|
|
Analýza fosfolipidů metodou komprehenzivní plynové chromatografie
Šilhavecká, Simona ; Čabala, Radomír (vedoucí práce) ; Jelínek, Ivan (oponent)
Fosfolipidy jsou důležitou skupinou polárních lipidů tvořících hlavní složku buněčných membrán. Jejich zastoupení se může měnit v závislosti na mnoha faktorech okolního prostředí, ve kterém se buňka nachází. Stanovení membránových fosfolipidů je nepostradatelné v mnoha vědeckých, průmyslových a hospodářských odvětví. Cílem této práce bylo vyvinout separační metodu pro stanovení membránových fosfolipidů, pomocí které by bylo možné provést analýzu fosforylovaných částí fosfolipidů i mastných kyselin z jednoho vzorku. Pro stanovení byla zvolena komprehenzivní plynová chromatografie s hmotnostní detekcí (GC×GC-MS). Tato metoda umožňuje separaci celého vzorku na dvou sériově zapojených odlišných kolonách, mezi kterými je rozhraní nazvané modulátor. Součástí přípravy vzorku bylo rozštěpení vazby v molekule fosfolipidu pomocí enzymu fosfolipasa C, čímž došlo k uvolnění fosforylovaných polárních hlav. Tyto polární části bylo nutné před analýzou derivatizovat. Princip zvolené derivatizace spočíval v použití dvou různých silylačních činidel (hexamethyldisilazan a N,O-Bis(trimethylsilyl) trifluoracetamid) ve dvou krocích. Byly vybrány podmínky pro efektivní separaci silylderivátů fosforylovaných hlav pomocí GC×GC-MS využívající kryogenní modulátor. Jednotlivé silylderiváty byly identifikovány podle...
|
|
|
Příprava nových polymerních vláken pro headspace GC analýzy
Blechová, Karolína ; Čabala, Radomír (vedoucí práce) ; Štícha, Martin (oponent)
Tématem této diplomové práce byla příprava vláken s novou polymerní fází na bázi polycyklofosfazenů pro headspace mikroextrakci na pevné fázi s následnou separací na plynovém chromatografu. Na povrch platinových drátků byla pomocí elektrochemické polymerizace deponována vrstva poly(cyklofosfazen-benzochinonu). Charakteristika polymerní vrstvy byla ověřena pomocí infračervené spektroskopie. Nový polymerní materiál byl využit jako stacionární fáze pro headspace mikroextrakci na pevné fázi. Pro testování selektivity filmu byly zvoleny dva odlišné modelové roztoky, směs uhlovodíků v pentanu a alkoholů ve vodě. Bylo zjištěno, že testovaná směs uhlovodíků se na film extrahuje lépe, než modelová směs alkoholů. Extrakce vzorku se směsí alkoholů byla optimalizována pomocí experimentálního designu, který umožňuje určit faktory a jejich kombinace, které mají na zkoumanou odpověď nejvýznamnější vliv. Program Minitab 16 vyhodnotil konečná optima pro jednotlivé alkoholy i pro součet absolutních ploch píků celé směsi. Separace modelových látek byla provedena pomocí plynového chromatografu s plamenově ionizačním a hmotnostním detektorem. Klíčová slova elektrochemická polymerizace, poly(cyklofosfazen-benzochinonový) film, mikroextrakce na pevné fázi, plynová chromatografie
|
|
|
Enantioselektivní separace vybraných analytů v systémech superkritické fluidní chromatografie a vysokoúčinné kapalinové chromatografie
Martínková, Monika ; Tesařová, Eva (vedoucí práce) ; Čabala, Radomír (oponent)
(CZ) Pro studium separací vybraných 24 analytů byla použita chirální stacionární fáze na bázi celulosy derivatizované tris(3,5-dimetylfenylkarbamátem). Enantioseparace byly realizovány ve dvou systémech, a to v systému vysokoúčinné kapalinové chromatografie a superkritické fluidní chromatografie. Hlavní proměnnou bylo složení mobilní fáze. Testováno bylo pět různých aditiv (izopropylamin, diethylamin, triethylamin, kyselina trifluoroctová, kombinace izopropylaminu a kyseliny trifluoroctové) a jejich vliv na enantioseparaci, v systému superkritické fluidní chromatografie také vliv dvou různých modifikátorů (methanol, propan-2-ol) v kombinaci s těmito aditivy. Cílem práce bylo nalézt složení mobilní fáze vhodné pro separaci vybraných analytů a porovnat separace v rámci různých mobilních fází a obou separačních systémů. Dle předpokladů se ukázalo, že systém superkritické fluidní chromatografie poskytuje poněkud lepší výsledky- lepší rozdělení v kratším čase, ale bylo možné najít dobré separační podmínky pro některé analyty též v systému vysokoúčinné kapalinové chromatografie. Výsledek nebyl zcela jednoznačný. Klíčová slova (CZ) Chiralita, enantiomery, enantioselektivní separace, chirální stacionární fáze, vysokoúčinná kapalinová chromatografie, superkritická fluidní chromatografie.
