilibrace a nižšího teplotního gradientu mrazení.
Cílem práce bylo zjistit, zda mají odlišné podmínky ekvilibrace a mrazení vliv na životaschopnost spermií po rozmrazení.
V teoretické části práce jsou shrnuty informace o parametrech ejakulátu býků, metodách jeho hodnocení a především o jeho zpracování a dlouhodobé konzervaci. V průběhu let 2013-2015 byl na inseminační stanici odebírán ejakulát od předem vybrané skupiny plemenných býků, skupina čítala 5 býků s ohledem na stejný věk, plemeno a podmínky ustájení a ošetřování. Odebraný ejakulát byl po vstupním hodnocení rozdělen na několik částí, které byly zpracovány různým způsobem.
Část inseminačních dávek byla standardně ekvilibrována po dobu 120 minut, následně byla polovina pejet standardně mrazena metodou Direct Freezing dle standardní 3-fázové mrazicí křivky a polovina pejet dle odlišné 2-fázové mrazicí křivky. Druhá část inseminačních dávek byla ekvilibrována po dobu 240 minut a mrazena jako v předchozím případě dle 3-fázové standardní mrazicí křivky a dle 2-fázové mrazicí křivky. Zmrazené inseminační dávky byly poté uloženy v kontejneru s tekutým dusíkem při -196°C.
Byla hodnocena motilita spermií pomocí CASA, dále podíl živých a mrtvých spermií pomocí barvení Eosinem a Nigrosinem a reakce membrán spermií pomocí HOS testu, který zjišťuje reakci membrán bičíků spermií na vytvořené hypoosmotické prostředí.
Výsledky dokumentují vyšší progresivní motilitu spermií a podíl živých spermií na základě barvení (+5,57 %; +4,47 %) při použití prodloužené délky ekvilibrace (240 min) rozdíly oproti použití standardní délky ekvilibrace (P < 0,01). Souhlasně byly nalezeny i vyšší hodnoty celkové motility a HOS testu při použití prodloužené délky ekvilibrace, avšak rozdíly nebyly statisticky průkazné. Při mrazení na základě odlišných mrazicích křivek byly zjištěny vyšší hodnoty (v průměru +1,6 %) téměř u všech sledovaných parametrů spermií po rozmrazení při použití 3-fázové mrazicí křivky, nalezené rozdíly nebyly statisticky průkazné.
Při hodnocení parametrů ejakulátu u býků zde byly mezi býky nalezeny statisticky významné rozdíly (P < 0,01) v celkové a progresivní motilitě, podílu živých spermií a HOS testu, je tudíž patrná individualita mezi býky v odpovědi na metodiku zpracování ejakulátu.
Při hodnocení charakteristik pohybu spermií z CASA zde byly nalezeny statisticky významné rozdíly mezi býky u VCL, VSL, VAP, LIN, STR, WOB, taktéž mezi různými délkami ekvilibrace (P < 0,01), avšak rozdíly nebyly nalezeny u těchto parametrů pohybu spermií při použití různých mrazicích křivek.
|
|
Nedestruktivní zjišťování vlastností betonu předpjatých nosníků
Mikulec, Jan ; Bílek, Vlastimil (oponent) ; Cikrle, Petr (vedoucí práce)
Diplomová práce pojednává o nedestruktivních metodách zkoušení a zjišťování vlastností předpjatého betonu. První část se věnuje úvodu do problematiky předpjatého betonu, jeho podstatě a materiálovým vlastnostem. V další části jsou popsány nedestruktivní diagnostické metody použité v praktické části – ultrazvuková impulsová metoda, rezonanční metoda a tvrdoměrná odrazová metoda. Pro výpočet kalibrace jsou popsány destruktivní zkoušky na tělesech. Dále následuje praktická část, kde je popsán zkoušený prvek - vazník, jeho výroba, skladování a provedené zkoušky. Z výsledků zkoušek jsou pak vypočteny hledané hodnoty a porovnávány výsledky dle jednotlivých postupů uvedených v normách. Poslední část se věnuje výpočtu vzepětí vazníku a ztrátám předpětí.
|
|
Stanovení a ověření vhodných způsobů detekce amoniaku a vybraných skleníkových plynů
Zabloudilová, Petra ; Pecen, Josef (vedoucí práce) ; Jan, Jan (oponent)
Práce se zabývá metodami detekce plynů v zemědělství, zejména amoniaku. Zjišťování příčin vzniku amoniaku a dalších plynů (např. methanu) a návrhy vhodných opatření pro jejich omezování, jsou závislé na metodách měření, včetně použitých přístrojů a meted.V teoretické části jsou popsány základní údaje o amoniaku a vybraných skleníkových plynech, jejich vliv na životní prostředí, jejich zdroje a uvedeny vlastnosti zvolených senzorů plynů (zejména polovodičových senzorů). V experimentální části práce byly vybrané sensory testovány v laboratorních podmínkách, zejména v závislosti na koncentraci měřeného plynu a relativní vlhkosti vzduchu. Zvolené sensory byly poté ověřeny pro měření v provozních podmínkách (ve stájových objektech). V závěru práce jsou diskutovány výhody a nevyhody zvolených senzorů (se zaměřením na jejich využití v provozních podmínkách).
