|
| |
|
|
Study of interaction between protamine and heparin and its applicability in capillary electrophoresis
Martínková, Eva ; Křížek, Tomáš (vedoucí práce) ; Kubíčková, Anna (oponent)
Heparin je kyselá směs sulfatovaných polysacharidů (glykosaminglykanů) s velkou hustotou záporného náboje nacházející se přirozeně v lidském organismu. Díky své schopnosti vázat se na antithrombin III a tím urychlovat inhibici thrombinu má silné antikoagulační účinky, čehož se hojně využívá v klinické praxi při operacích, emboliích či infarktu myokardu. Protamin je naopak směs malých bazických peptidů využívaná jako antidotum při předávkování heparinem. To je možné díky elektrostatické interakci kladně nabitého protaminu se záporně nabitým heparinem. Této interakce se též využívá pro stanovení heparinu v plazmě či krvi pomocí afinitních metod. V rámci práce bylo zjištěno, že pokud jsou protamin s heparinem smíchány v jedné vialce, tvoří komplex, jehož výsledný náboj je dán vzájemným poměrem koncentrací protaminu a heparinu. Naopak v případě, že se protamin dávkuje jako vzorek a heparin je přidán do základního elektrolytu jako ligand vázající protein, je možné z úbytku plochy píku protaminu stanovit koncentraci heparinu. Kvůli složitosti interakce protaminu s heparinem byl pro zvýšení opakovatelnosti měření použit tetraarginin jako protaminu strukturně blízký model. Byla optimalizována metoda, která využívá 20 mM, resp. 60 mM kyselinu fosforečnou jako základní elektrolyt, roztok tetraargininu o...
|
|
|
Studium komplexace vortioxetinu cyklodextriny a jeho stanovení kapilární elektroforézou
Počtová, Žofie ; Křížek, Tomáš (vedoucí práce) ; Sobotníková, Jana (oponent)
V této práci je zkoumáno, zda tvoří aktivní látka vortioxetin supramolekulární komplex s nativními cyklodextriny (α, β, γ) a je zjišťováno, jakou hodnotu má konstanta stability vznikajícího komplexu. V úvahu je brána stechiometrie interakce cyklodextrinu s vortioxetinem 1:1 a 2:1. Výsledky naznačují, že u všech použitých cyklodextrinů je vhodnější uvažovat stechiometrický poměr cyklodextrinu k vortioxetinu 1:1 a že nejstabilnější komplex tvoří vortioxetin s β-cyklodextrinem. Dále je vyvinuta metoda stanovení vortioxetinu v tabletě s použitím kapilární elektroforézy v nevodném prostředí. Je ověřena preciznost, přesnost a robustnost metody a jsou určeny hodnoty meze detekce a meze kvantifikace. Jelikož je separace v kapilární elektroforéze založena na jiném principu než v HPLC, může tato metoda posloužit k ověření výsledků získaných na HPLC. Je zkoumána stabilita vortioxetinu za podmínek zvýšené teploty a vlhkosti ve formě prášku samotného vortioxetinu a vortioxetinu s excipienty.
|
|
|
Chirální separace diquatů a stanovení konstant stability jejich komplexů s cyklodextriny kapilární elektroforézou
Bílek, Jan ; Kašička, Václav (vedoucí práce) ; Jelínek, Ivan (oponent)
Kapilární zόnová elektroforéza byla využita pro chirální separaci jedenácti derivátů diquatu (DQ). Tyto N-heteroaromatické dikationty obsahující strukturní motiv 2,2'-bipyridinu jsou v současné době studovány pro své zajímavé redoxní vlastnosti a axiální chiralitu. Kombinace těchto vlastností může v budoucnu přinést zajímavé využití. Pro chirální separace DQ byly jako chirální selektory (CS) použity komerčně dostupné náhodně sulfatované α-, β-, a γ-cyklodextriny o vysokém stupni substituce (HS-α-CD, HS-β-CD, HS-γ-CD). Při použití všech uvedených CS bylo dosaženo velmi dobrého chirálního dělení. Separace enantiomerů na základní linii bylo dosaženo pro 82 %, 91 %, respektive 100 % analyzovaných derivátů DQ v přítomnosti HS-α-CD, HS- β-CD, respektive HS-γ-CD. Nejvyšších separačních účinností a rozlišení enantiomerů DQ bylo dosaženo při elektroforetické separaci v základním elektrolytu (BGE) obsahujícím 22 mmol/L NaOH, 35 mmol/L H3PO4 (pH 2,5) a 6 mmol/L HS-β-CD. Pomocí tří dostupných neracemických DQ byla provedena identifikace migračního pořadí jednotlivých M- a P-enantiomerů příslušných DQ. Metodou kapilární afinitní elektroforézy byly experimentálně zjištěny závislosti efektivní elektroforetické pohyblivosti enantiomerů DQ na koncentraci HS-α-CD, HS- β-CD, nebo HS-γ-CD v BGE. Efektivní pohyblivosti...