|
|
|
Aplikace solvatačního modelu k popisu retence vybraných látek v kapalinové a plynové chromatografii
Jirkal, Štěpán ; Čabala, Radomír (vedoucí práce) ; Feltl, Ladislav (oponent) ; Sýkora, David (oponent)
(CZ) Solvatační model (LSER) byl použit ke studiu retenčního chování látek v kapalinové a plynové chromatografii. V první kapitole byl studován popis retence 21 látek solvatačním modelem na reverzní stacionární fázi, v širokém rozmezí složení mobilní fáze methanol- voda a acetonitril-voda. Retence aromatických sloučenin byla obecně lépe popsána solvatačním modelem, než alifatických sloučenin. Byl sledován vliv jednotlivých analytů, použitých pro formulaci LSER modelu, na celkovou schopnost popisu retence modelem. Odlišných výsledků v odhadu retence bylo dosaženo použitím regresního souboru látek obsahujícím pouze sloučeniny aromatické, nebo naopak jen alifatické. Rozdílné výsledky také poskytoval solvatační model formulovaný pouze z kyslíkatých derivátů, nebo naopak dusíkatých derivátů organických látek. Druhá kapitola práce, tematicky zaměřená na plynovou chromatografii, se zabývala popisem retence 152 izomerů C5-C8 alkenů LSER modelem. Solvatační deskriptor L alkenů byl získán odhadovými metodami Havelec-Ševčík (HS) a Platts-Butina (PB), deskriptor E byl přímo vypočten podle jeho definice. Na základě použitých metod k odhadu deskriptorů byly sestaveny dva modely k popisu retence alkenů, model HS a model PB. Byla zjištěna vyšší chyba odhadu retence pro cis izomery alkenů, počítané modelem HS. Po...
|
|
|
Studium kinetiky trypsinového štěpení peptidů a chirálních separací biologicky aktivních látek metodou HPLC
Šlechtová, Tereza ; Tesařová, Eva (vedoucí práce) ; Čabala, Radomír (oponent) ; Mikšík, Ivan (oponent)
Dizertační práce se skládá ze dvou tematických částí; první část se zabývá charakterizací trypsinu, enzymu využívaného v proteomickém výzkumu k identifikaci proteinových sekvencí, a rychlostí trypsinového štěpení peptidů. Druhá část je zaměřena na chirální separace biologicky aktivních látek. V první části projektu byla studována kinetika štěpení syntetických peptidů trypsinema vyvinuta metoda vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC) pro detekci těchto peptidů a jejich fragmentů. Za použití enzymové reakce v roztoku a metody HPLC byly stanoveny relativní rychlostní konstanty štěpné reakce problematických sekvenčních motivů. Bylo objasněno, které aminokyseliny v okolí štěpného místa zpomalují enzymovou reakci a v jaké poloze vůči štěpnému místu je jejich vliv největší. Dále bylo zjištěno, že trypsin je schopen nízké exopeptidázové aktivity, především při štěpení na konci peptidového řetězce. Dále byly zjištěny a porovnány účinnosti tří chromatografických kolon s imobilizovaným trypsinem. Imobilizace na pevný nosič se využívá pro zvýšení množství enzymu účastnícího se katalytické reakce a pro zajištění lepší opakovatelnosti a reprodukovatelnosti výsledků. Účinnost kolony syntetizované na University of North Carolina at Chapel Hill byla porovnána s účinností dvou komerčně dostupných kolon. Jako...
