|
|
Fyzikální faktory ovlivňující vznik poškození rohovky králičího oka UV zářením
Čejka, Čestmír ; Rosina, Jozef (vedoucí práce) ; Štípek, Stanislav (oponent) ; Amler, Evžen (oponent) ; Salminen, Lotta (oponent)
Cíl práce: Cílem disertační práce "Fyzikální faktory ovlivňující poškození králičí rohovky UV zářením" bylo a) vyšetřit propustnost světla králičí rohovkou ozářenou UVB paprsky měřením fyzikálních hodnot absorbance A a transmitance T jako funkce vlnové délky ; b) vyšetřit absorpční koeficient jako funkci vlnové délky ; c) zhodnotit významnost tohoto koeficientu pro absorpci světla v rohovce; d) vyšetřit absorpci světla v rohovce ozářenou UVA paprsky měřením fyzikálních hodnot absorbance A a transmitance T jako funkce vlnové délkky (porovnat účinek UVA záření s UVB zářením). Materiál a Metoda: Pro dosažení jednotlivých cílů byla vypracována nová spektrofotometrická metoda, umožňující kvalitativně i kvantitativně hodnotit absorpci světla v rohovce a byly provedeny následující experimenty: a) Opakované ozařování králičí rohovky UVB paprsky (denní dávka 1.01 J/cm2 v průběhu pěti dnů); b) Opakované ozařování králičí rohovky UVA paprsky (1.01 J/cm2, nebo 2.02 J/cm2 v průběhu pěti dnů); c) Opakované ozařování králičí rohovky dávkou 1.01 J/cm2 jedenkrát denně po dobu 1 až 4 dnů a v jednotlivých časových intervalech vyšetření změny absorpce světla rohovkou a změny hydratace; d) Opakované ozařování králičích rohovek UVB zářením v denních dávkách 0.5 J/cm2, 1.01 J/cm2, v průběhu 4 dnů. V průběhu ozařování byl na pravé...
|
|
|
Funkcionalizovaný nanovlákenný systém pro urychlení regenerace vnitřních tkání
Kráľovič, Martin ; Amler, Evžen (vedoucí práce) ; Gášková, Dana (oponent) ; Chvojka, Jiří (oponent)
Funkcionalizací lze upravit vlastnosti nanovláken připravených elektrostatickým zvlákňováním aby se co nejlépe svou funkcí nahrazovali chybějící extracelulární matrix v hojící se ráně. U králičích střevních anastomózach se ukázala funkcionalizace nanovláken kryogenní frakcionalizací jako klíčová. Zatímco použití funkcionalizovaných PVA a chitosanových nanovláknných membrán vedlo ke strikturám střeva a silným zánětům, až další funkcionalizace PVA a chitosanových nanovláken jejich kryogenní frakcionalizací vedla k možnosti snížení dávky polymeru, což významně zredukovalo zánětlivou odpověď a podstatně zvýšilo biokompatibilitu použitého materiálu. Aplikací frakcionalizovaných nanovláken bylo dosaženo zvýšení podílu mikrocév, fibroblastů a kolagenu, což se projevilo na zvýšení biomechanické pevnosti zhojených anastomóz. Funkcionalizace polykaprolaktonových nanovláken speciálním přilepením k polypropylénové síťce je umožnilo požít jako podporu hojení fascie v břišní stěně prasat. Funkcionalizace PVA nanovláken glyoxalem vedla k jejich zvýšené stabilitě ve vodním prostředí. Aplikací membrány z PVA funkcionalizovaných nanovláken na hluboké rány v kůži králíků umožňuje výměnu dýchacích plynů mezi ránou a okolím, což podporuje proliferaci buněk a produkci kolagenu. Nanovlákenná membrána na kožní ráně tak...