|
|
|
Stanovení komplexačních konstant metodou částečného plnění a analýzou průtokem způsobené disperze a jejich srovnání s hodnotami stanovenými metodou afinitní kapilární elektroforézy
Ansorge, Martin ; Ušelová, Kateřina (vedoucí práce) ; Křížek, Tomáš (oponent)
Ke stanovení komplexačních konstant modelového systému čtyř profenů (R-Flurbiprofen, S-Ibuprofen, S-Ketoprofen a S-Naproxen) komplexujících s β-cyklodextrinem byla využita metoda částečného plnění kapiláry (Patrial Filling method, PF) a analýza průtokem způsobené disperze (Flow Induced Dispersion Analysis, FIDA). Při využití metody částečného plnění, při které je jen část kapiláry naplněna selektorem a analyt tak musí migrovat nejprve zónou selektoru a následně zónou čistého základního elektrolytu (v obou zónách má rozdílnou pohyblivost), je sledována změna migračního času analytu v závislosti na délce zóny selektoru. Při analýze průtokem způsobené disperze, ve které je analyt protlačován kapilárou externím tlakem, je sledována míra disperze píku v závislosti na koncentraci selektoru v kapiláře. Průběh experimentů při PF metodě byl také teoreticky vyřešen za pomoci počítačového simulačního programu Simul 5 Complex. Hodnoty komplexačních konstant získané oběma metodami byly porovnány s hodnotami získanými běžně využívanou metodou afinitní kapilární elektroforézy (ACE). Porovnáním stanovených komplexačních konstant bylo zjištěno, že obě námi zkoumané metody poskytují srovnatelné výsledky s výsledky získanými metodou ACE.
|
|
|
Vliv interagující složky základního elektrolytu na elektroforetickou separaci
Müllerová, Ludmila ; Dubský, Pavel (vedoucí práce) ; Kašička, Václav (oponent) ; Petr, Jan (oponent)
Kapilární elektroforéza je široce používanou separační metodou analytické chemie. Pokud je do základního elektrolytu přidána interagující látka, selektor, lze tuto metodu využít i pro separace enantiomerů nebo látek s velmi podobnými fyzikálně-chemickými vlastnostmi. V analytické praxi se často využívají také směsi selektorů, jednak záměrně připravené pro dosažení lepší separace, jednak proto, že komerčně dodávané derivatizované selektory mohou být ve skutečnosti směsmi látek lišícími se stupněm derivatizace a polohou substituentů. Matematický popis elektromigrace analytu v systémech s více selektory může usnadnit hledání optimálních separačních podmínek a zároveň poskytuje užitečný vhled do mechanismu separace v těchto z aplikačního hlediska velmi významných systémech. V rámci této práce byl představen a experimentálně ověřen model elektromigrace analytu interagujícího se směsí dvou selektorů, který vychází z obecnějšího popisu systému s libovolným počtem selektorů. Tento model ukazuje, že směs, ve které se vzájemný poměr koncentrací selektorů nemění, lze pokládat za selektor jeden. V případě záměrné kombinace dvou selektorů lze pomocí tohoto popisu předpovědět, jak se budou separační schopnosti směsi měnit se změnou zastoupení obou selektorů, a zvolit nejvhodnější složení směsi i její celkovou...
|
|
|
Stanovení enzymové aktivity cellobiasy pomocí kapilární elektroforézy
Velvarská, Romana ; Křížek, Tomáš (vedoucí práce) ; Kubíčková, Anna (oponent)
Tato diplomová práce se zabývá optimalizací podmínek kapilární elektroforézy při separaci nezreagovaného substrátu a produktů (cellobiosa, glukosa), které vznikají při enzymovém štěpení cellotriosy enzymem cellobiasou. Jako optimální separační elektrolyt se ukázal roztok obsahující 30 mmol·dm-3 hydroxid sodný s přídavkem 1,0 mmol·dm-3 fosforečnanu sodného a 1,0 mmol·dm-3 hydrogenfosforečnanu sodného (pH = 12,38). S tímto separačním elektrolytem byly změřeny kalibrační závislosti, opakovatelnosti měření, zjištěny meze detekce a stanovitelnosti. Relativní směrodatné odchylky ploch píků se pohybovaly do 6,1 % a u migračních časů nepřesáhly hodnotu 0,2 %. Meze detekce byly stanoveny v rozmezí 0,020 - 0,026 mmol·dm-3 a meze stanovitelnosti od 0,066 mmol·dm-3 do 0,085 mmol·dm-3 . Následně byla sledována enzymová reakce v offline provedení. Dále bylo offline provedení automatizováno, kdy se relativní směrodatné odchylky ploch cellodextrinů po 30 minutách hydrolýzy pohybovaly do 13,0 % pro cellotriosu a glukosu, a do 3,0 % pro cellobiosu. Automatizovaná metoda je tedy vhodná pro semi-kvantitativní a srovnávací měření. Poslední částí experimentu byla snaha uskutečnit enzymové štěpení v online uspořádání, které bylo přes vyzkoušení všech možných variant mísení neúspěšné a nemohlo být použito k provedení...
