|
|
Funkce biotransformačních enzymů ve vývoji nefropathií vyvolaných aristolochovou kyselinou
Bárta, František ; Stiborová, Marie (vedoucí práce) ; Koblihová, Jitka (oponent) ; Eckschlager, Tomáš (oponent)
- 5 - ABSTRAKT Rostlinné alkaloidy aristolochové kyseliny (AA) jsou prokazatelné lidské karcinogeny, které vyvolávají dvě závažná onemocnění ledvin: nefropathii vyvolanou aristolochovou kyselinou (Aristolochic Acid Nephropathy, AAN) a Balkánskou endemickou nefropathii (Balkan Endemic Nephropathy, BEN). Charakteristickým znakem obou onemocnění je vývoj urotheliálních nádorů (Upper Urothelial Carcinoma, UUC). Ačkoliv jsou obě nefropathie vyvolané stejnou látkou, AA, není jejich klinická manifestace zcela totožná. Rozdíly mohou být vysvětleny jak vystavením různým dávkám AA, tak interindividuálními rozdíly v expresních hladinách a aktivitách enzymů, které AA v organismu metabolisují. Detailní znalost těchto enzymů může přispět k objasnění rozdílů v průběhu AAN a BEN a ke snížení risika spojeného s AA. V předkládané disertační práci byly studovány enzymy, které participují jak na oxidační detoxikaci AAI, hlavní složky přírodní směsi AA, tak na redukční aktivaci, která resultuje v tvorbu aduktů AAI s DNA. V modelu laboratorního potkana byla za využití specifického inhibitoru NAD(P)H:chinonoxidoreduktasy 1(NQO1), dikumarolu, studována její úloha v redukční aktivaci AAI in vivo. Oxidační detoxikace AAI, která vede k tvorbě demethylovaného derivátu, AAIa (8-hydroxyaristolochové kyseliny), byla studována za...
|
|
|
Využití slepičích protilátek proti lektinu PAIIL pro prevenci infekcí Pseudomonas aeruginosa u pacientů s cystickou fibrosou
Kubíčková, Božena ; Hodek, Petr (vedoucí práce) ; Anzenbacherová, Eva (oponent) ; Eckschlager, Tomáš (oponent)
Cystická fibróza (CF) je jedním z poměrně běžných dědičných onemocnění, způsobené mutací genu kódujícího protein CFTR, který tvoří chloridový kanál, jež významně ovlivňuje homeostázi iontů a s ní spojené hospodaření buňky s tekutinami. Toto onemocnění postihuje zejména dýchací a trávicí soustavu, avšak z hlediska ohrožení života je nejzávažnější postižení respiračního traktu. Pacienti s CF trpí častými a opakovanými infekcemi dýchacích cest, které vedou k rozvoji chronického zánětu a postupné destrukci plicní tkáně. Tyto infekce plic vyvolané většinou oportunním patogenem Pseudomonas aeruginosa, který je specifický pro pacienty s CF, jsou nejčastější příčinou morbidity a mortality těchto nemocných. V současnosti jsou v terapii infekcí Pseudomonas aeruginosa používána antibiotika, avšak vzhledem ke vzniku rezistencí jsou hledány nové způsoby antibakteriální terapie. Vedle aktivní imunizace pacientů s CF proti Pseudomonas aeruginosa nabízí slibné možnosti pasivní imunizace pacientů pomocí specifických slepičích protilátek cílených proti tomuto patogenu. Cílem předkládané disertační práce bylo proto ověřit profylaktický potenciál slepičích protilátek IgY proti virulenčnímu faktoru Pseudomonas aeruginosa - lektinu PAIIL a dále vyvinout experimentální zvířecí model napodobující podmínky v respiračním...