|
|
|
Řízení enzymatické aktivity molekuly kreatinkinázy změnami její konformace
Horníková, Daniela ; Mejsnar, Jiří (vedoucí práce) ; Amler, Evžen (oponent) ; Kolář, František (oponent)
74 5. ZÁVĚR Práce prokázala adekvátními chemickými a fyzikálními metodami následující vlastnosti myofibrilární kreatinkinázy (EC 2.7.3.2) (CK), vyčistěné z čisté myofibrilární frakce krysího a králičího svalu m. psoas. 1) Sekvenční 2D SDS elektroforéza odhalila tři izoelektrické body v úzkém rozsahu fyziologického pH 7.17, 7.28 a 7.47. Specifická enzymatická aktivita CK byla 82.35 IU/mg. 2) Rychlost výměny fluorescenčně značené CK-IAF mezi M-linií izolovaných myofibril a okolím (nepřímo úměrně vypovídající o síle vazby CK molekuly v M-linii), měřená v rovnovážném stavu metodou FLIP, se zpomaluje okyselováním okolního prostředí v rozmezí pH 6.5 - 7.2. 3) Rychlost výměny CK-IAF molekuly je ovlivněna přítomností substrátů (pH 7.10 - 7.17), když rychlosti CK se substráty (konformace "closed" a "intermediary") jsou průkazně sníženy oproti rychlosti CK bez substrátů (v konformaci "open"). Specifická enzymatická aktivita při těchto pokusech se snižovala podle vazby v myofibrilách až o dva řády k hodnotě 0.40 IU/mg. 4) Měření steady-state fluorescence vnitřních tryptofanových zbytků neznačené CK prokázala a) trojí pokles fluorescence v čase podle vazby substrátů, b) změnu střední doby života lifetime 2.72 ns volné CK, vlivem vazby ATP (2.38 ns) a vazbou ATP+Cr (2.42 ns). 5) Zhášení fluorescence vnitřních...
|
|
|
Collagen structures from cell culture to intact tendon
Hadraba, Daniel ; Jelen, Karel (vedoucí práce) ; Amler, Evžen (oponent) ; Plášek, Jaromír (oponent)
UNIVERZITA KARLOVA a HASSELT UNIVERSITY / tUL Disertační práce Kolagenní struktury od buněčných kultur k šlaše ABSTRAKT Autor: Daniel Hadraba Vedoucí: Assoc. Prof. Karel Jelen | Charles University Prof. Marcel Ameloot | Hasselt University Konzultant: Dr. Frantisek Lopot | Charles University Prof. Virginie Bito | Hasselt University Anotace Autor: Ing. Mgr. Daniel Hadraba Název práce: Kolagenní struktury od buněčných kultur k šlaše Rok: 2010 - 2017 Studijní program: Doktor Biomechanika | Univerzita Karlova Doktor Biomedicínských věd | Hasselt University / transnational University Limburg Ústav: Anatomie a Biomechaniky| Fakulta tělesné výchovy a sportu | Univerzita Karlova Biofyzika| Hasselt University Vedoucí:: Assoc. Prof. Karel Jelen | Anatomie a Biomechaniky| Fakulta tělesné výchovy a sportu | Univerzita Karlova Prof. Marcel Ameloot | Hasselt University / transnational University Limburg Konzultanti: Dr. Frantisek Lopot | Anatomie a Biomechaniky| Fakulta tělesné výchovy a sportu | Univerzita Karlova Prof. Virginie Bito | Hasselt University / transnational University Limburg Bibliografické údaje: Strany 102 Obrázky 30 Tabulky 2 Rovnice 17 Klíčová slova: šlacha, kolagen, vlnky, orientace, stárnutí, label-free mikroskopie, generovaní druhé harmonické, mikroskopie délky života fluoroforu, biomechanika Abstrakt...