|
|
Diagnostika významných virů jabloní
Winkowska, Lucie ; Ryšánek, Pavel (vedoucí práce) ; Petr, Petr (oponent)
Virus mozaiky jabloně (Apple mosaic virus, ApMV), virus žlábkovitosti kmene jabloně (Apple stem grooving virus, ASGV), virus vrásčitosti kmene (Apple stem pitting virus, ASPV) a virus chlorotické skvrnitosti listů jabloně (Apple chlorotic leaf spot virus, ACLSV) jsou ekonomicky významné viry jádrovin, které jsou celosvětově rozšířeny a mohou způsobit značné snížení výnosu. Hlavní kontrolní strategie (konkrétně detekce patogena, certifikace, karanténa atd.) jsou závislé na přesných a citlivých detekčních metodách a na perfektní znalosti patogena.
V rámci disertační práce byla optimalizována detekční metoda kvantitativního RT-PCR (qRT-PCR) pro detekci a kvantifikaci čtyř studovaných virů. Získané výsledky naznačily, že qRT-PCR je nejspolehlivější technika ve srovnání s konvenčními metodami DAS/I-ELISA a RT-PCR.
V naší studii při kvantifikaci virů pomocí qRT-PCR se ukázalo, že koncentrace ASGV, ASPV a ACLSV je stabilní v průběhu vegetace a v různých rostlinných tkáních. Výjimku představuje ApMV, u kterého se během vegetace měnil obsah v listech a lýku. Tyto výsledky naznačují, že změny v koncentraci virů pozorované metodami DAS/I-ELISA a RT-PCR v rostlinných tkáních jsou důsledkem jiných vlivů (inhibitory, stárnutí rostlinných tkání, nižší citlivost atd.) než změnami v samotné koncentraci virů v rostlinách.
V průběhu monitoringu (celkem bylo otestováno 351 stromů) se ukázalo, že studované viry jsou více rozšířeny v jabloňových sadech a v zahradách než v planých volně rostoucích jabloních.
Vybrané virové izoláty planých a kulturních jabloní byly osekvenovány a byla studována jejich molekulární variabilita i v porovnání s již publikovanými izoláty studovaných virů. Nebyly však objeveny žádné výrazné rozdíly mezi jednotlivými izoláty a ani nalezen žádný vztah s jejich geografickým původem nebo typem výsadby, ze které pocházely.
|
|
Stanovení myorelaxancíí rokuronia, vekuronia a pankuronia metodou kapilární elektroforézy s bezkontaktní vodivostní detekcí
Böhmová, Lenka ; Polášek, Miroslav (vedoucí práce) ; Pospíšilová, Marie (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Student: Lenka Böhmová Školitel: Doc. RNDr. Miroslav Polášek, CSc. Název diplomové práce: Stanovení myorelaxancií rokuronia, vekuronia a pankuronia metodou kapilární elektroforézy s bezkontaktní vodivostní detekcí Byla vyvinuta nová metoda kapilární zónové elektroforézy s bezkontaktní vodivostní detekcí pro stanovení pankuronium bromidu, vekuronium bromidu a rokuronium bromidu. Separace probíhala v křemenné kapiláře o vnitřním průměru 50 µm, celkové délce 75 cm a efektivní délce 45 cm. Optimální základní elektrolyt byl 30mM acetátový pufr o pH 5,75 s přídavkem hydroxypropyl-γ-cyklodextrinu o koncentraci 20 mg/ml. Jako vnitřní standard byl použit fenyltrimethylamonium jodid. Separace probíhala při teplotě 25řC, vkládané napětí bylo 20 kV. Bylo použito hydrodynamické dávkování vzorku při tlaku 50 mbar po dobu 6 s. Za těchto optimálních podmínek byl celkový čas analýzy kratší než 4 minuty. Kalibrační závislost byla pro všechny analyty lineární v rozsahu 50 - 250 µg/ml, korelační koeficienty byly v rozmezí 0,9954 - 0,9983. Limit detekce pro pankuronium bromid byl 13,2 µg/ml, pro vekuronium bromid 11,1 µg/ml a pro rokuronium bromid 11,3 µg/ml. Správnost byla ověřena metodou standardního přídavku na třech...
|
host ::