|
|
|
Analýza nádorové predispozice a funkční analýza variant nejasného významu
Stolařová, Lenka ; Kleibl, Zdeněk (vedoucí práce) ; Eckschlager, Tomáš (oponent) ; Souček, Pavel (oponent)
Průměrně 5-10% všech onkologických onemocnění vzniká u pacientů s dědičnými nádory, kteří mohou mít mutace v desítkách až stovkách nádorových predispozičních genů. Fenotypy se u nosičů mutací překrývají, proto je paralelní vyšetření panelů genů metodou volby v diagnostice. V naší laboratoři jsme připravili univerzální panel i panel určený k cílené analýze specifického nádorového onemocnění, které nám umožnily identifikovat genetické alterace u pacientek s karcinomem prsu a ovaria, pacientů s melanomem, a dalšími nádorovými onemocněními v ČR. Výsledky analýz sekvenování nové generace (NGS) ukazují, že nejčastější genetickou příčinou v ČR u karcinomu ovaria jsou dědičné mutace v BRCA1 (u 24% neselektovaných pacientek) a u maligního melanomu CDKN2A (u 2 % rizikových pacientů). Přítomnost dědičných alterací je klinicky významným fenoménem ovlivňujícím prognózu i léčbu onemocnění. Interpretaci nálezů NGS však komplikuje přítomnost variant nejasného významu (VUS). Na interpretaci VUS v hlavních predispozičních genech BRCA1 a BRCA2 se podílíme v rámci mezinárodního konsorcia ENIGMA (Evidence-based Network for the Interpretation of Germline Mutant Alleles). Naše i mezinárodní výsledky nejvíce studované skupiny dědičných nádorových onemocnění - pacientek s karcinomem prsu a ovaria ukazují, že třetím...
|
|
|
Poruchy hybného systému pacientů v dlouhodobé remisi nádorových onemocnění vzniklých v dětském věku /NEFROBLASTOM/
Šafářová, Marcela ; Kolář, Pavel (vedoucí práce) ; Véle, František (oponent) ; Eckschlager, Tomáš (oponent)
SOUHRN Cílem práce bylo popsat a strukturovat pozdní následky na pohybovém aparátu u pacientů, kteří byli v dětství léčeni pro nefroblastom (NFB). Pacienti podstoupili terapii, skloženou ze tří typů léčby: chemoterapie, radioterapie a chirurgická léčba. Dílčí cíle: Na relativně homogenní skupině pacientů (s jediným typem základního onemocnění léčených v akutní fázi) popsat typické posturální poruchy hybného systému rozvinuté během pěti a více let odstupu od ukončení kombinované léčby (chirurgické, chemo- a radioterapie). V návaznosti na tato zjištění navrhnout pro pacienty bezprostředně po léčbě i po delší časové prodlevě systém prevence poruch hybného systému vznikajících jako sekundární následky léčby primární diagnózy. Porovnat funkční poruchy hybného systému a funkční poruchy plicních funkcí u pacientů s/bez radioterapie. Posoudit dopad poruch hybného systému na tělesnou zdatnost jedince. Práce je klinickou průřezovou studií s retrospektivním dohledáním dat pacientů léčených pro NFB v letech v době od 1.1.1980 do 31.12.2004 na Klinice dětské onkologie (dnes Klinice dětské hematologie a onkologie UK-2.LF a FN Motol). Studie probíhala po dobu tří let 2005-2008 ve Fakultní nemocnici v Motole v Praze. Soubor a metody: Celkem bylo vyšetřeno 151 pacientů. Pacienti byli v době studie občané ČR, nejméně 5 let...
|
|
|
Význam V-ATPasy pro rezistenci nádorových buněk
Suchánková, Kristýna ; Eckschlager, Tomáš (vedoucí práce) ; Indra, Radek (oponent)
Chemorezistence je jednou z hlavních příčin selhání léčby chemoterapie nádorů. Vakuolární ATPasa (V-ATPasa) je ATP-dependentní protonová pumpa podílející se na regulaci pH buněk, buněčných organel i intracelulárního prostoru. V souvislosti s metabolismem nádorových buněk (metabolismus glukosy, hypoxie, nedostatečné prokrvení nádorové tkáně) dochází k výrazné acidifikaci extracelulárního prostoru a intracelulárních kompartmentů. Bazická cytostatika přestupují na základě pH gradientu do kyselých organel, kde jsou následně protonována a akumulována. Tento mechanismus se nazývá lysosomální sekvestrace a je jedním z mechanismů rezistence nádorových buněk k podávaným léčivům, která se v důsledku vychytávání nedostanou do míst svého účinku. Zvýšená exprese V-ATPas byla popsána v souvislosti s chemorezistencí a progresí nádorů. Tato práce je zaměřena na sledování membránové podjednotky V0d z komplexu V-ATPasy a změn rezistence vůči ellipticinu způsobené umlčením genu této podjednotky v lidských neuroblastomových liniích UKF-NB-4 (senzitivní) a UKF-NB-4ELLI (rezistentní k ellipticinu). Exprese V0d byla nejprve zkoumána na úrovni mRNA pomocí kvantitativní polymerasové řetězové reakce v reálném čase (RT-PCR). K umlčení vybraných genů podjednotek V-ATPasy byla využita transfekce buněk molekulami siRNA (z angl....