|
|
|
Elektroforetické stanovení organických kyselin v průmyslových roztocích
Taraba, Lukáš ; Křížek, Tomáš (vedoucí práce) ; Sobotníková, Jana (oponent)
Tato práce se věnuje vývoji a optimalizaci podmínek úpravy vzorků dvou průmyslových pokovovacích roztoků obsahujících chromité ionty a kyselinu šťavelovou, maleinovou, octovou nebo citronovou a jejich následné elektroforetické analýze. Pro simulaci složité matrice reálných lázní byly připraveny modelové roztoky obsahující složky směsi o známé koncentraci. V rámci hledání předúpravy směsi zajišťující maximální účinnost vyvázání kyselin z jejich stabilních komplexů s chromitými ionty bylo testováno různé naředění roztoku a aplikace fluoridových, hydroxidových a EDTA aniontů jakožto vyvazujících činidel. Stanovení příslušných organických kyselin bylo provedeno technikou kapilární zónové elektroforézy s nepřímou UV detekcí při 350 nm s referencí při 230 nm. K separaci analytů byl použit komerčně dostupný základní elektrolyt určený k analýze pokovovacích roztoků (pH = 5,7). Jako nejvhodnější způsob vyvázání kyselin se ukázalo vysrážení chromitých iontů hydroxidem. Ke kvantifikaci byla použita metoda standardního přídavku. Koncentrace šťavelanu a citrátu v reálném vzorku odpovídala 96,50 % (SD = 0,71 %), respektive 97,53 % (SD = 0,79 %) deklarovaného množství. Při testování opakovatelnosti metody (n = 5) byla RSD migračních časů pro kyselinu citronovou i šťavelovou nižší než 0,51 %, RSD plochy píků...
|
|
|
Nově syntetizované permanentně pozitivně nabité monosubstituované deriváty beta-cyklodextrinu jako chirální selektory v kapilární elektroforéze.
Havlíková, Martina ; Bosáková, Zuzana (vedoucí práce) ; Čabala, Radomír (oponent)
Tato diplomová práce se zabývá využitím dvou permanentně kladně nabitých monosubstituovaných β-cyklodextrinových derivátů (PEMEDA-β-CD a PEMPDA-β- CD) jako chirálních selektorů v kapilární elektroforéze. Použití PEMPDA-β- cyklodextrinu v kapilární elektroforéze nebylo dosud v odborné literatuře uvedeno. Vlastnosti PEMEDA-β-cyklodextrinu byly již dřívě známé, ale jeho použití pro separaci enantiomerů aminokyselin a jejich derivátů ještě publikováno nebylo. Cyklodextrinové deriváty byly testovány jako aditivum v různých pufrech o různém pH s případnými přídavky organického modifikátoru. Jako vhodný základní elektrolyt, byl zvolen 15 mmol·l-1 borátový pufr o pH = 9,5 bez přídavku organického modifikátoru. Dále byl sledován vliv koncentrace chirálního selektoru na separaci a případnou enantioseparaci vybraných analytů. Přídavky cyklodextrinových derivátů se pohybovaly v rozmezí koncentrací 0,0 - 5,0 mmol·l-1 . Bylo otestováno čtrnáct anionogenních analytů, mezi ně patřily nativní aminokyseliny, N-blokované aminokyseliny a profeny, které byly detekovány pomocí UV-VIS detektoru při optimálních vlnových délkách 214, 254 nebo 280 nm. Oba chirální selektory byly vhodné pro enantioseparaci N-boc-D,L-tryptofanu, který se dělil na základní linii již při 0,5 mmol·l-1 koncentraci chirálního selektoru. U...
|
|
|
Elektroforéza v krátké kapiláře s duální detekcí.
Kaliba, David ; Opekar, František (vedoucí práce) ; Jelínek, Ivan (oponent)
Kapilární zónová elektroforéza je analytická metoda, která je hojně využívána v laboratořích při řešení řady analytických problémů. Tato diplomová práce popisuje jedno z mnoha využití kapilární elektroforézy v unikátní instrumentální sestavě tvořené krátkou kapilárou a duálním detektorem kombinujícím bezkontaktní vodivostní a optickou UV detekci v jednom místě separační kapiláry. V první části byla laboratorní sestava testována separací jednoduchých anorganických a organických iontů. Testovány byly obě části duálního detektoru pomocí sodných, draselných, tyraminových a histidinových iontů. Experimentálně zjištěné mobility použitých iontů byly srovnány s mobilitami vypočtenými z tabelovaných hodnot. V druhé části byla sestava vyzkoušena při analýze látek ve složitějších reálných matricích, tvořených lékovými formami Acylcoffinu a B-komplexu od společnosti Zentiva, a.s. Z každé lékové formy byl vybrán jeden analyt, kofein z Acylcoffinu a thiamin z B-komplexu, u kterého byla některou z kalibračních metod stanovena jeho koncentrace. Koncentrace vybraného analytu byla následně srovnána s deklarovanou hodnotou uvedenou výrobcem lékové formy. Klíčová slova: kapilární elektroforéza; krátká kapilára; bezkontaktní vodivostní detekce; UV detekce; biologicky aktivní látky.
|
host ::
RSS.