|
|
Biological significance of neuroactive steroids in animal models of brain diseases
Rambousek, Lukáš ; Valeš, Karel (vedoucí práce) ; Votava, Martin (oponent) ; Chvátal, Alexandr (oponent)
Neurosteroidy jsou významnými regulátory ve fyziologii a patofyziologii mozku, které rídí inhibici a excitaci nervového prenosu. Cílem predkládané práce bylo zhodnotit biologický význam neuroaktivního steroidu 3_5_-pregnanolonu glutamátu (3_5_P-Glu). Jeho úcinek byl testován u intaktních zvírat a také v animálních modelech schizofrenie a hippokampální léze indukované N-methyl-D-aspartátem (NMDA). Navíc byla provedena morfologická charakterizace modelu NMDA léze. 3_5_P-Glu nevyvolal u intaktních zvírat významné psychotomimetické vedlejší úcinky charakterizované zvýšenou lokomocní aktivitou, poruchami senzorickomotorických funkcí a pameti. 3_5_P-Glu zmírnil poruchu ucení v animálním modelu schizofrenie, ale nemel vliv na zvýšenou lokomocní aktivitu. 3_5_P-Glu také zvrátil poruchu ucení v prostorové úloze "Carousel maze" v modelu excitotoxické léze hippokampu. Pokud byl aplikován pred lézí, mel také mírný neuroprotektivní úcinek na morfologické poškození hippokampu. Morfologická analýza použitého modelu, NMDA léze hippokampu, odhalila zvýšenou expresi NR1 a NR2 podjednotek NMDA receptoru a sníženou expresi _5 podjednotky GABAA receptoru. Léze se nerozšírila do dalších struktur a nemela vliv na GABAergní interneurony. Rozvoj poškození vyvolaného lézí byl doprovázen silnou aktivací mikroglie a...
|
|
|
Membránové vlastnosti neurálních kmenových/progenitorových buněk v průběhu in vitro diferenciace a po transplantaci do mozku potkana
Prajerová, Iva ; Chvátal, Alexandr (vedoucí práce) ; Vyklický, Ladislav (oponent) ; Mazurová, Yvona (oponent)
Cilem této pn\ce bylo obj~nl mechanismů diferenciace neurálnlch kmenovýchfprogenitorových buněk in l'Uro a jejich pfdlvání a diferenciace po transplantaci do poSkOWlé kůry mozku potkana. Pro identifikaci buněk byla použita imWlooistocbcmicU analým a změny v CJlpre5i Na' II K' napěťov! 2:livi$lých iootových kanál.1l. a recepton1 byly sledovány pomoci metody patch<lamp. Uk:mIli jsme, že NE-4C imonilizované neuráJ.nf kmenové buňky, které byly lJskány z neuroepitelia !l5J~eficientnlch mytich cmbryí devátý embryonální den (E9) II OlJUlčerly zeleným fluorescenčním proteinem (GFPINE-4C), majl schopnost diferenciace v nelll'Olly in vitro. Po tTIU1.~plnn"'lCi do fotochcmic~ lézc dávajl tyto buflky vznik llCurom1m, aSlrocyto.m i oligodendrocytOrn. Dále byly použily primAmi embryonálnl kmenové bui'iky i7.0lo\'lIné z embryi D6!CiFP myti, které oprimujl GFP pod D6 promotorem mDachJ genu. který se uplatJ\uje pti vývoji mozkové kňl')' a je specificlcy exprimován v neurnlnlch kmcoových buňkách mo7.kové kůry a ve v7.niklých neuronech, V EI2 obsahuje mozko," ktlra II těchto Iny~1 prevMllě proliferujlc/ neunilnl kmenové bullky, kleré je tak moroo na zákl!ldl: fluorescence GF!' izolovat. Uk:mIli jsme, 2e in \';"0 diferencujI tytO kmenové buňky ptevážnt v neurony, ale dávaj í YI.nik i GFAP (glial fibrilary lICidic...