|
|
|
Exprese lncRNA MIAT v nádorových buňkách
Jursová, Pavlína ; Eckschlager, Tomáš (vedoucí práce) ; Sztacho, Martin (oponent)
V mnoha případech bylo prokázáno, že lncRNA jsou významnými regulátory genové exprese a tudíž jsou často zapojeny do různých biologických funkcí a patologických procesů včetně nádorového onemocnění. MIAT (myocardial infarction associated transcript) je jednou z dlouhých nekódujících RNA, která byla poprvé identifikována v roce 2006 a původně izolována jako hlavní gen zapojující se do infarktu myokardu. Tato lncRNA se významně zapojuje do vývoje několika dalších onemocnění jako je například diabetická retinopatie, schizofrenie či mikrovaskulární dysfunkce. Ovšem MIAT byla identifikována také v mnoha maligních nádorech jako karcinogenní regulátor. Několik studií již publikovalo, že umlčením MIAT lze docílit snížení buněčné životaschopnosti, proliferace a schopnosti invaze a současně podpořit buněčnou senescenci a apoptózu nádorových buněk. Proto je považována za potenciální biomarker a terapeutický cíl u nádorových onemocnění. MIAT se zapojuje do buněčných procesů různými mechanismy. Je schopna regulovat alternativní sestřih, genovou expresi či fungovat mechanismem ceRNA a ovlivňovat tak biologické procesy související se vznikem nádorů. Součástí této práce bylo i vyšetření relativní exprese MIAT v buněčných liniích Ewingova sarkomu, kde byla zjištěna vyšší exprese.
|
|
|
Genetic variability in sporadic colorectal cancer: Searching for novel risk, prognostic and predictive biomarkers.
Jirásková, Kateřina ; Vodička, Pavel (vedoucí práce) ; Machoň, Ondřej (oponent) ; Eckschlager, Tomáš (oponent)
SOUHRN Rakovina tlustého střeva a konečníku (kolorektální karcinom, KRK) představuje celosvětově závažný zdravotní problém. I přes pokroky v diagnostice a v léčebných metodách zůstává prognóza onemocnění špatná. Pro zlepšení celkové míry přežívání je důležité umět rozpoznat jedince s vyšším rizikem vzniku KRK a odhalit onemocnění v rané potenciálně léčitelné fázi. Současně identifikace pacientů, kteří budou reagovat negativně na konkrétní léčbu, by přispěla ke snížení nadbytečné chemoterapie a k minimalizaci toxicity související s léčbou. Cílem této práce bylo hledání nových diagnostických, prognostických a prediktivních DNA-biomarkerů pro sporadickou formu KRK. Každý člověk je geneticky jedinečný a nalezení těchto biomarkerů by lékařům usnadnilo diagnózu a výběr optimální terapie pro každého pacienta s KRK na základě jejich molekulárního profilu. Pro dosažení tohoto cíle jsme zkoumali několik kandidátních genů u zdravých jedinců i u nově diagnostikovaných pacientů se sporadickou formou KRK. Výsledky této PhD práce byly shrnuty v sedmi impaktovaných publikacích. Hlavními závěry jsou: 1) Genetické varianty v cílových oblastech pro vazbu microRNA (miRSNPs) v genech opravy dvouřetězcových zlomů, genech důležitých pro etiologii KRK a mucinových genech souvisí buď s rizikem KRK nebo s odpovědí na léčbu, 2)...
|
|
|
Exprese V-ATPázy v hypoxii u buněk neuroblastomu
Kittlerová, Kateřina ; Eckschlager, Tomáš (vedoucí práce) ; Moserová, Michaela (oponent)
Nádorová onemocnění se v dnešní době řadí mezi nejčastější příčiny smrti na celém světě, proto se stále pracuje na nových protinádorových léčivech a terapeutických přístupech. U dětí a mladistvých jsou nádorová onemocnění druhou nejčastější příčinou smrti. Mezi jeden z často diagnostikovaných nádorů u dětí a mladistvých patří neuroblastom. Jedná se o maligní embryonální nádor periferního nervového systému. K léčbě nádorových onemocnění se s dalšími terapeutickými postupy jako je chirurgické odstranění a ozáření nádoru používá léčba cytostatiky - chemoterapie. Cisplatina je jedno z nejpoužívanějších cytostatik, její účinnost je ale ztěžována vznikem rezistence v průběhu léčby. Vakuolární ATPáza (V-ATPáza) acidifikuje některé buněčné organely včetně lysozomů, což může vést k lysozomální sekvestraci některých látek včetně cytostatik a tím tedy zabránění léčivu dostat se k terapeutickému cíli. Klíčovou roli v regulaci lysozomální aktivity hraje transkripční faktor EB (TFEB). Tato práce se zabývá expresí d podjednotky vakuolární ATPázy (ATP6V0D1) a TFEB u neuroblastomové buněčné linie senzitivní UFK-NB-4 a rezistentní vůči cisplatině UKF-NB-4CDDP v normoxii a hypoxii. Po vystavení neuroblastomových buněk rezistentních vůči cisplatině UKF-NB-4CDDP došlo ke zvýšení exprese genu ATP6V0D1 vůči normoxii. V...