|
|
|
Příprava, charakterizace a testování krevních derivátů pro aplikace v regenerativní medicíně
Sovková, Věra ; Amler, Evžen (vedoucí práce) ; Kolářová, Hana (oponent) ; Vránová, Jana (oponent)
Trombocytární přípravky jsou pro široké spektrum bioaktivních látek vhodným produktem pro využití jednak jako doplňku pro kultivaci buněk in vitro, ale mohou být též využity při přípravě buněčných i bezbuněčných nosičů v různých odvětvích regenerativní medicíny. Cílem této práce bylo připravit několik typů krevních derivátů. U těchto přípravků byly dále sledovány koncentrace vybraných bioaktivních molekul. Následně byly tyto přípravky testovány in vitro a to buď samostatně nebo v kombinaci s nanovlákennými nosiči připravenými pomocí elektrostatického nebo odstředivého zvlákňování. Bylo zjistěno, že trombocytární přípravky obsahují v nejvyšších koncentracích chemokin RANTES a růstový faktor PDGF. Dále byl zjištěn obsah pro a protizánětlivých interleukinů a dalších růstových faktorů. Trombocytární lyzát je v 7% koncentraci schopen nahradit FBS v kultuře fibroblastů a keratinocytů. V dalších experimentech byly na nosiče připravené elektrostatickým i odstředivým zvlákňováním adherovány různé koncentrace trombocytů. Bylo zjištěno, že takto připravené nosiče podporují proliferaci i viabilitu všech testovaných buněk a to dávkově závislým způsobem. V posledním experimentu byly připraveny jednotlivé složky trombocytárního koncentrátu. Ty byly charakterizovány a byl sledován jejich vliv na buněčné kultury....
|
|
|
Intelligent nanofibres functionalized with growth factors and blood derivatives for dermatology applications
Vocetková, Karolína ; Amler, Evžen (vedoucí práce) ; Rosina, Jozef (oponent) ; Arenberger, Petr (oponent)
Krevní deriváty jsou výborným zdrojem přirozených růstových faktorů. V tkáňovém inženýrství a regenerativní medicíně již našly řadu uplatnění. Cílem této práce bylo optimalizovat podmínky buněčné kultury za použití destičkového lyzátu, a dále vyvinout mikro- a nanovlákenné nosiče funkcionalizované krevními destičkami, které by mohly sloužit jako systém řízeného dodávání přírodních růstových faktorů. Mikro- a nanovlákenné nosiče byly připraveny elektrostatickým a centrifugačním zvlákňováním PCL. Připravené nosiče byly funkcionalizovány povrchovou adhezí krevních destiček nebo jejich enkapsulací do vnitřní části nanovláken emulzní technikou. V rámci studie kultivačních podmínek kožních buněk bylo zjištěno, že suplementace media 7% destičkovým lyzátem je dostačující pro nahrazení 10% FBS v kultuře keratinocytů a fibroblastů. Dále byl povrch PCL nanovláken připravených elektrostatickým zvlákňováním funkcionalizován krevními destičkami. Při kontaktu s nanotopografií nanovlákenného povrchu došlo k aktivaci destiček a následně k vytvoření fibrinové sítě, která sloužila jako rezervoár růstových faktorů. Díky tomu došlo k prodloužení poločasu uvolnění EGF až na 1.7 dní. Takto funkcionalizované nanovlákenné nosiče podporovaly proliferace a metabolickou aktivitu keratinocytů, fibroblastů a melanocytů. Při...
|
|
|
Nanodiamonds as an innovative system for intracellular delivery of mirna-34a inprostatic cancer therapy
Bitti, G. ; Abate, M. ; Neuhoferová, Eva ; Kindermann, Marek ; Petráková, V. ; Boccellino, M. ; Quagliuolo, L. ; Filová, Eva ; Benson, Veronika ; Caraglia, M. ; Amler, Evžen
The microRNA(miRNA)-34a is an important regulator of tumor suppression. It controls the expression of several target proteins involved in cell cycle, differentiation and apoptosis, and antagonizes processes that are necessary for basic cancer cell viability as well as cancer stemness, metastasis, and chemoresistance. It is downregulated in numerous cancer types, including prostatic cancer, and inhibits malignant growth by repressing genes involved in various oncogenic signaling pathways. Given the anti-oncogenic activity of miR-34a, here we proved the substantial benefits of a new therapeutic concept based on nanotechnology delivery of miRNA mimics. In order to monitor the miRNA-34a replacement, we used a fluorescent nanodiamond particles (FND) system with linked miRNA-34a mimic, which was delivered to PC3 and DU145 prostatic cancer cell lines. We used functionalized nanodiamonds coated with polyethylenimine to transfer miRNA-34a into PC3 and DU145 prostatic cancer cell lines and we measured the zeta-potential of these complexes before using them for in vitro experiments. A replacement of miRNA-34 was observed by monitoring levels of miRNA-34 via real-time PCR. Moreover, our in vitro experiments demonstrated that miRNA-34a replacement, using this FND delivery system, decreased viability and induced apoptosis in prostatic cancer cell lines. Our findings suggest the replacement of oncosuppressor miRNA-34a provides an effective strategy for cancer therapy and the FND-based delivery systems seems to be an excellent strategy for a safe and effective targeting of the tumor.