|
|
|
Analýza směsi produktů katalytické oxidace metodou plynové chromatografie s použitím směšovače s řízeným odpařováním
Haupt, Josef Michael ; Schwarzová, Karolina (vedoucí práce) ; Čabala, Radomír (oponent)
Cílem této diplomové práce bylo vyvinout metodu pro plynovou chromatografii s použitím směšovače s řízeným odpařováním (CEM z angl. Controlled Evaporation Mixer) pro dávkování plynné směsi. Ta obsahovala látky vznikající při výrobě kyseliny akrylové dvoustupňovou oxidací propylenu. Analyzovaná směs se skládala z permanentních plynů, lehkých uhlovodíků a kyslíkatých derivátů organických sloučenin. Během vývoje metody byly použity a otestovány kolony s polární i nepolární stacionární fází pro separaci složek směsi. Po výběru nejvhodnější kolony (SPB-1 Sulfur, Supelco, USA) pro separaci látek vhodných pro FID detektor byla metoda dále optimalizována pro maximální možnou účinnost separace. Na koloně SPB-1 Sulfur však nebylo možné separovat propan a propen. Tyto plyny bylo možné stanovit na TCD detektoru a separovat je na předřazených kolonách. Za tímto účelem bylo nutné provést optimalizaci přepínání vícecestných přepouštěcích ventilů uvnitř plynového chromatografu. Dalším krokem bylo kalibrování plynového chromatografu za účelem kvantitativní analýzy vybraných látek. Kalibrační roztoky obsahující analyt a rozpouštědlo byly odpařeny v CEM komoře a ředěny s dusíkem s cílem dosáhnout požadované koncentrace analytu. Formaldehyd a propan měly velmi nízkou odezvu na detektorech, acetaldehyd nebylo možné ve...
|
|
| |
|
|
Stanovení niacinu a jeho metabolitů metodou HPLC-MS
Pultarová, Kamila ; Čabala, Radomír (vedoucí práce) ; Staňková, Barbora (oponent)
1 Abstrakt Kyselina nikotinová je hypolipidemikum s příznivými účinky na plazmatické lipoproteiny. Léková forma se prodlouženým uvolňováním vede k pyrimidinovým metabolitům, které představují zvýšené riziko hepatotoxicity, proto je nutné jejich monitorování. Úkolem předkládané práce bylo vyvinout metodu HPLC-MS pro stanovení kyseliny nikotinové (NA), nikotinamidu (NAM), kyseliny nikotinurové (NUA), 1-methyl- nikotiamidu (MNA), nikotinamid-N-oxidu (NNO), 1-methyl-2-pyridon-5-karboxamidu (2-Pyr) a 1-methyl-4-pyridon-5-karboxamidu (4-Pyr) v krevní plazmě, která by byla dobře využitelná pro monitorování hypolipidemické léčby niacinem. Byly srovnány kalibrační závislosti jednotlivých metabolitů na kolonách Hypercarb (grafitový uhlík) a Hypersil Silica (silikagel). Na obou kolonách byla zjištěna lineární kalibrační závislost každého analytu kromě MNA v koncentračním rozsahu 10- 2000 ng/ml pro čisté látky; kalibrace v lidské krevní plazmě na koloně Hypersil Silica byla lineární v rozsahu 20-4000 ng/ml pro všechny analyty. Korelační koeficient se pohyboval v rozmezí 0,9400-0,9997. Délka analýzy byla 15 minut na koloně Hypercarb a 27 minut na koloně Hypersil Silica. Biologické vzorky byly extrahovány na pevné fázi se sulfonylovou skupinou. Reprodukovatelnost pro biologické vzorky se pohybovala od 0,06% do 19,97...