|
|
|
Potenciace účinku cytostatik inhibitory v-ATPasy
Vaňková, Kristýna ; Eckschlager, Tomáš (vedoucí práce) ; Hudeček, Jiří (oponent)
Nádorová onemocnění patří mezi jeden z nejzávažnějších problémů vyspělé civilizace a současné medicíny. Neuroblastom je dětský solidní nádor embryonálního typu vyvíjející se z buněk neurální lišty. Významnou roli v patogenezi tohoto onemocnění hraje zvýšená exprese některých onkogenů a jejich mutace vedoucí k poruše regulací. Jednou z možností léčby nádorů je využití cytostatik, málo selektivních látek, které svým toxickým účinkem usmrcují jak nádorové, tak zdravé buňky. Příkladem takové cytotoxické látky je cisplatina (CDDP) vázající se na purinové báze a vedoucí buňku k apoptose. Častou komplikací léčby je vznik rezistence k použitému léku. Ve spojení s touto problematikou je zkoumána vakuolární H+ -ATPasa (V- ATPasa), která je zodpovědná za acidifikaci vakuol. Tato bakalářská práce se zabývá sledováním exprese vybraných genů V-ATPasy v neuroblastomové buněčné linii senzitivní (UKF-NB-4) a rezistentní k cisplatině (UKF-NB-4CDDP ) a po jejich ovlivnění cisplatinou. To bylo provedeno na genové úrovni izolací buněčné RNA, reverzní transkripcí za vzniku komplementární DNA (cDNA) a metodou kvantitativní polymerázové řetězové reakce v reálném čase (RT-PCR). Snahou práce bylo poukázat na možný vliv V-ATPasy na vzniku chemorezistence k cisplatině, a tím přispět k úvahám o V-ATPase jako o možném...
|
|
|
Studium metabolismu rostlinného karcinogenu aristolochové kyseliny I
Dedíková, Alena ; Stiborová, Marie (vedoucí práce) ; Eckschlager, Tomáš (oponent)
Aristolochové kyseliny (AA) jsou přírodní látky obsažené v rostlinách čeledi podražcovitých (Aristolochiaceae). Tyto rostlinné alkaloidy vykazují nefrotoxické účinky a jsou prokázatelnými lidskými karcinogeny. Extrakt z rostlin podražcovitých obsahuje různé druhy látek, mezi které se řadí i aristolochové kyseliny. Majoritně jsou zastoupeny aristolochová kyselina I (AAI) a aristolochová kyselina II (AAII). S aristolochovými kyselinami jsou spojovány dvě onemocnění. Jedná se o nefropatii vyvolanou aristolochovými kyselinami (Aristolochic Acid Nephropathy, AAN) dříve nazývanou jako nefropatie vyvolaná čínskými bylinami (Chinese Herbs Nephropathy, CHN) a o balkánskou endemickou nefropatii (Balkan Endemic Nephropathy, BEN). Obě choroby jsou doprovázeny selháním ledvin a tvorbou nádorů v urotheliální tkáni, které vznikají vlivem působení AA. Nicméně nedochází ke stejným klinickým projevům u obou onemocnění. To je nejspíše zapříčiněno různou variabilitou enzymů, které se účastní biotransformace AA, ale také na dávkách podání AA. V organismu podléhají AA aktivačnímu a/nebo detoxikačnímu metabolismu. Tato diplomová práce je věnována sledování aktivačního metabolismu AAI, přesněji, objasnění tvorby redukčních metabolitů AAI. Redukce AAI, je aktivační dráhou této sloučeniny, která je zodpovědná za iniciaci...
|
host ::
RSS.