|
|
| |
|
|
Studium modulace rekombinativních a nativních NMDA receptorů fyzikálními a chemickými faktory
Cais, Ondřej ; Vyklický, Ladislav (vedoucí práce) ; Blahoš, Jaroslav (oponent) ; Chvátal, Alexandr (oponent) ; Šťastný, František (oponent)
Většina excitačního synaptického přenosu v savčí centrální soustavě je zprostředkována ionotropními glutamátovými receptory. NMDA receptory, tvořící jednu ze tří tříd této skupiny chemicky aktivovaných iontových kanálů, se mimo to podílejí též na tvorbě paměti a procesu učení a hrají roli i v etiologii nejrůznějších neurodegenerativních onemocnění. Dosavadní znalosti o mechanismu funkce NMDA receptorů jsou vesměs založené na výsledcích in vitro experimentů prováděných při pokojové teplotě, tedy daleko od fyziologického stavu. Cílem této disertační práce bylo charakterizovat teplotní závislost NMDA receptorů. Stanovili jsme rychlostní konstanty popisující jednotlivé kroky v mechanismu aktivace rekombinantních NR1/NR2B receptorů v teplotním rozmezí 25-45řC. Nejvíce teplotně citlivými se ukázaly být procesy desenzitizace, resenzitizace a odvazování glutamátu. Dále jsme popsali teplotní závislost deaktivace v různých experimentálních modelech NMDA receptorů (rekombinantních i nativních). Druhá část disertační práce se zaměřila na modulaci funkce NMDA receptorů steroidními látkami odvozenými od endogenního neurosteroidu pregnanolonsulfátu. Otestovali jsme celkem 21 steroidů vyznačujících se různou mírou inhibice (a v jednom případě potenciace) proudových odpovědí NMDA receptorů. Powered by TCPDF (www.tcpdf.org)
|
|
|
Struktura funkce vaniloidního receptoru TRPV1
Sušánková, Klára ; Vlachová, Viktorie (vedoucí práce) ; Kršiak, Miloslav (oponent) ; Chvátal, Alexandr (oponent)
ZAVER S využitím elektrofyziologické techniky "patch clamp" jsme zjistili, že redukční a oxidační látky senzitizují aktivaci teplem u vaniloidního receptoru. Pomocí cílené mutageneze jsme určili cystein 621, který se významně podílí na potenciaci odpovědí vyvolaných teplem působením redukční látky dithiothreitol. Ukázali jsme, že extracelulární cysteiny (C616, C621 a C634) TRPV1 receptoru se neúčastní senzitizace odpovědí na teplo vlivem oxidačních látek. Pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie jsme prokázali, že oxidační látky ovlivňují koncentraci agonistů TRPV1 receptoru. Prokázali jsme, že oxidační komplex 1,10-fenantrolinu s měďnatými kationty (Cu:Phe) je blokátorem TRPV1 iontového kanálu. Inhibiční účinek Cu:Phe je vratný, koncentračně a napěťově závislý a není zprostředkován extracelulárními cysteiny. Ukázali jsme, že Cu:Phe blokuje i příbuzný iontový kanál TRPM8. Pomocí analýzy funkčních vlastností C-zkrácených variant TRPVI receptoru ahomologního modelu jsme popsali úlohu C-konce vaniloidního receptoru. Ukázali jsme, že se zkracující se C-terminálou TRPV1 receptoru klesají amplitudy membránových proudů vyvolaných aplikací všech testovaných podnětů (kapsaicin, snížené pH, depolarizační napětí a bolestivé teplo). Odstranění 31 aminokyselin vedlo významnému snížení teplotního prahu aktivace,...
|
|
|
Elektroencefalografické změny v animálním serotonergním modelu psychózy-studium EEG konektivity mozku ve vztahu k chování
Tylš, Filip ; Páleníček, Tomáš (vedoucí práce) ; Mareš, Pavel (oponent) ; Chvátal, Alexandr (oponent)
SOUHRN Předkládaná práce se zabývá elektrofyziologickými a behaviorálními koreláty účinku serotonergních psychedelik v rámci animálního modelu psychózy. V obecné části je popsána fenomenologie a neurobiologie psychotických onemocnění a změněných stavů vědomí způsobených intoxikací serotonergními psychedeliky. Dále se práce věnuje přehledu farmakologických modelů akutní psychózy se zaměřením na serotonergní látky, zejména pak aktivní látky z halucinogenních hub - indolamin psilocybin a jeho aktivní metabolit psilocin. Ve stručnosti je přiblížena je metoda kvantitativní elektrofyziologie (QEEG) a shrnuty hlavní nálezy v QEEG u zvířat i lidí způsobených intoxikací serotonergními psycheliky. Vlastní experimentální část práce popisuje farmakokinetiku psilocinu, jeho vliv na behaviorální vzorec, lokomoci a senzorimotorické zpracování informace a také pohlavní rozdíly v behaviorální odpovědi. Psilocin vedl k atypickým behaviorálním figurám, snížení lokomoce a narušení sezorimotorického zpracování informace ve střední dávce, přičemž samice byli k těmto účinkům rezistentnější. Dále se zaměřuje na dynamiku QEEG změn v čase (EEG absolutní výkonová spektra a EEG koherence) snímané z kůry mozku volně se pohybujícího laboratorního potkana v průběhu behaviorální inaktivity vyvolané intoxikací psilocinem a dalšími...
|
|
| |
|
| |
|
| |
|
| |
host ::
RSS.