|
|
|
Analýza produktů reakcí ftalaldehydu s vybranými aminokyselinami
Křížová, Věra ; Čabala, Radomír (vedoucí práce) ; Cvačka, Josef (oponent)
Tato práce se zabývá analýzou produktů reakcí ftalaldehydu s vybranými aminokyselinami pomocí spojení vysokoúčinné kapalinové chromatografie s hmotnostní spektrometrií. V případě jednoduchých aminokyselin (glycinu, glycin ethyl esteru, alaninu, α-aminomáselné kyseliny, valinu, leucinu a isoleucinu) vzniká vždy pouze jeden produkt s dihydroisoindolovou strukturou. Reakcí ftalaldehydu s aminokyselinami se dvěma aminoskupinami (lysinem, asparaginem, glutaminem a argininem) vznikají různé typy sloučenin. Hlavní produkty vznikají interakcí obou aminoskupin s jednou molekulou ftalaldehydu. Kromě toho vznikají také očekávané analogy dihydroisoindolů z reakcí ftalaldehydu s jednoduchými aminokyselinami, navíc není vyloučen vznik produktů obsahujících jednu molekulu aminokyseliny a dvě molekuly ftalaldehydu. Produkty byly strukturně analyzovány pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie a tandemové hmotnostní spektrometrie. Produkty reakcí ftalaldehydu s α-aminomáselnou kyselinou, valinem, leucinem, isoleucinem a lysinem byly izolovány a dále byly podrobeny analýze za použití elektronové ionizace na přístroji sektorového typu s dvojí fokusací a nukleární magnetické resonance. Zjištěné informace mají zásadní význam na aplikovatelnost využití ftalaldehydu jako detekčního činidla při fluorimetrických...
|
|
|
Analýza produktů metateze kardanolů pomocí metody HPLC-MS/MS
Flenerová, Zuzana ; Čabala, Radomír (vedoucí práce) ; Vrkoslav, Vladimír (oponent)
Kardanoly jsou v dnešní době stále více používanými látkami v průmyslu polymerů, barviv, brzdných materiálů, ad. Tyto látky podobné lipidickým sloučeninám podléhají za správných podmínek metatezi. Hlavním cílem diplomové práce je analýza produktů metateze kardanolů metodou HPLC-MS/MS. Pro kvantitativní HPLC analýzu byl připraven standard 3,3'-hexadec-8-en-1,16-diyldifenol, který je při metatezi kardanolů jedním z hlavních produktů. Tento standard byl připraven ve dvou krocích. Prvním krokem byla ethenolýza kardanolů za vzniku 3-(non-8-en-1-yl)fenolu. Druhým krokem přípravy byla homometateze 3-(non-8-en-1-yl)fenolu. Standard byl charakterizován pomocí metod HPLC/MS, EI-MS, ESI-MS/MS, UV/VIS, IR, Ramanovy a NMR spektroskopie. Druhá část práce je věnována studii mechanismu lokalizace dvojné vazby na dlouhých uhlovodíkových řetězcích metodou acetonitrilové APCI-MS. S pomocí jednoduchých modelových alkenů byla metodami MS a MS/MS zkoumána tvorba aduktů [M + 55]+ , které v této metodě hrají klíčovou roli. Nakonec byla navržena struktura a mechanismus vzniku aduktů [M + 55]+ a způsob jejich fragmentace. Klíčová slova: Kardanol, metateze olefinů, HPLC-MS, lokalizace dvojných vazeb, APCI, acetonitril
|
host ::
RSS.