|
|
|
Studium transportních systémů mikroorganismů
Jančíková, Iva ; Gášková, Dana (vedoucí práce) ; Amler, Evžen (oponent) ; Krůšek, Jan (oponent)
Název práce: Studium transportních systémů mikroorganismů Autor: Mgr. Iva Jančíková Katedra / Ústav: Fyzikální ústav Univerzity Karlovy Vedoucí disertační práce: doc. RNDr. Dana Gášková, CSc., Fyzikální ústav UK Abstrakt: Nadprodukce transportních proteinů, které aktivně odstraňují cizorodé látky z buněk, je zodpovědná za fenomén nazývaný mnohočetná léková rezistence (MDR). Zjištění, že potenciometrická fluorescenční sonda diS-C3(3) je substrátem hlavních MDR pump u tří druhů kvasinek, Saccharomyces cerevisiae, Kluyveromyces lactis a Candida albicans, nám umožnilo použít diS-C3(3) fluorescenční metodu pro sledování inhibice činnosti těchto membránových transportérů účinkem různých chemických stresorů (společných substrátů). Z porovnání míry inhibice transportu sondy pumpami ScPdr5p a KlPdr5p vyplynulo odlišné uspořádání jejich vazebné kapsy, které je v případě KlPdr5p těsnější. U kvasinky K. lactis jsme dále zjistili, že zatímco delece genu KlPDR16 neovlivňuje aktivitu KlPdr5p, vede pouze k hyperpolarizaci buněk, delece genu KlERG6 se projeví jak změnou membránového potenciálu, tak potlačením činnosti KlPdr5p. Skutečnost, že sonda je substrátem nejenom dvou hlavních pump ScPdr5p a ScSnq2p u S. cerevisiae, ale také dvou hlavních pump CaCdr1p a CaCdr2p u C. albicans, nám umožnila vyvinout efektivní postup pro...
|
|
|
Collagen structures from cell culture to intact tendon
Hadraba, Daniel ; Jelen, Karel (vedoucí práce) ; Amler, Evžen (oponent) ; Plášek, Jaromír (oponent)
UNIVERZITA KARLOVA a HASSELT UNIVERSITY / tUL Disertační práce Kolagenní struktury od buněčných kultur k šlaše ABSTRAKT Autor: Daniel Hadraba Vedoucí: Assoc. Prof. Karel Jelen | Charles University Prof. Marcel Ameloot | Hasselt University Konzultant: Dr. Frantisek Lopot | Charles University Prof. Virginie Bito | Hasselt University Anotace Autor: Ing. Mgr. Daniel Hadraba Název práce: Kolagenní struktury od buněčných kultur k šlaše Rok: 2010 - 2017 Studijní program: Doktor Biomechanika | Univerzita Karlova Doktor Biomedicínských věd | Hasselt University / transnational University Limburg Ústav: Anatomie a Biomechaniky| Fakulta tělesné výchovy a sportu | Univerzita Karlova Biofyzika| Hasselt University Vedoucí:: Assoc. Prof. Karel Jelen | Anatomie a Biomechaniky| Fakulta tělesné výchovy a sportu | Univerzita Karlova Prof. Marcel Ameloot | Hasselt University / transnational University Limburg Konzultanti: Dr. Frantisek Lopot | Anatomie a Biomechaniky| Fakulta tělesné výchovy a sportu | Univerzita Karlova Prof. Virginie Bito | Hasselt University / transnational University Limburg Bibliografické údaje: Strany 102 Obrázky 30 Tabulky 2 Rovnice 17 Klíčová slova: šlacha, kolagen, vlnky, orientace, stárnutí, label-free mikroskopie, generovaní druhé harmonické, mikroskopie délky života fluoroforu, biomechanika Abstrakt...
|
|
| |
host ::
RSS.